RNA結合蛋白HuR在胃癌中的表達和臨床意義

張小風 彭佑共 謝飛 裴芝皆 李曉暉

胃癌（Gastric carcinoma，GC）是最常見的消化道腫瘤之一。在我國，早期胃癌的診治率低于10%，進展期胃癌根治術后5 年生存率在30%左右[1-2]。臨床的實踐表明，胃癌的發(fā)病與治療仍存在“三高”和“三低”，即發(fā)病率高、死亡率高、轉移率高以及早診斷率低、切除率低、5 年生存率低。作為高發(fā)病率和高死亡率的惡性腫瘤之一，胃癌的發(fā)病機制迄今尚未能證明某單一因素可以作為胃癌的病因，胃癌在早期癥狀模糊和非特異性，與良性胃潰瘍的癥狀相似，因此容易被患者忽略或藥物治療而掩蓋，等到確診時80%～90%為進展期，出現(xiàn)淋巴結轉移甚至是遠處轉移，失去根治性切除的機會，故預后差，生存率低。胃癌的淋巴轉移是胃癌的主要轉移途徑，早期胃癌發(fā)生淋巴結轉移率近20%，進展期胃癌的淋巴轉移率高達70%左右。研究表明，胃癌的淋巴轉移是影響早期胃癌預后的重要因素[3-4]。因此，探討胃癌轉移的相關因素，早期預測淋巴結轉移風險，尋找新的治療思路，阻斷腫瘤轉移的發(fā)生對提高患者生存率具有十分重要的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集荊門市第二人民醫(yī)院2011 年1 月—2012 年6 月胃癌手術切除患者75 例。男性34 例，女性41 例；年齡36～78 歲，平均年齡（49.0±1.7）歲。其中有淋巴結轉移者36 例，無淋巴結轉移者39 例。根據(jù)美國癌腫聯(lián)合委員會（AJCC）2016 年胃癌TNM 分期（第八版更新）進行分期[5]：Ⅰ期30 例，Ⅱ期26 例，Ⅲ期15 例，Ⅳ期4 例。

1.2 方法

兔抗人多克隆HuR 抗體，購自上海奕馳生物科技有限公司。免疫組化試劑盒（PV-8000）：購自北京中杉金橋生物技術有限公司，根據(jù)試劑盒推薦的方法檢測HuR 蛋白的表達。

1.3 結果判定

參照Delellis[6]、饒鴻艷[3]等人提供的免疫組化半定量積分法來判斷免疫組化結果。免疫組織化學結果由染色強度和染色頻率兩者來評估，0～1 分為陰性，2～3 分為陽性。4～5 分，表示陽性（++）；6～7 分，表示陽性（+++）。HuR 在胞漿與胞核均有分布，陽性物質均呈黃-棕色顆粒。

1.4 統(tǒng)計學方法

SPSS13.0 統(tǒng)計軟件進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman 相關分析和Cox 回歸分析，生存分析采用Kaplan-Meier 曲線法和Log rank 檢驗。以P＜0.05 表示有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HuR 在胃癌組織中的表達

HuR 表達為粗細不一的淡黃或棕褐色顆粒，HuR 在腫瘤細胞中表達陽性，在癌旁間質細胞也有少量表達。在75 例胃癌組織標本中，49 例（65.3%）組織胞漿HuR 表達陽性，64 例（85.3%）胞核表達陽性。有2 例（2.7%）組織胞漿和胞核均未檢測到HuR表達。見表1。

2.2 胃癌組織中HuR 的表達與臨床病理特征的關系

圖1 HuR 胞漿、胞核均強陽性表達×10；圖2 HuR 胞漿弱陽性、胞核強陽性表達×10；圖3 HuR 胞漿陰性、胞核弱陽性表達×40；圖 4 HuR 胞漿、胞核均陰性表達×10；圖5 HuR 胞漿陰性、胞核強陽性表達×10；圖6 HuR 胞漿、胞核均弱陽性表達×40

在本研究中，胞漿HuR 表達水平與腫瘤大小、胃癌臨床分期和淋巴結轉移、遠處轉移明顯相關（P＜0.05），然而與患者的年齡、性別、組織學類型和組織分化程度無相關性（P＞0.05）。此外，胞核HuR 表達與所有的臨床病理學特征間均無相關性（P＞0.05）（表1）。

進一步將單因素分析中具有統(tǒng)計學意義的變量納入COX 多因素分析模型，結果表明，HuR 胞漿陽性（HR=1.854，95%CI=1.018-3.875；P=0.044）、腫瘤大?。℉R=1.303；95%CI=1.256-3.404；P=0.012）、臨床分期（HR=3.607；95%CI=1.729-7.526；P=0.001）是影響胃癌患者預后的獨立因素（表2）。以上結果提示，通過免疫組化檢測HuR 胞漿表達可以預測胃癌患者術后預后情況。

