珠子草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及HPLC指紋圖譜研究

潘新波 王信 薩日娜 李彩東 張偉

摘要：目的? 建立珠子草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及HPLC指紋圖譜，探討不同產(chǎn)地珠子草藥材成分的差異性。方法? 分別從性狀、鑒別、檢查和浸出物、含量測定方面對珠子草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。采用ZORBAX Eclipse plus C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m），以乙腈-0.1%磷酸水溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，柱溫25 ℃，檢測波長270 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 ?L，對10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草藥材進(jìn)行測定;采用相似度分析和主成分分析對指紋圖譜進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果? 擬定了珠子草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，建立了10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草藥材的HPLC指紋圖譜，確定了8個(gè)共有峰，指認(rèn)了短葉蘇木酚和柯里拉京2個(gè)特征峰。不同產(chǎn)地珠子草的化學(xué)成分組成及含量存在一定差異，其中柯里拉京可作為區(qū)別產(chǎn)地的特征性物質(zhì)。結(jié)論? 本研究建立的定性定量檢測方法操作簡便、準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可作為珠子草藥材的質(zhì)量控制方法;建立的珠子草HPLC指紋圖譜可為該藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供參考。

關(guān)鍵詞：珠子草;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);高效液相色譜法;指紋圖譜;相似度分析;主成分分析

中圖分類號：R282??? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A??? 文章編號：1005-5304（2019）07-0066-07

Abstract： Objective To establish the quality standards and HPLC fingerprints of Phyllanthus niruri Linn.; To study the differences in the components of Phyllanthus niruri Linn. from different producing areas. Methods The quality standards of Phyllanthus niruri Linn. was studied from characters， identification， inspection with extract， and content determination. The HPLC separation was performed on ZORBAX Eclipse plus C18 column （250 mm × 4.6 mm， 5 ?m）. The mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid water in gradient elution; the column temperature was 25 ℃; the detection wavelength was 270 nm; the flow rate was 1.0 mL/min; the sample volume was 10 ?L. Phyllanthus niruri Linn. from ten different producing areas were determined; similarity analysis and principal component analysis were used to analyze the fingerprints. Results The quality standard of Phyllanthus niruri Linn. was drafted. The HPLC fingerprints of Phyllanthus niruri Linn. from ten different producing areas were established with eight common peaks， and two characteristic peaks included brevifolincarboxylic acid and corilagin were confirmed. There were some differences in the chemical components and content of Phyllanthus niruri Linn. from different producing areas， of which corilagin could be used as the characteristic material to distinguish the difference of producing areas. Conclusion The qualitative and quantitative determination method is simple， accurate and reliable， with good stability and reproducibility， which can be used for the quality control of Phyllanthus niruri Linn. The established HPLC fingerprints can be used for the identification and quality control of Phyllanthus niruri Linn.

Keywords： Phyllanthus niruri Linn.; quality standards; HPLC; fingerprints; similarity analysis; principal component analysis

珠子草Phyllanthus niruri Linn.為大戟科葉下珠屬植物，又名月下珠、小返魂、霸貝菜，全草入藥，是印度與我國的傳統(tǒng)民間草藥，具有平肝清熱、利水解毒功效，臨床用于治療肝炎、腸炎、尿路感染、無名腫痛及糖尿病等[1-2]。研究顯示，珠子草主要活性成分為多酚類及木脂素類，其中多酚類包括柯里拉京、沒食子酸和鞣花酸等[3-4]。迄今對珠子草藥材的基礎(chǔ)研究主要集中在化學(xué)成分、藥理作用及機(jī)制方面，臨床研究主要集中在抗乙肝病毒、改善肝功能和抗肝細(xì)胞纖維化等方面[5-7]，而針對珠子草有效成分含量、質(zhì)量綜合評價(jià)與控制的研究相對較少，限制了珠子草藥材的應(yīng)用和開發(fā)。珠子草曾收載于地方標(biāo)準(zhǔn)2005年版《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，只有簡單的性狀描述等，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善。為了更好開發(fā)利用珠子草，合理評價(jià)和控制該藥材的質(zhì)量，對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高和系統(tǒng)性研究尤為必要。

