阿霉素誘導(dǎo)大鼠慢性心力衰竭模型的制備

馬琴

（山西醫(yī)科大學(xué)晉祠學(xué)院，山西太原 030025）

隨著慢性心力衰竭（CHF）發(fā)生率的升高，臨床上對于慢性心力衰竭的研究也愈漸深入，CHF動(dòng)物模型也逐漸在臨床實(shí)踐研究中得到應(yīng)用[1-2]。阿霉素誘導(dǎo)為目前臨床上常用的CHF建模方式，但其死亡率較高。故而，為探尋一種誘導(dǎo)成功率、動(dòng)物死亡率低的方式一直是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。本次研究中就幾種不同劑量阿霉素誘導(dǎo)大鼠CHF模型的情況進(jìn)行了對比分析，具體如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取70只Wistar雄性大鼠進(jìn)行研究，所有大鼠均為健康SPF級，均由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，大鼠體重最小220 g，最大250 g；動(dòng)物合格證號為：SCXK（川）2008-24；所有大鼠均進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)、正常自由飲水，大鼠所進(jìn)食的飼料均為標(biāo)準(zhǔn)合格大鼠飼料。

1.2 試劑與藥品

本次研究中所選用的鹽酸阿霉素均由深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格為10 mg/支，批號為1401E1；所選用的戊巴比妥鈉則由美國Sigma公司生產(chǎn)，CAS為69020100。

1.3 制備方法

所有大鼠均進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)，然后以隨機(jī)分組原則進(jìn)行分組，共分為7組，每組10只。利用生理鹽水將阿霉素配制成2 mg/mL的溶液，以大鼠體重為依據(jù)，阿霉素腹腔注射，進(jìn)行CHF模型制備；同時(shí)各組大鼠均定期進(jìn)行稱重，通常需每周稱重一次，以為下周用藥劑量提供依據(jù)。

對照組大鼠為進(jìn)行任何干預(yù)；模型A組，以1.25 mg/kg體重劑量注射阿霉素，2次/周，連續(xù)注射6周，累積用量為 15 mg/kg；模型 B 組以 1.5 mg/kg體重劑量注射阿霉素，2次/周，連續(xù)注射6周，累積用量為18 mg/kg；模型C組以2.00 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續(xù)注射6周，累積用量為12 mg/kg；模型D組以2.00 mg/kg體重注射阿霉素，前兩周每周2次，后四周每周1次，累積劑量為16 mg/kg；模型E組以2.5 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續(xù)注射6周，累積用量分別為15 mg/kg；模型F組以3 mg/kg體重注射阿霉素，1次/周，連續(xù)注射6周，累積用量分別為18 mg/kg。末次給藥后，常規(guī)飼養(yǎng)，對各組大鼠情況進(jìn)行觀察。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）體征觀察。對各組大鼠每天早、中、晚精神狀態(tài)、飲食情況、活動(dòng)情況、皮毛變化情況、呼吸頻率等進(jìn)行觀察。

（2）心功能指標(biāo)檢測。各組大鼠均末次注射停藥后1周時(shí)，以1.5%戊巴比妥鈉0.25 mL/100 g行腹腔注射麻醉；麻醉起效后，自大鼠頸部正中切開，促使大鼠左頸總動(dòng)脈充分暴露，并對其進(jìn)行鈍性分離，以動(dòng)脈夾夾住近心端，并進(jìn)行遠(yuǎn)心端結(jié)扎，然后以硬膜外麻醉導(dǎo)管制作心導(dǎo)管，外徑長度為1.0 mm，將心導(dǎo)管一端與bl-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接；對大鼠心率（HR）、左室收縮壓（LVSP）、左室舒張末壓（LVEDP）、舒張壓（DAP）、收縮壓（SAP）、平均動(dòng)脈壓（MAP）、左室壓力最大上升及下降速度（±dp/dtmax）進(jìn)行測定。

（3）對各組大鼠體重及心室質(zhì)量變化情況進(jìn)行比較，其中心室質(zhì)量包括左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）及右心室質(zhì)量指數(shù)（RVMI）兩項(xiàng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究中所涉及數(shù)據(jù)資料均以SPSS19.0處理，定量資料以均屬差表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，分類資料以（n，%）表示，進(jìn)行Χ2檢驗(yàn)，p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 行為體征觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，模型A組中1只大鼠死亡，模型B組中2只大鼠死亡，模型C組、D組中分別有2只、3只大鼠死亡；模型E組中6只死亡，模型F組中7只大鼠死亡。

