固相萃取一高效液相色譜法測定液態(tài)奶中三聚氰胺含量

丁蘇會　刁玉華

摘要：經(jīng)過三氯乙酸、乙腈超聲震蕩離心提取，混合型陽離子交換固相萃取柱凈化后的樣品采用HPLC法測定。色譜條件：AgilentEclipseXDB-C8柱（4.6x250mm），流動相為乙腈一離子對緩沖液（pH=3.0），體積比]6：84，流速為1.OmL/min;檢測波長為240nm;柱溫40℃;進樣量為20μL。本法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.34%，最低檢出限為0.05 μ9/rnL，回收率為90%-]05%。本法操作簡便，樣品出峰快，經(jīng)濟省時，準(zhǔn)確可靠，適用于液態(tài)奶中三聚氰胺的含量測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;液態(tài)奶;三聚氰胺

一、實驗儀器與試劑

儀器。安捷倫Agilent1260高效液相色譜儀;電子天平;固相萃取柱;pH計;數(shù)控超聲波萃取器;可控溫震蕩箱;離心機（轉(zhuǎn)速不低于4000r/min）;漩渦混合器;電熱恒溫水浴鍋;超純水器。

試劑。甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）以及辛烷磺酸鈉（色譜純25g/瓶）;三氯乙酸（1%）;氨水：含量為25% - 28%;甲醇水溶液：甲醇+水（v/v體積比）=50+50;氨化甲醇溶液（5%）：氨水+甲醇（v/v體積比）-5+95;離子對緩沖液：準(zhǔn)確稱取2.lOg檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入980mL水溶解，調(diào)節(jié)pH至3.0，定容到IL備用。

二、樣品處理

提取。稱取2.Og（精確至O.Olg）試樣于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和SmL乙腈，超聲提取20min，再震蕩提取lOmin，以6000r/min離心20min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL濾液，用超純水定容至lOmL容量瓶中混勻做待凈化液。

凈化。將待凈化液轉(zhuǎn)移至已活化的固相萃取柱中，依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于50℃的水浴鍋上蒸干，殘留物用1mL流動相定容，渦旋混合1mm，過0.45μm微孔濾膜得試樣液供HPLC測定。

三、高效液相色譜法測定

色譜條件。色譜柱：AgilentEclipseXDB-C84.6×250mm;流動相：離子對緩沖液一乙腈（86+14，體積比），混勻。流速：1.OmL/min。柱溫：40℃。波長：240nm。進樣量：20μL。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到濃度為0.5、1、2、5、10、20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進樣進行檢測，如表1所示。

由表1可知，三聚氰胺的質(zhì)量濃度為0.5115μg/mL20.46μg/mL時，其峰面積y與其質(zhì)量濃度x（“g/mL）的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9996，線性回歸方程為：y=79.56526x-5.56393。

精密度實驗。取濃度為10.23μg/mL的三聚氰胺加標(biāo)點連續(xù)進樣6次，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），如表2所示。

由表2可知，高效液相色譜法測定液態(tài)奶中三聚氰胺含量的平均回收率為99. 19%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.34%，由此可知，本實驗方法的精密度良好，符合實驗?zāi)康募耙蟆?/p>

樣品檢測及樣品加標(biāo)實驗。選取市場上隨機抽檢的6批次牛奶作為實驗樣品進行檢測，結(jié)果如表3。

由表3可知，高效液相色譜法測定乳制品中三聚氰胺的回收率在90% - 105%之間，其分為低、中、高三個濃度梯度的平均回收率分別為103.7%、94.1%、99.2%。

檢出限。通過3倍信噪比計算得該方法的檢出限為0.05μg/mL。

四、結(jié)論

利用高效液相色譜法，采用固相萃取凈化樣品，離子對試劑緩沖溶液為流動相的方法對牛奶中的三聚氰胺進行檢測，試驗結(jié)果表明：回收率高，檢出限低，重現(xiàn)性好。同時該方法操作簡便，能夠準(zhǔn)確快速得到檢測結(jié)果，滿足食品檢測實際工作中對液態(tài)乳制品中三聚氰胺的檢測需要。