本課題組前期對珠子草藥材進(jìn)行了生藥學(xué)鑒別研究[8]，基于此，本試驗(yàn)依據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究制定技術(shù)要求，對珠子草藥材進(jìn)行深入的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，并建立10個(gè)不同產(chǎn)地的珠子草藥材HPLC指紋圖譜，進(jìn)行相似度分析和主成分分析，比較不同產(chǎn)地珠子草藥材HPLC成分差異性，為更好地控制珠子草藥材質(zhì)量提供依據(jù)。

1? 儀器與試藥

美國Agilent 1260高效液相色譜儀（四元梯度泵，DAD檢測器，OpenLAB色譜工作站），XPE105十萬分之一電子分析天平（梅特勒托利多公司），KH-100E超聲波提取器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），BX51生物顯微鏡（日本Olympus公司），WH-43電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），TDW箱式電阻爐（上海東星建材試驗(yàn)有限公司），XMTD-204恒溫水浴鍋（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司）。

短葉蘇木酚對照品（德爾塔林試劑公司，批號18490-0805，純度≥98%），柯里拉京對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111623-200302，純度≥98%），鞣花酸對照品（天津一方科技有限公司，批號00597，純度≥97%），珠子草對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號121319-200301），乙醇（分析純，天津市紅巖化學(xué)試劑廠），鹽酸（分析純，北京化工廠），磷酸（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），乙腈（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司），甲醇（色譜純，深圳西隴化工股份有限公司），薄層硅膠G板（青島海洋化工集團(tuán)公司），水為超純水，其他試劑均為分析純，無灰濾紙（杭州特種紙業(yè)有限公司）。10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草藥材樣品來源見表1，經(jīng)西北師范大學(xué)王慶瑞教授鑒定為大戟科葉下珠屬植物珠子草Phyllanthus niruri Linn.的全草。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 性狀

本品長短不一，高20～70 cm，根外表棕色至紅棕色，直徑2～6 mm，有縱紋，質(zhì)硬、脆易折，折斷面棕色至灰綠色;主根不發(fā)達(dá)，須根多數(shù)，淺灰棕色。莖圓柱形，略帶褐紅色，直徑1～4.5 mm，有縱皺紋，體輕，質(zhì)脆，易折斷，斷面灰綠色，髓部中空。單葉互生，葉片紙質(zhì)，長圓形，長約4～10 mm，寬約2～4.5 mm，葉柄極短，托葉披針形?；?xì)小，腋生于葉背之下。蒴果扁圓形或略呈圓三角形，直徑1～1.5 cm，紅褐色，平滑無毛，軸柱及花萼均宿存;種子6枚，三角狀卵形，淡黃色或灰黃色，背側(cè)為上下縱紋，側(cè)面為同心圓狀紋理。以葉多、青綠色者為佳。氣微香，味苦。

2.2? 鑒別

2.2.1 ?顯微鑒別

根橫切面：表皮為3～4列長方形細(xì)胞，切向排列。皮層較寬，少有裂隙，由數(shù)列疏松的薄壁細(xì)胞組成。韌皮部狹窄，呈環(huán)帶狀，韌皮射線不明顯，篩管散列，內(nèi)含黃棕色分泌物。形成層呈環(huán)狀，為一列扁平細(xì)胞。初生木質(zhì)部導(dǎo)管較集中，次生導(dǎo)管稀疏略呈放射狀排列，射線細(xì)胞1～2列徑向延長，導(dǎo)管多角形，直徑8.4～39.0 ?m。木質(zhì)部寬廣，木射線密集，由1～2列細(xì)胞組成，射線間嵌有導(dǎo)管、木纖維及木薄壁細(xì)胞，導(dǎo)管單個(gè)或2～7個(gè)徑向相聚成群、呈放射狀排列，外側(cè)常有木纖維嵌于導(dǎo)管群間，薄壁細(xì)胞含淀粉粒。

