藥用植物燈盞花種子儲(chǔ)存條件及萌發(fā)特性研究

趙陸滟　李唯奇　王丹丹

摘要：? 該文以云南春季野外采收燈盞花種子為材料，研究了不同儲(chǔ)存濕度、儲(chǔ)存溫度、儲(chǔ)存時(shí)間及不同光照、溫度、吸脹條件等對(duì)其萌發(fā)率的影響。結(jié)果表明：（1）降低儲(chǔ)存濕度（15%RH）和儲(chǔ)存溫度（-20、4 ℃）有利于種子保存，種子壽命可延長(zhǎng)2 a多，萌發(fā)率在80%以上;高溫（35、45 ℃）和高濕（60% RH）加快了種子衰老，不利于保存，種子為短命種子。（2）光照與否對(duì)種子萌發(fā)率無顯著影響，為光中性種子，但光照有利于種子萌發(fā)后幼苗的形成。（3）25 ℃為該種子萌發(fā)的最適宜溫度，萌發(fā)率可達(dá)84.37%。（4）生產(chǎn)上播種時(shí)，盡量避免低溫（4 ℃）和高溫（30、35 ℃），有利于提高出苗率。（5）該種子對(duì)吸脹冷害不敏感，為抗冷型種子。因此，在種子研究和藥材生產(chǎn)上，成熟種子采收后應(yīng)及時(shí)干燥并密封存于低溫下，來年春季及早播種;在育苗生產(chǎn)上，應(yīng)提供適宜的光照條件，設(shè)置單獨(dú)的恒溫（25 ℃）育苗間，并避免低溫季播種。通過研究燈盞花種子的適宜儲(chǔ)存條件和萌發(fā)特性，為該珍稀藥用物種的合理儲(chǔ)存和高產(chǎn)栽培提供有效指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞： 燈盞花， 種子， 儲(chǔ)存條件， 萌發(fā)特性， 萌發(fā)率， 短命種子

中圖分類號(hào)：? Q945.34文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? A文章編號(hào)：? 1000-3142（2019）12-1636-12

Abstract：? Seeds of Erigeron breviscapus collected from Yunnan in spring were used as the test materials， the effects of storage humidity， storage temperature， storage duration and illumination， temperature， imbibitional condition on seed germination rate were studied. The results were as follows： （1） Reducing the storage humidity （15%RH） and the storage temperature （-20， 4 ℃） of the seeds was beneficial to the seed preservation， which could prolong the seed life to more than two years， and the germination rate could reach more than 80%; High temperatures （35， 45 ℃） and high humidity （60% RH） accelerated the aging of seeds， which was not conducive to preservation， so the seeds were short-lived seed. （2） There was no significance of germination rate in either light or dark， so the seeds were light-neutral， but light was beneficial to the seedling formation after seed germination. （3） The optimum temperature for the seed germination was 25 ℃， and the germination rate was 84.37%. （4） The low temperature （4 ℃） and high temperatures （30， 35 ℃） must be avoided for seed germination in production， which was beneficial to increase the emergence rate. （5） The seeds were insensitive to imbibitional damage， so the seeds were cold-resistant. Therefore， in seed research and production of medicinal materials， mature seeds should be dried and sealed in low temperature immediately after harvest， and sown early in spring; In seedling production， suitable lighting condition is necessary， a separate constant temperature （25 ℃） culture room should be set， and cold season sowing should also be avoided. This paper studying the suitable storage conditions and germination characteristics for the seeds of E. breviscapus， will provide effective guidance for the reasonable storage of the rare medicinal species and high yield planting in future studies.

Key words： Erigeron breviscapus， seed， storage conditions， germination characteristics， germination rate， short-lived seed

燈盞花（Erigeron breviscapus），又名燈盞細(xì)辛、短葶飛蓬，為菊科飛蓬屬多年生植物，在云南、四川、貴州、廣西、湖南及西藏等?。▍^(qū)）都有分布，是民族、民間常用中草藥（趙崢等，2013）。燈盞花首載于《滇南本草》《中國(guó)藥典》1977年版一部曾予以收載（馬宇輝等，2004）。藥物化學(xué)研究結(jié)果表明，燈盞花含有黃酮、植物甾醇、揮發(fā)油、焦性兒茶酚、氨基酸及微量元素等多種成分（劉宏等，2002）。其產(chǎn)品主要有浸膏、膠囊、針劑、片劑、沖劑及口服液等（趙猛等，2018）。其性寒、微苦、甘溫辛，具有微寒解毒、祛風(fēng)除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛的功效。目前燈盞花注射液在臨床上除主要用于心腦血管系統(tǒng)疾病外，在糖尿病、腎病、頸性眩暈、老年性疾病的治療上也有較好的療效（張俐等，2012）。燈盞花主要用于治療的心血管類疾病是世界第四大疾病，該類藥在國(guó)內(nèi)處于中西醫(yī)各占一半的狀況，其市場(chǎng)需求以每年15%～20%的比例持續(xù)增加（張薇等，2013）。近年來對(duì)燈盞花原分布區(qū)進(jìn)行資源調(diào)查時(shí)，已難見到成片分布的種群，野生分布頻度已接近稀少和枯竭（熊勇等，2012）。隨著市場(chǎng)需求的逐漸增加，野生優(yōu)質(zhì)種源已成為燈盞花藥業(yè)發(fā)展的瓶頸。

