MUC16促進肺腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移

陳永勝 賈小婷(通訊作者)

510095廣州醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所廣州惡性腫瘤治療轉(zhuǎn)化醫(yī)學重點實驗室，廣東廣州

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率均居于第一位的惡性腫瘤，其中40%左右肺癌患者屬于肺腺癌[1]。肺腺癌發(fā)病率和死亡率居高不下的主要原因是發(fā)生發(fā)展的機制尚未闡明，因此探討肺腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機制是臨床的重要研究課題。MUC16 屬于黏蛋白家族成員，能夠促進多種腫瘤發(fā)生發(fā)展，且MUC16 可調(diào)控順鉑和吉西他濱的化療耐受[2]，本文擬探討其在肺腺癌中的作用。

資料與方法

材料與試劑：本次研究所用試劑和材料主要包括肺腺癌細胞H1975(中國科學院上海細胞庫)、胎牛血清(美國Gibco公司)、1640 培養(yǎng)基(美國Gibco公司)和Transwell小室(美國Corning有限公司)。

方法：①細胞培養(yǎng)：將H1975 細胞接種于含10%胎牛血清的1640 培養(yǎng)液中，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；待細胞融合度達到80%以上，用于后續(xù)研究。②Transwell：將Transwell 小室放在24 孔板中，上室加入50 μL 無血清培養(yǎng)基，將其放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中水化基底膜30 min；將目標細胞消化，用1%血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整濃度至5×105個細胞/mL；吸去上層小室的液體，加入目標細胞200 μL，下層小室加入完全培養(yǎng)基500 μL，24 h 后，用甲醇室溫固定小室20 min，棉簽擦拭上層小室細胞，1%結(jié)晶紫染色細胞10 min，流動水沖洗小室，室溫晾干，拍照。每個實驗重復3次以保證結(jié)果的可靠性。

生物信息學：通過在線數(shù)據(jù)庫GEPIA(http ：// gepia.cancer-pku.cn/index.html)分析MUC16 的表達量及與預后的相關(guān)性。

統(tǒng)計學方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件分析，均用Mean±SD表示；兩組間比較用獨立樣本t檢驗，檢驗水準α=0.05。

結(jié) 果

通過在線數(shù)據(jù)庫GEPIA 發(fā)現(xiàn)MUC16在483例肺腺癌中的表達量遠高于在347例正常組織中的表達量。且MUC16 的表達量越高，肺腺癌患者預后越差(P=0.006 6)，見圖1。

以H1975 細胞作為對照組，在H1975 細胞中過表達MUC16(標記為H1975/MUC16 組)，Transwell 實驗發(fā)現(xiàn)與對照組相比，H1975/MUC16 組可明顯增加該細胞的侵襲能力。相反，在H1975細胞中敲低MUC16(標記為H1975/sh-MUC16 組)，Transwell 實驗發(fā)現(xiàn)與對照組相比，H1975/sh-MUC16組可明顯抑制該細胞的侵襲能力，見表1。

討 論

圖1 MUC16 在肺癌中高表達且與患者較差的預后正相關(guān)

MUC16在80%以上卵巢癌中高表達，且在子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和肺癌細胞中也有過表達[3-4]。我們通過統(tǒng)計GEPIA 數(shù)據(jù)庫信息發(fā)現(xiàn)，MUC16 在肺腺癌組織中的表達量顯著高于癌旁組織，且其高表達量與患者較差的預后呈正相關(guān)關(guān)系。細胞功能實驗證實，MUC16 能促進肺腺癌細胞的侵襲能力。有學者發(fā)現(xiàn)MUC16 能夠與β-catenin 結(jié)合，促進其從細胞質(zhì)移位到細胞核，從而促進下游致癌基因的表達[5]。研究發(fā)現(xiàn)MUC16可促進p120ctn遷移至細胞質(zhì)，活化RhoA/Cdc42 信號通路，從而促進卵巢癌細胞增殖和遷移[6]。后續(xù)，我們將深入驗證MUC16 通過何種方式促進肺腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移。

表1 MUC16影響H1975的侵襲能力