莖橫切面：表皮3～4列細(xì)胞，類方形，常脫落。皮層5～7列類圓形、矩圓形細(xì)胞，排列較疏松。韌皮部約6列類圓形、類多角形細(xì)胞，篩管內(nèi)充滿分泌物。形成層為一列小型細(xì)胞，環(huán)狀排列。木質(zhì)部寬廣，導(dǎo)管稀疏，木射線明顯。薄壁細(xì)胞呈環(huán)狀分布，木質(zhì)部纖維發(fā)達(dá)，壁極厚，胞腔狹小。射線細(xì)密，1～3列長方形細(xì)胞徑向延長。髓部薄壁細(xì)胞類圓形，排列疏松，髓中央常呈空腔。

粉末特征：全草粉末灰綠色，味苦。木纖維常成束，黃色或淡黃色，斷端平截或縱成帚狀，直徑7.8～18.2 ?m，長80.6～447.2 ?m。草酸鈣簇晶散在或存在于葉肉組織中，直徑10.4～28.6 ?m;草酸鈣方晶眾多，不規(guī)則，呈四面體、錐形、斧形等，直徑5.2～26 ?m。葉上下表皮細(xì)胞多角形，周壁彎曲，下表皮氣孔密集，氣孔不定式或不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3～4個(gè)。淀粉粒單粒，稀復(fù)粒，類圓形，臍點(diǎn)裂縫狀、人字狀等，大小不一，直徑5.2～18.2 ?m[8]。

2.2.2? 薄層鑒別

取本品粉末1 g，加甲醇20 mL，超聲（功率800 W，頻率50 kHz）處理10 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取珠子草對照藥材粉末1 g，照供試品溶液制備方法制成珠子草對照藥材溶液。照薄層色譜法（2015年版《中華人民共和國藥典》通則0502）試驗(yàn)，依次吸取對照藥材溶液和供試品溶液各10 ?L，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯-冰乙酸（5∶1∶1∶0.1）為溶劑上行展開，取出，揮干溶劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。見圖1。

2.3? 檢查和浸出物

2.3.1? 雜質(zhì)

按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則2301雜質(zhì)檢查法，取供試品約5 g，稱定質(zhì)量，用肉眼或借助放大鏡（5～10倍）觀察，將雜質(zhì)（泥土、其他等）揀出;如其中有可以篩分的雜質(zhì)，則通過適當(dāng)?shù)暮Y，將雜質(zhì)分出。將各類雜質(zhì)分別稱重，計(jì)算，結(jié)果見表2。10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草藥材樣品雜質(zhì)含量在2.02～3.10%之間，應(yīng)將其雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)在其平均值2.41%的基礎(chǔ)上上浮20%，故將雜質(zhì)含量暫定為不得超過3.0%。

2.3.2? 水分、灰分及浸出物

按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則0832第二法烘干法測定水分;按通則2302灰分測定法測定總灰分和酸不溶性灰分;按通則2201浸出物測定法冷浸法，用乙醇作溶劑，測定醇溶性浸出物。結(jié)果見表3。

2.4? 含量測定

2.4.1? 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse plus C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）;流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～20 min，3%～15%A;20～45 min，15%～28%A;45～60 min，28%～45%A）;流速：1 mL/min;柱溫：25 ℃;檢測波長：270 nm;進(jìn)樣量：10 ?L。

2.4.2? 混合對照品溶液的制備

分別取鞣花酸、短葉蘇木酚及柯里拉京對照品適量，精密稱定，置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL分別含鞣花酸0.046 8 mg、短葉蘇木酚0.028 8 mg和柯里拉京0.045 2 mg的混合對照品溶液，置于4 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4.3? 供試品溶液的制備

取本品粉末（過2號篩）約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL溶解，稱定質(zhì)量，超聲（功率800 W，頻率50 kHz）提取30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 ?m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.5? 方法學(xué)考察

2.5.1? 精密度試驗(yàn)

精密吸取6號供試品溶液10 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，以柯里拉京為參照峰，計(jì)算各共有峰的相對保留時(shí)間及相對峰面積，結(jié)果相對保留時(shí)間RSD<0.25%，相對峰面積RSD<3.75%，表明儀器精密度良好。