燈盞花在生產(chǎn)上主要以種子繁殖為主，自然條件下其種子發(fā)芽率保持時(shí)間為3～5個(gè)月。常溫下貯存其種子活力隨貯存時(shí)間而降低，平均壽命約為6個(gè)月（李鸝等，2005）。給種質(zhì)資源研究和藥材生產(chǎn)帶來很大困難。如果能對(duì)該物種進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存，不僅可以高效率、低成本地保存燈盞花的種質(zhì)資源，而且還可以給藥材生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)的燈盞花種子。由于種子儲(chǔ)存壽命是由儲(chǔ)存溫度和儲(chǔ)存濕度兩個(gè)重要因素決定的。因此，測(cè)定種子的最佳儲(chǔ)存溫度和濕度，是該物種有效儲(chǔ)存的關(guān)鍵。

種子能否萌發(fā)和產(chǎn)生正常幼苗，受外界生態(tài)條件如水分、溫度、氧氣、光照等條件的綜合影響，但充足水分、適宜溫度和足夠氧氣是種子萌發(fā)不可缺少的;某些種子萌發(fā)時(shí)，光也是一個(gè)必要因素（禹曉梅，2012）。本文主要探討了光照、溫度、吸脹處理對(duì)燈盞花種子萌發(fā)的影響。種子萌發(fā)可分為四個(gè)階段，即吸脹、萌動(dòng)、發(fā)芽、成苗階段。吸脹為種子萌發(fā)的第一階段，很多栽培植物種子在低溫下快速吸水會(huì)遭受吸脹冷害，不只是在高寒和低溫冷濕地區(qū)，在干旱地區(qū)早春灌溉播種時(shí)也同樣發(fā)生，敏感性種子更為突出。吸脹冷害是由低溫與快速吸水共同作用所產(chǎn)生的傷害，輕者影響成苗率，重者使種子失去活力，造成大面積缺苗，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失（禹曉梅，2012）。因此，確定燈盞花種子的需光特性，最佳萌發(fā)溫度及種子是否存在吸脹冷害對(duì)燈盞花的生產(chǎn)具有重要的指導(dǎo)作用。

近年來，關(guān)于燈盞花栽培、組培、藥理、提取等方面已經(jīng)有較多的研究（張俐等，2012;林麗飛等，2009;柯細(xì)彤等，2017;趙猛等，2018），但種子方面的研究報(bào)道較少（李鸝等，2005;曹琦等，2012;林麗飛等，2008），對(duì)其種子的儲(chǔ)存條件、需光特性、最佳萌發(fā)溫度以及吸脹冷害特性等未進(jìn)行系統(tǒng)研究。這些研究?jī)?nèi)容不僅具有重要的理論意義，同時(shí)對(duì)燈盞花的生產(chǎn)具有重要的指導(dǎo)作用。

1材料與方法

1.1 材料

選用2015年5月采自云南大理的野生成熟燈盞花種子為研究材料，種子保存于中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所西南野生生物種質(zhì)資源庫(kù)雙十五（15% Relative Humidity-RH， 15 ℃）種子干燥間，經(jīng)手工揉搓去掉冠毛，再使用種子重力分離機(jī)（Selecta Gravity Separator ZigZag-1， Machinefabriek BV Enkhuizen， Holland）去除雜質(zhì)和冠毛，挑選籽粒飽滿、無病蟲害、無破損的優(yōu)質(zhì)種子用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 種子形態(tài)觀察和質(zhì)量檢驗(yàn)

