探討間接免疫熒光法檢測(cè)呼吸道病毒九聯(lián)檢的影響因素

馮艷鵬 皮敏

關(guān)鍵詞：間接免疫熒光;呼吸道病毒;影響因素

呼吸道感染有70%-80%由病毒引起的，包括腺病毒，冠狀病毒，腺病毒，流感病毒和副流感病毒，呼吸道合胞病毒?？刹《竞涂滤_奇病毒。另有20%-30%的呼吸道感染是由細(xì)菌引起的如：流感嗜血桿菌，嗜肺軍團(tuán)菌，肺炎鏈球菌，葡萄球菌等【1-1】。還有肺炎支原體，肺炎衣原體，立克次體，真菌等引起的感染。感染病原體種類多，不僅是單一病原體感染，還有混合多種病原體感染，病原體多種耐藥，給疾病的診斷和治療增加了難度。因此呼吸道病原體的及時(shí)檢測(cè)，對(duì)查出病原體診斷呼吸道感染性疾病具有重要意義。

檢測(cè)呼吸道病原體的方法很多，例如細(xì)菌及真菌的培養(yǎng)及藥敏，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，分子生物學(xué)等。細(xì)菌及真菌取決于標(biāo)本的采樣，病原體的營(yíng)養(yǎng)條件，生存環(huán)境，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，定植還是污染難以區(qū)分，檢測(cè)繁瑣等難以滿足臨床需要。一次…簡(jiǎn)便快速檢測(cè)出多種病原體的實(shí)驗(yàn)技術(shù)能夠?yàn)榕R床醫(yī)生的診斷提供很大的幫助。如鄭州安圖公司的呼吸道病毒九聯(lián)檢試劑采用間接免疫熒光法，引用進(jìn)口技術(shù)可在一張玻片上同時(shí)檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌，肺炎支原體，肺炎衣原體，Q熱立克次體，呼吸道合胞病毒，腺病毒，甲型流感病毒，乙型流感病毒，副流感病毒九種病原體，檢測(cè)采樣簡(jiǎn)單，操作容易，準(zhǔn)確可靠為臨床的診治提供有效的依據(jù)。呼吸道病毒九聯(lián)檢的檢測(cè)包括標(biāo)本的采集，標(biāo)本和試劑的平衡，加樣溫浴洗滌，晾片，封閉，閱片，結(jié)果判讀每個(gè)環(huán)節(jié)都至關(guān)重要，任何操作不當(dāng)都會(huì)影響結(jié)果的判讀主要有以下影響因素：

1 標(biāo)本的采集? 采集合格的標(biāo)本是保證質(zhì)量的前提。因?yàn)闃?biāo)本采集的是血清含有IgG和IgM，需要分離IgG，樣本乳糜溶血等，樣本量過(guò)少會(huì)無(wú)法完成檢測(cè)，帶入沉淀會(huì)假陽(yáng)性，過(guò)多會(huì)影響結(jié)果判讀的背景。加入吸附劑需要充分振蕩混勻，離心沉淀13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘。上清液中盡量不含有IgG.

2 試劑平衡，溫浴，加樣 試劑與標(biāo)本從冰箱取出后需要在室溫平衡30分鐘后再操作。溫浴第一次是抗原抗體的結(jié)合37℃90分鐘，水浴箱的溫度要及時(shí)檢測(cè)，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。 加樣時(shí)需加入檢測(cè)孔內(nèi)，不能觸及底部，更不能溢出，加樣槍及時(shí)校準(zhǔn)。

3 洗滌? 洗滌是檢測(cè)中最關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)，用磷酸鹽緩沖液沖洗時(shí)注意掌握力度，操作生不能直接對(duì)著檢測(cè)孔沖洗以免造成假陰性。放入洗盒后置水平搖床10分鐘，手工振蕩時(shí)頻率不能太快，以免洗掉反應(yīng)物造成假陰性。

4 晾干玻片時(shí)采用自然風(fēng)干，不能用熱的吹風(fēng)機(jī)吹，導(dǎo)致反應(yīng)物變性。

5 加封閉介質(zhì)，加太少導(dǎo)致視野不清楚。太多會(huì)溢出玻片影響閱片

6 鏡檢 玻片制備完畢后避光，熒光劑會(huì)見(jiàn)光分解變?nèi)酢ｇR檢集中閱片，最好在1小時(shí)內(nèi)看完，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)熒光會(huì)變?nèi)趸蛳?，?dǎo)致假陰性。如果不能及時(shí)閱片請(qǐng)放入2-8℃冰箱避光保存，24小時(shí)內(nèi)看完。

7 結(jié)果判讀：第10孔是對(duì)照孔，洗滌背景的好壞都取決于這一孔，當(dāng)然不排除抗核抗體陽(yáng)性標(biāo)本的干擾，嗜肺軍團(tuán)菌，肺炎衣原體，Q熱立克次體是黑色背景，需要熒光顯微鏡的亮度要足夠，仔細(xì)觀察成桿狀，點(diǎn)狀，球桿狀黃綠色熒光。肺炎支原體需要視野下50%視野整個(gè)細(xì)胞都有黃綠色熒光才是陽(yáng)性。甲型流感病毒，乙型流感病毒，副流感病毒存在相同的基因可能會(huì)有第7.8.9孔同時(shí)陽(yáng)性，察每個(gè)視野3-5個(gè)細(xì)胞熒光強(qiáng)度強(qiáng)者才是陽(yáng)性。還有存在加完熒光劑沉積在檢測(cè)孔邊緣，會(huì)導(dǎo)致邊緣效應(yīng)，一定要縱觀全片綜合判斷。

總之，間接免疫熒光法檢測(cè)呼吸道病毒九聯(lián)檢，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好，為臨床治療呼吸道感染提供可靠的依據(jù)。操作過(guò)程中重視檢驗(yàn)前，檢驗(yàn)中，檢驗(yàn)后的質(zhì)量控制注重每一個(gè)環(huán)節(jié)，才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。

參考文獻(xiàn)：

[1]王輝，任健康，王明貴 .臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].人民衛(wèi)生出版社.2015：49.

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