補體片段C5a與系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其神經(jīng)系統(tǒng)損害的關(guān)系

朱桂晉，趙 冕，周 蕾

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科,天津300052）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種累及多器官、多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，其中神經(jīng)系統(tǒng)受累是SLE中的重癥，是SLE患者死亡的重要原因之一[1]，目前尚沒有用于診斷和評價神經(jīng)精神狼瘡（NPSLE）治療效果的特異性實驗室指標(biāo)。補體系統(tǒng)在SLE的疾病發(fā)生發(fā)展中起重要作用[2]，補體活化過程中的裂解片段C5a是具有介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫等生物學(xué)功能的糖蛋白[3-4]。國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)在SLE患者中血清C5a水平升高，特別是在有腎臟及神經(jīng)系統(tǒng)受累的患者中其升高水平更為顯著[5]；在人工構(gòu)建的體外血腦屏障模型中發(fā)現(xiàn)C5a可影響內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞骨架，從而改變血腦屏障完整性[6]。但C5a與SLE及其神經(jīng)系統(tǒng)受累的相關(guān)性研究目前國內(nèi)尚無報道。本研究旨在初步探討C5a與SLE及其神經(jīng)系統(tǒng)受累的相關(guān)性，評價檢測血清、腦脊液中C5a水平的臨床意義。

1 對象和方法

1.1 研究對象 SLE組：選取2017年8月-2018年6月于天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院并確診SLE患者23例，男2例，女21例，平均年齡（38±11）歲。其中確診NPSLE者16例：頭痛7例（43%），腦血管栓塞或狹窄4例（25%），脫髓鞘綜合征4例（25%），認(rèn)知功能障礙4例（25%），癲癇樣發(fā)作2例（12%），急性意識障礙2例（12%），無菌性腦膜炎1例（6%），情緒障礙1例（6%），單神經(jīng)病1例（6%），重癥肌無力1例（6%）。SLE的診斷參照2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[7]，NPSLE的診斷參照1999年ACR關(guān)于NPSLE的分類標(biāo)準(zhǔn)[8]。正常對照組：健康志愿者17例，男3例，女14例，平均年齡（26±4）歲。兩組間性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有入選者均排除既往曾明確診斷急性腎小球腎炎、動脈粥樣硬化、惡性腫瘤、合并其他自身免疫性疾病及近3月內(nèi)有感染性疾病病史的患者。所有患者自愿參加并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有研究對象均禁食8～12 h后次日清晨抽取肘靜脈血3～5 mL，分離血清。SLE患者于入院72 h內(nèi)行腰椎穿刺術(shù)檢查測定腦脊液壓力并留取腦脊液1～2 mL；NPSLE組患者中，依據(jù)病情，有8例患者行大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊(甲潑尼龍琥珀酸鈉 500～1 000 mg/d，靜脈滴注 3～5 d，后用藥劑量階梯式遞減)及免疫抑制劑（環(huán)磷酰胺400 mg，每周1次，靜脈滴注）治療，于第14天再次行腰椎穿刺術(shù)檢查留取腦脊液，并于當(dāng)日清晨取空腹靜脈血，分離血清。所有血清及腦脊液標(biāo)本-80℃冰箱保存。

1.2.2 實驗方法 采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）方法檢測血清及腦脊液C5a水平，試劑盒購自廈門慧嘉生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；治療前后比較采用配對t檢驗；相關(guān)分析采用Pearson直線相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE組與健康對照組血清C5a水平比較 SLE組血清C5a水平明顯高于健康對照組[（228.109±50.825）ng/mL 與（37.582±22.325）ng/mL，t=-16.009，P＜0.001] ，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 NPSLE組與非NPSLE組血清、腦脊液C5a水平比較 SLE患者中NPSLE組血清及腦脊液C5a水平明顯高于非NPSLE組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 SLE患者NPSLE組與非NPSLE組血清、腦脊液C5a水平比較（±s）Tab 1 Comparison of serum and CSF C5a levels between NPSLE group and non-NPSLE group in SLE patients（±s）

* 表示 P＜0.05；△表示 P＜0.01

項目 非N P S L E組 N P S L E組 t P血清C 5 a/（n g/m L）1 9 4.3 0 4±2 8.6 6 1 2 4 2.8 9 8±5 1.8 9 9-2.3 0 8 0.0 3 1*腦脊液C 5 a/（n g/m L）1.1 1 7±0.6 4 7 7.3 0 5±2.7 9 1-5.7 2 6 0.0 0 0△

2.3 NPSLE患者治療前后血清、腦脊液C5a水平比較 8例NPSLE患者經(jīng)大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療后較治療前腦脊液壓力明顯降低[（150±42）mmH2O與（216±66）mmH2O，t=-2.39，P=0.03] ，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。治療后血清及腦脊液C5a較治療前明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 NPSLE患者治療前后血清、腦脊液C5a水平比較（±s）Tab 2 Comparison of serum and CSF C5a levels before and after treatment in patients with NPSLE（±s）