各組大鼠實(shí)驗(yàn)前三周，體重均呈現(xiàn)增加趨勢，而從第三周開始，各組大鼠體重均開始逐漸下降，并可見藥物中毒現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)差、活動(dòng)能力下降、眼瞼分泌物增多、進(jìn)食量減少、脫毛、呼吸加快等，部分大鼠可見腹瀉癥狀。以模型E組及F組上述表現(xiàn)最為明顯，且可見腹部明顯膨隆、嚴(yán)重腹水、頸肩部與尾根部大面積脫毛現(xiàn)象。心功能檢測結(jié)束后，打開大鼠腹腔，可見明顯水腫現(xiàn)象。此外，模型E組與F組大鼠頸總動(dòng)脈鈍性分離后可見肌肉顏色泛白、頸動(dòng)脈管徑較細(xì)、彈性差、等現(xiàn)象；血流動(dòng)力學(xué)插管難度大，難以良好的把握腹腔麻醉劑量，且操作過程中兩組均有大鼠死亡現(xiàn)象發(fā)生，未采集到血液標(biāo)本，難以得到有效數(shù)據(jù)，故而未對該兩組大鼠進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2.2 心功能分析

與對照組比較，各模型組大鼠DAP及MAP均明顯下降，而LVEDP則均明顯升高（p＜0.05）；與對照組比較，模型A組、B組及D組大鼠SAP均明下降（p＜0.05），結(jié)果見表1。

2.3 各組大鼠體重及心室質(zhì)量對比

與對照組比較，模型A組、B組、D組大鼠體重及心室質(zhì)量均明顯升高（p＜0.05），結(jié)果見表2。

表1 各組大鼠心功能情況比較

表2 各組大鼠體重及心室質(zhì)量對比

3 討論

慢性心力衰竭為臨床常見病，是心血管疾病的終末期表現(xiàn)，也是導(dǎo)致心血管疾病患者死亡的一項(xiàng)重要因素，對人類健康的威脅極大[3]。以阿霉素制作實(shí)驗(yàn)性心力衰竭動(dòng)物模型為目前臨床上研究該病常用的途徑與手段，該模型制備方式因具有操作簡單、實(shí)用性強(qiáng)、費(fèi)用低等特點(diǎn)而逐漸在臨床上得到推廣與應(yīng)用[4]。但以阿霉素誘導(dǎo)大鼠心力衰竭的一項(xiàng)重要問題即動(dòng)物死亡率高，有研究支持，阿霉素誘導(dǎo)心力衰竭大鼠的死亡率可達(dá)到30%以上，這給研究造成了極大困擾?，F(xiàn)階段，臨床上以阿霉素誘導(dǎo)心力衰竭的大鼠模型制備方式較多，且單次用藥劑量也不盡相同，但臨床上尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[5-6]。故而，尋找一種誘導(dǎo)成功率高、大鼠死亡率低的制備方式為當(dāng)前關(guān)注的重點(diǎn)。

本次研究中將選取的大鼠隨機(jī)分為7組，并分別以不同劑量的阿霉素進(jìn)行誘導(dǎo)，與對照組對比結(jié)果可見，各模型組大鼠DAP及MAP均明顯下降，而LVEDP則均明顯升高（p＜0.05）；模型A組、B組及D組大鼠SAP均明下降（p＜0.05）；模型A組、B組、D組大鼠體重及心室質(zhì)量均明顯升高（p＜0.05）；提示阿霉素累積劑量在低于12 mg/kg時(shí)通常不易引發(fā)心衰，且以阿霉素誘導(dǎo)心衰，其結(jié)果與單次給藥劑量高低無較大關(guān)聯(lián)，而與其累積劑量有關(guān)。本次研究中模型E組與F組死亡率較高，并可見明顯腹水現(xiàn)象，提示阿霉素單次給藥劑量較高也可能會(huì)對心衰模型制備情況造成影響。研究顯示，心臟泵功能下降是導(dǎo)致心力衰竭的重要因素，而血流動(dòng)力學(xué)變化則是反映心臟泵功能的主要指標(biāo)。本次研究結(jié)果顯示，與對照組比較，各組大鼠動(dòng)脈舒張壓均明顯下降、LVEDP明顯升高，提示各模型組大鼠經(jīng)阿霉素誘導(dǎo)后均可見明顯的舒張功能障礙。且研究結(jié)果顯示模型A組、B組及D組大鼠還可見明顯動(dòng)脈收縮壓下降現(xiàn)象，但其LVSP則無明顯變化，提示在模型大鼠出現(xiàn)左室收縮功能不全前，心臟已可見明顯心肌肥厚及舒張功能障礙，因此有學(xué)者將LVEDP超過15 mmHg作為心衰造模成功的重要參考指標(biāo)[7]。

總而言之，多種劑量的阿霉素均可誘導(dǎo)大鼠慢性心力衰竭模型制備，但累積劑量在低于12 mg/kg時(shí)通常不易引發(fā)心衰。