3 討論

胃癌其生物學行為具有很高的直接浸潤性和早期轉移傾向的特點。然而，對于胃癌細胞經(jīng)過淋巴道轉移的研究，卻相對滯后。因此，本文主要目的，通過分析HuR 在胃癌組織中的表達，來研究其對胃癌淋巴轉移的影響，并為臨床治療胃癌提供新的思路。

HuR 與腫瘤的發(fā)生和生長；ELAV 家族包括HuR、HuB、HuC和HuD。HuR 基因定位于染色體19q13.2，此處編碼眾多原癌基因產(chǎn)物；正常情況下，HuR 主要表達在細胞核，但在低氧、放射性損傷和細胞因子等刺激下可從細胞核轉運到細胞漿，通過RNA 識別基序（RRM）與多種mRNA3’端非翻譯區(qū)（3’UTR）的富含AU 堿基的序列（ARE）結合，使mRNA 從胞核轉運至胞漿的過程中保護mRNA 免受核酸酶降解，從而增加mRNA 的穩(wěn)定性。多種分子的mRNA，如介導細胞增殖的細胞周期蛋白cyclinA、cyclinB等都含有ARE，均接受ARE 結合蛋白（AUBP）的調控。HuR 通過與ARE 結合，增加上述因子mRNA 的穩(wěn)定性從而上調該因子蛋白的表達發(fā)揮相應的生物學效應；最初于1990 年在小細胞肺癌患者血清中被檢測到，后來研究發(fā)現(xiàn)，HuR 在肝癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌中表達異常[7-8]。HuR 通過促炎性因子和血管生成因子，如TNF-α、COX-2 和 VEGF 等，來調節(jié)關鍵的致癌過程[9-10]。Shang等[11]研究表明，HuR 的生物學作用是增強mRNA 的穩(wěn)定性。HuR非常重要、十分廣泛的作用是在轉錄后水平調控真核細胞基因表達，也是唯一可以增強mRNA 穩(wěn)定性的ELAV 家族蛋白；不僅參與了生物發(fā)育等正常生命活動，也在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用

表1 HuR 在胃癌中的表達及與臨床病理特征的關系（例）

表2 75 例胃癌患者總生存率的COX 模型多因素分析

HuR 在胃癌組織中的表達及其對胃癌浸潤、轉移的影響。在沈耿等的研究中[12]，發(fā)現(xiàn)胞漿HuR 表達而不是胞核HuR 表達與VEGF-C 表達顯著相關。在多種人類腫瘤中，VEGF-C 表達與淋巴結轉移和臨床分期密切相關，是評價患者預后的重要因素。HuR 通過調控mRNAs 穩(wěn)定性，使上皮細胞生長因子、粒細胞集落刺激因子的表達增加，促進細胞增殖。HuR 能穩(wěn)定并且增加低氧誘導因子（HIα-1）、血管內皮生長因子（VEGF）和環(huán)氧化酶-2（COX-2）的mRNAs 的表達，間接促進血管生成。因此，能確保腫瘤細胞的氧供與營養(yǎng)需要，從而促進腫瘤的生長、轉移與侵襲[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)75例胃癌中胞漿HuR陽性表達者為49例，共陽性率65.3%，胞漿HuR 表達陽性與胃癌腫瘤大?。≒=0.014）、淋巴結轉移（P=0.002）、TNM 分期（P=0.027）、遠處轉移（P=0.016）均顯著相關。進而說明：胞漿HuR 表達越強，HuR 的高表達，可能促進胃癌組織細胞的生長，胃癌的腫瘤越大；胞漿HuR 表達越強，HuR 的高表達，可能促進胃癌細胞的淋巴結轉移，淋巴結轉移越多；胞漿HuR 表達越強，HuR 的高表達，可能促進胃癌細胞的遠處轉移，遠處轉移越多；以上結果進一步證實了HuR 在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移中存在著相關性。推測HuR 正是通過多種方式，參與胃癌的淋巴管生成、腫瘤增殖，進而促進腫瘤的浸潤和轉移。

綜上所述，根據(jù)胞漿HuR 在惡性腫瘤中的過表達和它們的生物學功能以及在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移中存在著相關性；胞漿HuR 表達越強，HuR 的高表達，可能促進胃癌組織細胞的生長，可能促進胃癌細胞的淋巴結轉移，可能促進胃癌細胞的遠處轉移。因此，胞漿HuR 在胃癌中呈高表達，胞漿HuR 而不是胞核HuR表達與胃癌的腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM 分期、遠處轉移呈顯著正相關。在臨床上是否可以考慮通過抑制胞漿HuR 的表達，阻止胃癌組織細胞的生長、淋巴結轉移、遠處轉移等治療新思路、研究新方向。