應(yīng)用HPLC法同時(shí)測(cè)定15批次化妝品中氯二甲酚等5種限用防腐劑

漆愛明,肖樹雄

（廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510300）

在化妝品的生產(chǎn)、使用和保存過程中，為免受致病性和非致病性微生物污染，化妝品生產(chǎn)企業(yè)會(huì)添加各類防腐劑，這不僅可以延長(zhǎng)保質(zhì)期和貨架期，還能確保產(chǎn)品的安全性。但研究表明化妝品會(huì)引起過敏性和接觸性皮炎[1-2]等一系列副作用，甚至致癌[3-5]。

為加強(qiáng)對(duì)化妝品的衛(wèi)生監(jiān)督和日常管理，有必要開展化妝品中防腐劑含量檢測(cè)方法的開發(fā)研究，本文采用高效液相色譜法建立了對(duì)化妝品中5種防腐劑的快速測(cè)定方法，用本方法檢測(cè)了非蠟質(zhì)和蠟質(zhì)類兩類化妝品的15批次產(chǎn)品。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀配二極管陣列檢測(cè)器、Mettler Toledo XS205 和 Sartorius CPA224S 電 子天平、KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器、PB-10 pH計(jì)、LG10-2.4A離心機(jī)、渦流振蕩器（美國(guó)IFA公司）。

p-氯 -m-甲酚（Acros Organics，Product of ：BE，109480050）、芐氯酚（東京化成工業(yè)株式會(huì)社，C0161）、氯己定（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 11310000）、o-苯基苯酚（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 16070000）、氯二甲酚（東京化成工業(yè)株式會(huì)社，C0161）標(biāo)準(zhǔn)品（純度均大于96%）；甲醇和四氫呋喃（色譜純，德國(guó)Merck公司），實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；醇（2.1）+0.025 mol/L 磷酸二氫鈉水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.8），梯度洗脫。

1.3 5種防腐劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的線性范圍、回歸方程及相關(guān)系數(shù)

用甲醇（色譜純）作溶劑，稱取適量的各物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成5種防腐劑原混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將原混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，分別進(jìn)樣測(cè)定，線性范圍，線性方程見表1。

表1 種防腐劑的線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)

1.4 樣品來源及處理

樣品是在各大超市購(gòu)買的隨機(jī)15種樣品，15種樣品按種類分為非蠟質(zhì)（液體類、粉類、膏霜類）和蠟質(zhì)類，按不同類型分類統(tǒng)計(jì)分析。

1.4.1 不含蠟質(zhì)的化妝品

不含蠟質(zhì)的化妝品包括護(hù)膚類、香波、粉等。準(zhǔn)確稱取試樣約 0.4 g（精確至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加甲醇（色譜純）約5 mL，在漩渦混勻器上振蕩1 min，加入飽和氯化鈉溶液2 mL，用甲醇（色譜純）稀釋至 10 mL，混勻，超聲提取 15 min，再以 8 000 r/min離心 15 min，過 0.45 μm 濾膜，待測(cè)。

1.4.2 含蠟質(zhì)的化妝品

含蠟質(zhì)的化妝品包括唇膏、口紅等。準(zhǔn)確稱取試樣約 0.4 g（精確至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加四氫呋喃（色譜純）1 mL，在漩渦混勻器上振蕩1 min，加飽和氯化鈉溶液1 mL，用甲醇（色譜純）稀釋至10 mL，混勻，超聲提取 15 min，再以 8 000 r/min 離心 15 min，經(jīng)過0.45 μm濾膜，待測(cè)。若提取液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后濾液渾濁，則先將提取液用濾紙過濾后再經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