從清理干凈的種子中取部分樣品，使用解剖鏡觀察并進(jìn)行拍照。通過觀察種子形態(tài)特征，判斷種子飽滿度，測(cè)量種子長(zhǎng)度和寬度，確定種子大小。確定實(shí)驗(yàn)所用種子為飽滿無破損和未經(jīng)蟲食的種子。取部分測(cè)量種子千粒重（曹琦等，2012），并檢測(cè)種子初始萌發(fā)率：種子經(jīng)表面消毒后，點(diǎn)到MS培養(yǎng)基中，每皿種子為36～40粒，6個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)皿用封口膜封好，放置于25 ℃恒溫步入式培養(yǎng)間進(jìn)行萌發(fā)。光照萌發(fā)條件：光照強(qiáng)度為15 μmol·m-2·s-1、晝/夜光周期為12 h/12 h，記錄一個(gè)月后種子的萌發(fā)總數(shù)，計(jì)算種子萌發(fā)率（曹琦等，2012），以下檢測(cè)萌發(fā)率方法以此同。

1.3 種子最佳儲(chǔ)存條件的確定

1.3.1 低濕下不同溫度儲(chǔ)存處理種子存放于雙十五種子干燥間，用放置于恒溫房間（15 ℃）的密閉臺(tái)式水分活度儀（Hygrolab3-set40， Rotronic， Switzerland）進(jìn)行測(cè)量，當(dāng)濕度達(dá)到15%時(shí)，將種子分裝于30 mL裝有硅膠袋（硅膠袋先在15%相對(duì)空氣濕度中平衡）的小密封瓶里，再將種子分裝于5個(gè)1 L密封罐中，分別于-20、4、25、35、45 ℃條件下貯藏，儲(chǔ)存時(shí)檢測(cè)的萌發(fā)率設(shè)為對(duì)照（CK）、-20、4、25 ℃儲(chǔ)存30個(gè)月，每3個(gè)月檢測(cè)一次萌發(fā)率，-20 ℃小密封瓶的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)前一天需拿出到雙十五種子干燥間回溫;35、45 ℃儲(chǔ)存21周，分別于2、5、8、13、21周檢測(cè)萌發(fā)率。

1.3.2 高濕下不同溫度儲(chǔ)存處理在20 ℃條件下，用30%無水氯化鋰溶液平衡濕度（Hay et al.，2008），使用密閉臺(tái)式水分活度儀進(jìn)行測(cè)量，當(dāng)種子與周圍濕度平衡達(dá)到60%時(shí)，將種子進(jìn)行分裝，分別于-20、4、20、35、45 ℃恒溫下儲(chǔ)存，儲(chǔ)存時(shí)檢測(cè)的萌發(fā)率設(shè)為CK，-20、4、20 ℃儲(chǔ)存24周，分別于1～6、12、16、20、24周檢測(cè)萌發(fā)率，-20 ℃小密封瓶的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)前一天需拿出到雙十五種子干燥間回溫;35、45 ℃儲(chǔ)存12周，每1周檢測(cè)一次萌發(fā)率。

1.4 種子萌發(fā)需光特性的確定

設(shè)置光照條件為晝/夜光周期12 h/12 h和24 h全黑暗兩個(gè)處理，全黑暗處理?xiàng)l件下將點(diǎn)種后的培養(yǎng)皿包上錫箔紙并裝進(jìn)密封紙盒中放置于晝/夜光周期12 h/12 h下，檢測(cè)萌發(fā)率。

1.5 不同基質(zhì)上種子萌發(fā)最適溫度的確定

1.5.1 MS培養(yǎng)基上不同溫度梯度處理設(shè)置10、15、20、25、30、35 ℃六個(gè)溫度處理，把種子點(diǎn)到MS培養(yǎng)基上，每皿36粒，每個(gè)溫度6皿，分別在六個(gè)溫度暖白色熒光（光照強(qiáng)度15 μmol·m-2·s-1，晝/夜光周期為12 h/12 h）的條件下進(jìn)行萌發(fā)。

1.5.2 土壤上不同溫度處理設(shè)置4、25、30、35 ℃四個(gè)溫度處理，把種子點(diǎn)到腐殖土∶紅土=1∶1的土壤中，每盆36粒，每個(gè)溫度點(diǎn)6盆，分別在四個(gè)溫度暖白色熒光的條件下進(jìn)行萌發(fā)。