2.5.2? 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批珠子草樣品（6號）粉末6份，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，計(jì)算各共有峰的相對保留時(shí)間及相對峰面積，結(jié)果相對保留時(shí)間RSD<0.64%，相對峰面積RSD<2.17%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.3? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取6號供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別于制備后0、4、8、12、24 h進(jìn)樣測定，結(jié)果相對保留時(shí)間RSD<0.31%，相對峰面積RSD<2.58%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6? 指紋圖譜的建立與相似度分析

取10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草樣品，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。采用國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2004A）》軟件，以S6樣品色譜圖為參照譜圖，多點(diǎn)校正后經(jīng)自動匹配，中位數(shù)法生成樣品疊加色譜圖（見圖2）和共有模式（見圖3）。通過供試品與對照品色譜峰相對保留時(shí)間及紫外吸收譜圖比對，確定4號峰為短葉蘇木酚，5號峰為柯里拉京。

2.7? 主成分分析

以10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草樣品HPLC圖譜的全時(shí)段檢測信號為原始數(shù)據(jù)，通過數(shù)學(xué)組合，生成一個(gè)9000×10的矩陣，矩陣的列代表不同產(chǎn)地的珠子草樣品。將此矩陣導(dǎo)入SPSS19.0軟件，進(jìn)行主成分分析，結(jié)果見表4、表5。以10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草樣品HPLC圖譜數(shù)據(jù)集的前3個(gè)特征主成分（PC1、PC2、PC3）作投影，分析結(jié)果見圖4。

2.8? 含量測定

2.8.1? 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.4.2”項(xiàng)下混合對照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸的回歸方程分別為Y=138.444X-37.799（r=0.999 6）、Y=84.837 9X-10.874（r=0.999 2）、Y=122.9X+13.29（r=0.999 5），分別在0.057 6～0.576 ?g、0.090 4～0.904 ?g和0.093 6～0.936 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.8.2? 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對照品溶液各10 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，以混合對照品峰面積積分值計(jì)算，短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸色譜峰的峰面積RSD分別為1.40%、1.72%和1.39%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.8.3? 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批珠子草樣品（6號）粉末6份，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸色譜峰的峰面積RSD分別為0.64%、1.52%和0.13%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8.4? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取6號供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別于制備后0、4、8、12、24 h進(jìn)樣測定，短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸色譜峰的峰面積RSD分別為2.49%、1.24%和1.31%，結(jié)果表明在室溫條件下該供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8.5? 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱定9份已知含量的珠子草樣品粉末（6號），每份1.0 g，平均分為3組，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備低、中、高濃度的供試品溶液，分別精密吸取10 ?L，注入高效液相色譜儀，以外標(biāo)法進(jìn)行測定，每個(gè)濃度測定3次，結(jié)果見表6。

2.8.6? 樣品測定

將10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草樣品按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，每批平行測定3份，分別計(jì)算樣品中短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸的含量，結(jié)果見表7。

3? 討論

本研究分別從性狀、鑒別、檢查和浸出物、含量測定四方面對珠子草藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，所建立的珠子草薄層色譜定性鑒別和指標(biāo)成分（短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸）含量HPLC同時(shí)測定方法操作簡便、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，可用于該藥材的質(zhì)量控制和評價(jià)。

本研究以10個(gè)不同產(chǎn)地珠子草藥材為對象，建立了珠子草HPLC指紋圖譜，確定了8個(gè)共有峰，以對照品色譜圖指認(rèn)了其中2個(gè)色譜峰，分別為短葉蘇木酚和柯里拉京。相似度評價(jià)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地珠子草藥材中化學(xué)成分存在的差異性與其產(chǎn)地具有一定的相關(guān)性。