表2 NPSLE患者治療前后血清、腦脊液C5a水平比較（±s）Tab 2 Comparison of serum and CSF C5a levels before and after treatment in patients with NPSLE（±s）

* 表示 P＜0.05；△表示 P＜0.01

項目 治療前 治療后 t P血清C 5 a/（n g/m L）2 5 3.1 7 5±5 2.7 3 4 1 9 5.8 6 8±3 1.4 6 1 3.2 6 3 0.0 1 4*腦脊液C 5 a/（n g/m L）7.6 1 5±2.5 6 2 6.0 5 2±2.4 1 4 4.4 2 6 0.0 0 3△

2.4 NPSLE患者血清C5a水平與腦脊液C5a之間相關(guān)性分析 NPSLE患者血清C5a水平與腦脊液C5a水平呈正相關(guān)關(guān)系，具有統(tǒng)計學(xué)意義。見圖1。

圖1 血清C5a與腦脊液C5a相關(guān)性分析Fig 1 Correlation analysis between serum C5a and CSF C5a

3 討論

補體系統(tǒng)在SLE的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用[2]。以往認(rèn)為補體C3的激活是補體激活效應(yīng)階段的共同始發(fā)點，隨著C3非依賴性凝血酶途徑的發(fā)現(xiàn)，補體片段C5a作為補體激活過程中重要的中間產(chǎn)物，已成為補體激活途徑新的始發(fā)點[9]，也成為近年來的研究熱點。它通過與其受體結(jié)合，在調(diào)節(jié)免疫、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等方面起著重要的作用。本研究中SLE患者血清C5a水平顯著高于對照組，與日本學(xué)者Sakuma等的研究一致[5]。C5a是補體裂解片段中過敏毒素作用最強的物質(zhì)，它可以直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加血管通透性。高濃度C5a是中性粒細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞和單核細(xì)胞重要的趨化劑，并通過催化中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的氧化代謝過程，促進溶酶體與細(xì)胞膜的融合，釋放溶酶體酶[4]。此外，C5a可明顯增強免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)單核細(xì)胞分泌白介素IL-1、IL-6、IL-8及腫瘤壞死因子α、炎性細(xì)胞因子等[10]，并激活 NF-κB 信號通路[11]，增強局部組織炎癥反應(yīng)，對細(xì)胞及組織造成損傷。

SLE患者中NPSLE的發(fā)病率約14%～75%，是SLE患者致殘或致死的重要原因之一，嚴(yán)重影響SLE患者預(yù)后，早期診斷和治療非常重要[1]。但NPSLE的疾病譜廣，診斷困難。以往研究多集中在影像學(xué)檢查及腦脊液自身抗體的檢測。然而，迄今尚無可用于診斷和病情評估的特異性實驗室指標(biāo)。本研究對23例SLE（其中 NPSLE16例，非NPSLE7例）患者的血清和腦脊液進行了C5a檢測，發(fā)現(xiàn)NPSLE患者的血清及腦脊液中C5a水平均高于非NPSLE患者，且NPSLE患者的血清和腦脊液C5a水平正相關(guān)。如前所述，補體活化過程中產(chǎn)生的片段C5a具有調(diào)節(jié)免疫、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)等生物學(xué)功能。美國及澳大利亞學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)C5a可降低人微血管內(nèi)皮細(xì)胞中調(diào)節(jié)蛋白如封閉蛋白5（claudin5）和閉合蛋白occludin的表達，從而增加微血管通透性[6]，導(dǎo)致SLE患者的血腦屏障被破壞。這一機制在MRL/lpr狼瘡小鼠模型中得以印證[12]。SLE疾病活動狀態(tài)下，免疫炎癥反應(yīng)活躍，外周血中大量炎癥細(xì)胞可以通過其衍生的蛋白酶切割C5來產(chǎn)生C5a[10]，升高的C5a加劇血腦屏障的破壞并進入到腦脊液中造成局部炎癥反應(yīng)及組織損傷。本研究中8例NPSLE患者進行大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊及免疫抑制劑治療后血清及腦脊液C5a水平明顯下降。大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊及免疫抑制劑治療后患者體內(nèi)的炎癥瀑布反應(yīng)被迅速抑制，C5a的產(chǎn)生減少，血清及腦脊液中C5a水平也相應(yīng)降低，被破壞的血腦屏障得以修復(fù)。

綜上所述，SLE患者血清C5a水平升高，且NPSLE患者血清及腦脊液C5a水平均高于非NPSLE患者，提示C5a參與了SLE的疾病過程，尤其在SLE患者的神經(jīng)精神并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。經(jīng)大量糖皮質(zhì)激素沖擊及免疫抑制劑治療后NPSLE患者血清及腦脊液C5a水平降低，提示監(jiān)測血清及腦脊液中C5a水平對于評價NPSLE病情及療效評估具有一定的臨床意義。