1.6 種子吸脹冷害的確定

種子分別經(jīng)表面消毒后進(jìn)行四種吸脹處理（禹曉梅，2012），各處理取36～40粒，6個(gè)重復(fù)，（1）溫浸：放到無菌的1.5 mL離心管中，在25 ℃的去離子水中浸泡;（2）冷浸：放到無菌的1.5 mL離心管中，在4 ℃的去離子水中浸泡;（3）溫濕吸脹：在25 ℃ 1%的瓊脂培養(yǎng)基上吸脹;（4）冷濕吸脹：在4 ℃ 1%的瓊脂培養(yǎng)基上吸脹。四個(gè)處理吸脹24 h后再置于MS培養(yǎng)基上，在25 ℃暖白色熒光的條件下進(jìn)行萌發(fā)。

1.7 種子表面消毒

種子表面消毒方法（禹曉梅，2012）：將種子放到1.5 mL離心管中，加入1 mL 75%（v/v）的乙醇，渦旋儀上渦旋4 min，離心棄上清液;加入1 mL 5%（v/v）的次氯酸鈉溶液，渦旋儀上渦旋4 min，離心棄上清液;加1 mL無菌水，渦旋洗滌2 min，離心棄上清液;無菌水反復(fù)漂洗種子3次，最后在離心管中加入1 mL無菌水。

1.8 MS培養(yǎng)基配制

MS培養(yǎng)基配制參照Murashige et al.（1962）的方法。大量元素母液（40X，25 mL·L-1，40倍的母液，每升培養(yǎng)基加25 mL母液）：MgSO4（7.22 g·L-1，每升培養(yǎng)基加7.22g MgSO4）、NH4NO3（66 g·L-1）、KH2PO4（6.8 g·L-1）、KNO3（76 g·L-1）、CaCl2（13.29 g·L-1）。微量元素母液（200X、5 mL·L-1）：MnSO4·H2O（3.380 4 g·L-1）、ZnSO4·7H2O（1.72 g·L-1）、H3BO3（1.24 g·L-1）、KI（0.166 g·L-1）、Na2MoO4·2H2O（0.05 g·L-1）、CuSO4·5H2O（0.005 g·L-1）、CoCl2·6H2O（0.005 g·L-1）。鐵鹽母液（100X、10 mL·L-1）：Na2-EDTA·2H2O（3.725 g·L-1）、FeSO4·7H2O（2.78 g·L-1）。有機(jī)元素母液（200X、5 mL·L-1）：煙酸（0.1 g·L-1）、硫胺素（0.02 g·L-1）、吡哆素（0.1 g·L-1）、甘氨酸（0.4 g·L-1）;肌醇母液（100X、10 mL·L-1）：肌醇（10 g·L-1）。所有母液混合后，加入蔗糖（30 g·L-1），先用去離子水定容，再調(diào)pH至5.85，最后加植物凝膠（3.5 g·L-1）。放到滅菌鍋中高溫高壓滅菌，滅菌條件：121 ℃，260 kPa，25 min。

1.9 相對(duì)濕度檢測(cè)和萌發(fā)率計(jì)算

使用放置于恒溫（15 ℃）房間的密閉臺(tái)式水分活度儀檢測(cè)種子儲(chǔ)存時(shí)的相對(duì)濕度（陳虹穎等，2011）。

種子萌發(fā)率（germination rate， GR）（曹琦等，2012）是用來檢測(cè)種子活力的一個(gè)常用指標(biāo)。種子的新鮮胚根伸出種皮視為已發(fā)芽，發(fā)芽開始后，每天記錄萌發(fā)的正常幼苗數(shù)直至無萌發(fā)種子出現(xiàn)為止。計(jì)算公式如下：

萌發(fā)率GR = （n/N）×100%

式中：n為最終達(dá)到的正常發(fā)芽粒數(shù);N為供試種子數(shù)。

1.10 數(shù)據(jù)分析

先采用Q校驗(yàn)去除異常值，再用SPSS 17.0數(shù)據(jù)分析軟件和T校驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性分析，最后利用GraphPad Prism 5.0、Adobe Photoshop CS6作圖軟件進(jìn)行作圖。

2結(jié)果與分析

2.1 種子形態(tài)及品質(zhì)

瘦果狹長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)1.5～2.0 mm，扁壓，背面常具1肋，全身被細(xì)小種毛，頂端有白色冠毛，剛毛狀。成熟種子飽滿，具有清亮光澤（圖1）。千粒重達(dá)0.2 g，初始萌發(fā)率為90.71%。