主成分分析作為一種無監(jiān)督模式識別法，利用降維思想，將多個(gè)變量簡化為幾個(gè)綜合變量，最大限度保留原樣本集所含的原始信息，建立的新變量為原變量的線性組合，尋求主成分，以達(dá)到數(shù)據(jù)的壓縮和解釋目的[9]。不同產(chǎn)地珠子草中化學(xué)成分組成及含量存在一定差異，主成分分析結(jié)果與樣品地理分布結(jié)果吻合度較高，且與HPLC指紋圖譜相似度評價(jià)結(jié)果及薄層鑒別結(jié)果也較為相似，能夠反映出不同產(chǎn)地珠子草化學(xué)成分的差異性和相似性。此外，在所識別篩選出的6個(gè)用于區(qū)別產(chǎn)地差異的特征性物質(zhì)中指認(rèn)柯里拉京，初步推測其可作為區(qū)別產(chǎn)地差異的特征性物質(zhì)。從本研究結(jié)果可以初步得出，不同產(chǎn)地珠子草中化學(xué)成分與其所在產(chǎn)地具有相關(guān)性，其原因可能與產(chǎn)地的氣候、土壤等環(huán)境條件有關(guān)，具體還需進(jìn)一步研究。

總之，本研究建立了同時(shí)測定珠子草中短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸的HPLC方法，對不同產(chǎn)地珠子草樣品進(jìn)行測定。通過對測定結(jié)果進(jìn)一步對比研究發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地珠子草中短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣花酸的含量差異較大，有同一省份珠子草中上述3種成分含量較為相似者，如1號和4號（云南景洪和云南個(gè)舊）;也有地理位置較為相近但3種成分含量差異較大者，如6號和7號樣品（甘肅省隴南市武都和陳縣），以及4號和5號樣品（云南個(gè)舊與云南蠻耗）。這一研究結(jié)果與主成分分析結(jié)果較為相似，從而進(jìn)一步論證了化學(xué)模式識別技術(shù)（如主成分分析）可用于區(qū)別珠子草的來源（產(chǎn)地）。

本研究補(bǔ)充完善并擬定了珠子草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，利用常規(guī)指紋圖譜數(shù)據(jù)分析方法結(jié)合主成分分析對不同產(chǎn)地珠子草藥材進(jìn)行評價(jià)，可為建立珠子草藥材整體性質(zhì)量評價(jià)體系提供基礎(chǔ)和依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 程新平，牛曉峰，朱周才.珠子草生藥學(xué)研究[J].西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2001，22（2）：162-163.

[2] 朱宇同，李秉滔，方宏勛.珠子草新亞種的發(fā)現(xiàn)和鑒定[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，14（2）：119-121.

[3] KODAKANDLA V S， BIKRAM S， RAGHUNATH S T， et al. Antihepatotoxic princinple of Phyllanthus niruri herbs[J]. Journal of Ethnopharmacoligy，1985，14（l）：41-44.

[4] UENO H， HORIE S， NISHI Y， et al. Chemical and pharmaceutical studies on medicinal plants in Paraguay. Garaniin， an angiotensin-converting anzyme inhibitor from “paraparai mi，” Phyllanthus niruri[J].Journal of Natural Products，1988，51（2）：357-359.

[5] SOMANABANDHU A. 1H- and 13C-nmr assignment of phyllanthin and hypophyllanthin：lingnans that enhance cytotoxic responses with cultured multidrug-resistant cells[J]. Journal of Natural Products，1993，56（2）：261-267.

[6] SNATOS A R. Analgesic effects of callus culture extracts from selected species of Phyllanthus in mice[J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology，1994，46（9）：755-759.

[7] CIMANGA R K， TONA L， LUYINDULA N， et al. In vitro antiplasmodial activity of callus culture extracts and fractions from fresh apical stems of Phyllanthus niruri L.（Euphorbiaceae）：part 2[J]. Journal of Ethnopharmacoligy，2004，95（2/3）：399-404.

[8] 李彩東，吳斌，楊靜.珠子草的生藥鑒定[J].中藥材，2000，23（9）：522- 523.

[9] KARD D. Evaluation of trace metal concentration in some herbs and herbal teas by principal component analysis[J]. Journal of Food Chemistry，2009，114（1）：347-354.