化妝品基質(zhì)復(fù)雜，尤其是唇膏和口紅化妝品采用低極性有機(jī)溶劑（如乙醚、正己烷等）提取時(shí)，樣品極難溶解甚至不溶；采用較強(qiáng)極性（甲醇、乙醇、四氫呋喃等）提取時(shí)，甲醇和乙醇分別作為提取試劑溶提取效果相當(dāng)，但樣品上機(jī)后用甲醇作為提取劑的峰形比乙醇作為提取劑的峰形更尖銳，靈敏度更高。用四氫呋喃作為提取劑的效果和峰形都很好，尤其對(duì)甲醇難容的含蠟質(zhì)的膏霜樣品效果顯現(xiàn)，但四氫呋喃對(duì)儀器管路的侵蝕比較厲害，綜合考慮以上情況，最終采取不含蠟質(zhì)的化妝品如護(hù)膚類、香波、粉等用甲醇提??；含蠟質(zhì)的化妝品如唇膏、口紅等先加1 mL四氫呋喃（色譜純）溶解樣品，再用甲醇定容萃取。

2.2 色譜柱的選擇

分析p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚5種物質(zhì)的本身性質(zhì)，同時(shí)考察了 RP-AMIDE C16、 資 生 堂 CAPCELL PAK C8 和Kromasil 100-5 C18三條柱子的柱效和耐酸堿度，Kromasil柱效及峰形對(duì)稱性好，化學(xué)穩(wěn)定性好，耐酸在 pH 1.5 ～ 9.5，最終選擇 Kromasil 100-5 C18 作為使用柱。

2.3 檢出限及定量限

將標(biāo)準(zhǔn)曲線的下限濃度逐級(jí)稀釋進(jìn)樣分析檢測(cè)，p-氯-m-甲酚檢出信噪比為3∶1時(shí)，p-氯-m-甲酚的檢出限濃度為0.188mg/L；芐氯酚檢出信噪比為3∶1時(shí)，芐氯酚的檢出限濃度為0.084mg/L；氯己定檢出信噪比為3∶1時(shí)，氯己定的檢出限濃度為0.327mg/L；o-苯基苯酚檢出信噪比為3∶1時(shí)，o-苯基苯酚的檢出限濃度為0.147mg/L；氯二甲酚檢出信噪比為3∶1時(shí)，氯二甲酚的檢出限濃度為0.196mg/L。p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚檢出信噪比10∶1時(shí)為定量下限，定量下限濃度分別為0.564mg/L、0.252 mg/L、0.981mg/L、0.441mg/L、0.441mg/L、0.588mg/L。檢出限，定量下限的進(jìn)樣體積分別為10μL，檢出限，定量下限的計(jì)算結(jié)果見表2。以樣品稱樣量為0.4 g，稀釋10倍計(jì)算本方法的檢出濃度與最低定量濃度，結(jié)果見表2。

2.4 實(shí)驗(yàn)的精密度的考察

分別平行測(cè)定高濃度（標(biāo)準(zhǔn)系列溶液4的濃度）6次作為本實(shí)驗(yàn)的精密度，本方法高濃度對(duì)應(yīng)的組分精密度都很好，相對(duì)偏差在0.4～1.1%，結(jié)果見表3。

2.5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性考察

加入量為高濃度(混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度4)時(shí)，5種成分的回收率范圍為103.7%～113.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%～2.5%。加入量為低濃度(混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度2)時(shí)，5種成分的回收率范圍為108.7%～119.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～3.4%，結(jié)果見表4。

表2 五種成分液相測(cè)定的檢出限、定量限、檢出濃度、定量濃度

表3 5種限用防腐劑高濃度精密度(n=6)

表4 2種基質(zhì)(非蠟狀和蠟質(zhì)類)的加標(biāo)回收率及重復(fù)性(n=6)

2.6 實(shí)際樣品的檢測(cè)

應(yīng)用所建立的方法，對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行了分析，樣品 1#、3#、4#、9#、10#、11#、12#、13#、14#、15#、16#均未檢出氯己定、芐氯酚、o-苯基苯酚、氯二甲酚和p-氯-m-甲酚。5#檢出有氯二甲酚、6#檢出o-苯基苯酚、7#檢出氯己定、8#檢出氯二甲酚，其它組分5#、6#、7#、8#均未檢出，結(jié)果如表5所示。

3 結(jié)論

采用HPLC同時(shí)測(cè)定2種不同基質(zhì)類型化妝品中的15批次化妝品的5種限用防腐劑的含量，該方法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，重現(xiàn)性好，各項(xiàng)指標(biāo)能夠滿足分析檢測(cè)化妝品中p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚5種限用防腐劑的需要。

表5 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果