2.2 儲(chǔ)存濕度和溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響

2.2.1 在低濕下不同儲(chǔ)存溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響在低濕（15%RH）條件、-20 ℃下儲(chǔ)存3、6、15、18、21、24、30個(gè)月內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照無顯著差異，但9、12、27個(gè)月有顯著差異;4 ℃下儲(chǔ)存，3、6、12、18、21、27、30個(gè)月內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照無顯著差異，但9、15、24個(gè)月內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照存在顯著差異;25 ℃下儲(chǔ)存，3、6、9、18個(gè)月內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照無顯著差異，但12、15、21、24、27、30個(gè)月內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照存在顯著差異?？傮w看來，儲(chǔ)存30個(gè)月內(nèi)，不同溫度間萌發(fā)率基本無顯著差異，-20、4 ℃與對(duì)照在多數(shù)儲(chǔ)存時(shí)段無顯著差異，而25 ℃在多數(shù)時(shí)段顯著低于對(duì)照（CK），儲(chǔ)存30個(gè)月后，-20、4 ℃的萌發(fā)率分別達(dá)86.90%、84.84%，而25 ℃僅有79.25%。這表明低溫（-20、4 ℃）和低濕（15%RH）有利于延長(zhǎng)儲(chǔ)存的壽命（表1）。如果在室溫下儲(chǔ)存種子不超過兩年，可低濕（15%RH）密封儲(chǔ)存，降低生產(chǎn)成本，延長(zhǎng)種子生活力。

在低濕（15%RH）條件下，35 ℃儲(chǔ)存2～21周，45 ℃儲(chǔ)存2～13周，萌發(fā)率與對(duì)照均無顯著差異，但45 ℃儲(chǔ)存21周后萌發(fā)率與對(duì)照存在顯著差異。總體看來，在儲(chǔ)存的21周內(nèi)，除45 ℃儲(chǔ)存21周顯著低于對(duì)照外，35 ℃和45 ℃其他儲(chǔ)存時(shí)段與對(duì)照均無顯著差異，35、45 ℃儲(chǔ)存21周后萌發(fā)率分別為75.46%、68.98%（表2）。結(jié)果表明， 高溫（35、45 ℃）、低濕（15%RH）條件下短期內(nèi)儲(chǔ)存，種子的萌發(fā)率無顯著下降，但隨著儲(chǔ)存時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng)，萌發(fā)率會(huì)出現(xiàn)緩慢的下降，儲(chǔ)存溫度越高，下降越快。

2.2.2 高濕下不同溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響在高濕條件（60%RH）、-20 ℃下儲(chǔ)存1、2、5周，萌發(fā)率與對(duì)照有顯著差異，但2、3、4、6、12、16、20、24周無顯著差異;4 ℃下儲(chǔ)存1、4、5、6、12、16、20、24周，萌發(fā)率與對(duì)照有顯著差異，2、3周則無顯著差異;20 ℃下儲(chǔ)存，1、3、4、5、6、12、16、20、24周內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照有顯著差異，但在2周時(shí)無顯著差異?？傮w來看，儲(chǔ)存24周內(nèi)，不同溫度萌發(fā)率下降出現(xiàn)在儲(chǔ)存的第1周，-20 ℃在儲(chǔ)存的3至24周內(nèi)種子萌發(fā)率與對(duì)照基本無顯著差異，4、20 ℃在貯藏的24周內(nèi)萌發(fā)率下降顯著快于-20 ℃，-20、4、20 ℃儲(chǔ)存24周后的萌發(fā)率分別為76.39%、66.27%、62.96%。說明低溫（-20 ℃）、高濕（60% RH）條件下短期儲(chǔ)存，種子萌發(fā)率無顯著變化，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，萌發(fā)率逐漸下降，且4、20 ℃萌發(fā)率下降顯著快于-20 ℃（表3）。因此，高濕（60% RH）不利于儲(chǔ)存，如果條件限制，在高濕（60% RH）時(shí)短期儲(chǔ)存，可密封儲(chǔ)存于-20 ℃低溫下。

在高濕（60% RH）條件下，35、45 ℃儲(chǔ)存的12周內(nèi)萌發(fā)率與對(duì)照均有顯著差異，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，萌發(fā)率均顯著下降。35 ℃貯藏12周后萌發(fā)率從83.8%降到6.02%，45 ℃儲(chǔ)存6周后從83.8%降到0（表4）?？傮w來看，在儲(chǔ)存的12周內(nèi)，差異，不同字母代表有顯著差異（P<0.05）。下同。

35、45 ℃儲(chǔ)存1周后，萌發(fā)率開始下降，45 ℃儲(chǔ)存萌發(fā)率下降顯著快于35 ℃。

2.3 光照對(duì)種子萌發(fā)率的影響

光照條件下萌發(fā)率為84.37%，黑暗條件下為81.48%。光照與否對(duì)種子萌發(fā)率無顯著影響，種子為光中性種子（圖2，圖3）。從圖3可以看出，黑暗條件下萌發(fā)后幼苗黃化、瘦弱。因此，在種子萌發(fā)過程中應(yīng)提供適宜光照以利于幼苗生長(zhǎng)發(fā)育。

2.4 不同萌發(fā)基質(zhì)上不同溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響

2.4.1 MS培養(yǎng)基上不同溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響10、15、20、25、30、35 ℃條件下種子的萌發(fā)率分別為64.81%、70.56%、82.11%、84.37%、76.11%、69.91%。25 ℃時(shí)的萌發(fā)率顯著高于10、15、30、35 ℃，雖然與20 ℃時(shí)的萌發(fā)率無顯著差異（圖4），但幼苗較20 ℃整齊粗壯（圖5），說明，25 ℃為萌發(fā)最適溫度。

2.4.2 土壤上不同溫度對(duì)種子萌發(fā)率的影響4 ℃低溫下的種子萌發(fā)率為0，25 ℃為79.44%，30、35 ℃高溫分別為58.33%、31.11%。結(jié)果表明，低溫（4 ℃）、高溫（30、35 ℃）條件下萌發(fā)率均顯著低于25 ℃，且35 ℃的萌發(fā)率顯著低于30 ℃，4 ℃顯著低于35 ℃（圖6）。由圖7可知，35 ℃條件下種子萌發(fā)一個(gè)月后，幼苗基本死亡，說明35 ℃高溫不僅影響種子的萌發(fā)，還影響種子萌發(fā)后幼苗的成活。因此，25 ℃為土壤播種最適萌發(fā)溫度。

為驗(yàn)證土壤上4 ℃低溫、高濕（80%～90% RH）條件下放置一個(gè)月后未萌發(fā)的種子是否還具有生活力，把4 ℃下放置一個(gè)月后的種子再回放到25 ℃下繼續(xù)萌發(fā)，統(tǒng)計(jì)一個(gè)月后萌發(fā)率，萌發(fā)率為77.78%。結(jié)果表明，4 ℃下放置一個(gè)月后的種子再回放到25 ℃下的萌發(fā)率顯著高于4 ℃下放置一個(gè)月后的萌發(fā)率，而由圖6和圖7可知，4 ℃下放置一個(gè)月后的種子再回放到25 ℃時(shí)的萌發(fā)率與25 ℃常溫條件下的萌發(fā)率比較無顯著差異，因此，一個(gè)月的低溫、高濕條件雖然抑制了種子的萌發(fā)，延長(zhǎng)了種子的萌發(fā)時(shí)間，但并未對(duì)種子造成傷害，放到室溫后種子又能正常萌發(fā)和形成正常幼苗（圖8，圖9）。

2.5 不同吸脹處理對(duì)燈盞花種子萌發(fā)率的影響

4 ℃下，冷浸和冷濕吸脹24 h后萌發(fā)率分別為86.57%、87.22%;25 ℃下，溫浸和溫濕吸脹24 h后萌發(fā)率分別為88.42%、85.56%;快速吸脹（溫浸、冷浸）24 h后，4 ℃和25 ℃的萌發(fā)率分別為86.57%、88.42%;慢速吸脹（溫濕吸脹、冷濕吸脹）24 h后，4 ℃和25 ℃的萌發(fā)率分別為87.22%、85.56%。注： A. 10 ℃; B. 15 ℃; C. 20 ℃; D. 25 ℃; E. 30 ℃; F. 35 ℃ （標(biāo)尺為1.5 cm）。

Note： A. 10 ℃; B. 15 ℃; C. 20 ℃; D. 25 ℃; E. 30 ℃; F. 35 ℃ （Bar=1.5 cm）.

4種吸脹處理間萌發(fā)率無顯著差異（圖10，圖11）。因此，燈盞花種子不存在吸脹冷害，種子萌發(fā)初期對(duì)吸水溫度和吸脹速度不敏感，故為抗冷型種子。

3 討論與結(jié)論

對(duì)種子儲(chǔ)存的研究，在種子保藏庫(kù)中，15%相對(duì)濕度是種子儲(chǔ)存的最佳條件（Smith et al.，1992）。目前，45 ℃和60% RH是用于研究種子老化的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境（Hay et al.，2008）。本研究結(jié)果顯示，燈盞花種子在低濕條件下，總體耐儲(chǔ)存，-20、4 ℃貯藏最佳，原因可能是低溫下，種子呼吸作用變?nèi)?，種子內(nèi)儲(chǔ)存物質(zhì)消耗的速率變慢，利于種子生活力的保持，而低濕下，種子代謝速率比高濕下低，膜完整性以及各種酶的活性都得到了較好的保存，最大限度地保持了種子壽命;種子在高濕下，總體不耐儲(chǔ)存，45 ℃時(shí)萌發(fā)率下降最快，原因可能是高溫下，種子呼吸作用變強(qiáng)，種子內(nèi)儲(chǔ)存物質(zhì)消耗的速率變快，加快了種子的衰老，隨著種子含水量的增加，電解質(zhì)的滲透加強(qiáng)，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）等一系列抗氧化酶的活性下降，種子應(yīng)對(duì)氧脅迫的能力減弱，種子壽命縮短。在自然條件下，燈盞花種子采收后室溫儲(chǔ)存，種子不耐儲(chǔ)存的原因可能是采收后未經(jīng)干燥處理或儲(chǔ)存不當(dāng)。因此，在種子研究上，種子采收后應(yīng)及時(shí)存放雙十五干燥間，干燥后經(jīng)去雜處理存于密封罐中低溫儲(chǔ)存。在生產(chǎn)上，考慮到儲(chǔ)存條件的限制，應(yīng)選擇晴天采收成熟種子，采收后及時(shí)晾干存于密封袋中低溫儲(chǔ)存，保證來年生產(chǎn)上高質(zhì)量的種源，避免雨天采種，采后避免存放于溫?zé)岢睗竦沫h(huán)境中，造成生活力下降，優(yōu)質(zhì)種源受損。

種子壽命是從種子完全成熟到喪失生活力為止所經(jīng)歷的時(shí)間（申麗霞等，2004）。種子壽命的一般概念是指從種子采收到萌發(fā)率下降到50%所經(jīng)歷的時(shí)間，即種子的平均壽命，也稱半活期，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上種子壽命的概念是指在一定條件下種子萌發(fā)率能在80%以上的期限（孫長(zhǎng)生等，2016）。依據(jù)種子壽命的長(zhǎng)短，可將種子分為短命種子、中命種子和長(zhǎng)命種子3大類，短命種子的壽命一般在3 a以內(nèi)，壽命在3～15 a的屬中命種子，也稱常命種子，15 a以上的為長(zhǎng)命種子（申麗霞等，2004）。在目前報(bào)道的短命種子中，山豆根（Sophora tonkinensis）種子其壽命按一般標(biāo)準(zhǔn)為6個(gè)多月，按農(nóng)業(yè)生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)則為3個(gè)月，5 ℃的低溫儲(chǔ)存環(huán)境能延長(zhǎng)壽命3個(gè)月（孫長(zhǎng)生等，2016）;華北駝絨藜（Krascheninnikovia ceratoides）種子野外儲(chǔ)存一年種子活力降低至4%，高溫、高濕顯著影響種子活力，而低溫、低濕儲(chǔ)存顯著延長(zhǎng)種子的活力（何青山，2015）;蒙古柳（Salix linearistipularis）種子常溫下貯存45 d左右萌發(fā)率為3%，在80 ℃冷藏的種子1 a后仍有50%的發(fā)芽率（錢璐，2015）。據(jù)以上文獻(xiàn)報(bào)道可知，短命種子在室溫和自然條件下不耐儲(chǔ)存，種子的壽命一般在3 a以內(nèi)，低溫或干藏能顯著提高短命種子的壽命。燈盞花種子在室溫下儲(chǔ)存壽命較短，6個(gè)月后種子萌發(fā)率為53.3%，12個(gè)月后種子的萌發(fā)率僅為17.7%，4 ℃低溫儲(chǔ)存能顯著延長(zhǎng)其壽命至1 a多（李鸝等，2005）。在本研究中，低溫、低濕儲(chǔ)存環(huán)境能顯著延長(zhǎng)其壽命至2 a多，而高溫、高濕存放一周后萌發(fā)率就出現(xiàn)顯著下降。綜上所述，可推測(cè)燈盞花種子為短命種子。已有研究表明，燈盞花種子休眠特性不明顯（李鸝等，2005）。因此，在燈盞花實(shí)際育苗生產(chǎn)中，有條件的地方，最好隨采隨播，沒條件的地方，應(yīng)晾干后密封儲(chǔ)存于-20 ℃或4 ℃的低溫環(huán)境中，或者存于種子干燥箱中經(jīng)干燥處理后低溫密封儲(chǔ)存，來年春季應(yīng)及早播種。

光照對(duì)某些植物種子的萌發(fā)是必不可少的，不同植物的種子萌發(fā)對(duì)光照的要求也不同（韋春強(qiáng)等，2012）。本研究結(jié)果顯示，燈盞花種子無論在光照還是黑暗中都能萌發(fā)，但光照更有利于種子萌發(fā)后幼苗的形成，且萌發(fā)率相對(duì)較高。燈盞花為陽生植物，其種子萌發(fā)的需光性可能是一種適應(yīng)環(huán)境和充分利用環(huán)境的適應(yīng)性策略?？衫脽舯K花種子的需光特性，在生產(chǎn)上，選擇光照充足的山坡草地種植，避免林蔭下種植;播種土層不宜過深，播后覆蓋一層薄薄的細(xì)土，有利于種子萌發(fā)和壯苗的形成。

適宜的溫度促進(jìn)種子的吸水速度，加強(qiáng)酶促過程和呼吸作用、加速轉(zhuǎn)化儲(chǔ)藏物為可供利用的可溶性狀態(tài)（張德楠等，2013），進(jìn)而促進(jìn)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng);溫度過高或過低均對(duì)種子的萌發(fā)產(chǎn)生顯著影響（汪建軍等，2016; 李東霞等，2019）。通過本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)燈盞花種子萌發(fā)的適宜溫度為25 ℃，該結(jié)果與李鵬等（2005）的研究結(jié)果一致。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，在20～35 ℃內(nèi)，溫度的升高有利于燈盞花種子的提前萌發(fā)，這可能是燈盞花的生存策略之一。當(dāng)溫度降低時(shí)，延長(zhǎng)萌發(fā)時(shí)間，以度過不良環(huán)境，當(dāng)溫度升高，燈盞花則縮短萌發(fā)時(shí)間，搶占有利因素。因此把4 ℃低溫、高濕下放置一個(gè)月后萌發(fā)率為0的種子再轉(zhuǎn)移到25 ℃后并未影響種子的正常萌發(fā)和幼苗的形成。在生產(chǎn)上，為了獲得整齊、健壯的小苗，應(yīng)該設(shè)置單獨(dú)的恒溫（25 ℃）育苗間。

種子吸脹冷害是種子在低溫下的吸脹損傷（鄭光華等，2001）。吸水速度和溫度是吸脹冷害發(fā)生與否的兩個(gè)重要因素（陶宗婭等，2000）。本研究結(jié)果顯示，燈盞花種子不存在吸脹冷害。原因可能跟種子吸脹前的基礎(chǔ)含水量有關(guān)，種子含水量越低吸脹冷害越嚴(yán)重（陶宗婭等，2000），說明燈盞花種子的含水量可能在吸脹冷害的安全范圍內(nèi);也可能是因?yàn)榉N子在低溫過程中，同時(shí)存在生物膜的物理修補(bǔ)過程和生化修補(bǔ)過程，“雙修補(bǔ)”的完善度較好，而且細(xì)胞具有“封存”的持久效應(yīng)（鄭光華等，2001）。雖然燈盞花種子不存在吸脹冷害，但在燈盞花的大田生產(chǎn)中，播種應(yīng)避免低溫季，提高種植產(chǎn)量。

燈盞花作為一種市場(chǎng)需求量非常大的中草藥，近年隨著人工種植的逐年增加，急需大量?jī)?yōu)質(zhì)種源和種苗來滿足生產(chǎn)需求。本研究采用種子分離機(jī)技術(shù)和解剖鏡觀察法，降低了種子的空癟率，節(jié)省了儲(chǔ)存空間，減小了實(shí)驗(yàn)的誤差，為生產(chǎn)提供了優(yōu)質(zhì)的種子。本研究通過對(duì)儲(chǔ)存條件和萌發(fā)特性的系統(tǒng)研究，解決了燈盞花種子不耐儲(chǔ)存的難題，為科研和生產(chǎn)提供了經(jīng)濟(jì)高效的儲(chǔ)存方案，通過本研究的儲(chǔ)存方法，可將燈盞花種子儲(chǔ)存2 a多，萌發(fā)率仍在80%以上，該研究中可推測(cè)燈盞花種子為短命種子，這一推測(cè)為上述研究提供了一個(gè)新的證據(jù)，對(duì)于菊科種子的進(jìn)一步研究具有重要的意義，此推測(cè)也可為進(jìn)一步研究該物種種子提供一個(gè)新的線索;而種子最佳萌發(fā)條件的確定，為生產(chǎn)上播種和育苗提供了有效的指導(dǎo)，為燈盞花優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奠定了良好基礎(chǔ)。

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