HPLC法同時測定小兒感冒顆粒中表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷的含量

王志軒 包冬雪

【摘要】目的： 建立高效液相色譜法同時測定小兒感冒顆粒中表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷含量的方法。方法：采用C18色譜柱;乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫;流速1.0ml/min;檢測波長245nm。結果：表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷分別在21.12～2112.00ng，20.09～2009.83ng，19.32～1932.32ng范圍內線性關系良好;平均加樣回收率分別為95.2%、95.1%、96.6%。結論：建立的方法簡便、準確、重復性好，可用于小兒感冒顆粒的質量控制。

【關鍵詞】小兒感冒顆粒;表告依春;綠原酸;毛蕊花糖苷;HPLC

【中圖分類號】R821.4+2 ? ? ?【文獻標識碼】A ? ? 【文章編號】2095-6851（2019）08-101-01

小兒感冒顆粒是由菊花、板藍根、地黃等10味藥組成，收載于《中國藥典》2015年版一部，具有疏風解表，清熱解毒的功效，用于小兒風熱感冒，癥見發(fā)熱重，頭脹痛、咳嗽痰粘、咽喉腫痛;流感見上述證候者。目前，已有文獻報道測定其中綠原酸[1]、靛藍與靛玉紅[2]、薄荷腦[3]等的含量。表告依春是板藍根的有效成分之一，具有抗病毒的功效[4-5]。綠原酸是菊花的有效成分之一，具有抗菌、抗病毒等作用功效[6-7]。毛蕊花糖苷是地黃有效成分之一，具有抗炎，提高免疫力的功效[8-9]。本實驗采用高效液相色譜法同時測定小兒感冒顆粒中表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷三種成分的含量，可以用來控制其質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀;電子分析天平（METTLER TOLEDO XPE26DR）

1.2 試藥和材料 對照品：表告依春（批號111753-201706 含量100.0%）、綠原酸（批號110753-201716 含量99.3%）、毛蕊花糖苷（批號111530-201309 含量92.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用;小兒感冒顆粒，共3批（生產單位：承德新愛民制藥有限公司，批號：181104，181106，181108），處方中各藥材均由承德新愛民藥業(yè)有限公司提供;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Scientific，美國）;甲醇（分析純，天津市康科德科技有限公司）;磷酸（分析純，天津佳興化工玻璃儀器工貿有限公司）;水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相：乙腈為A，0.1%磷酸為B，梯度洗脫（0～10min，7%A;10～25min，7%→13%A;25～40min， 13%A;40～60min， 13%→20%A;60～75min， 20%A;75～80min， 7%A），流速1.0ml/min，檢測波長為245nm，進樣量為10μl。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取表告依春對照品10.56mg、綠原酸對照品10.12mg、毛蕊花糖苷10.40 mg對照品置50ml容量瓶中，定容，搖勻，再分別吸取上述三種溶液各3ml置同一25ml容量瓶中，配制成表告依春濃度25.34 μg/mL，綠原酸濃度為24.28 μg/mL，毛蕊花糖苷濃度為24.96 μg/mL的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品適量，研細，精密稱取5g，放于錐形瓶內，精密加入70%甲醇10mL，稱定重量，加熱回流30min，用70%甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液用0.22μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應性試驗 分別取對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件試驗，結果見圖1，在此色譜條件下，表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷三種成分可以得到很好的分離，理論板數(shù)按表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷峰計算，均不低于5000。

2.4 線性關系考察 分別精密量取三種對照品濃溶液1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，10.0mL，放到100mL容量瓶內，加甲醇定容至刻度，搖勻，得到系列濃度的三種對照品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，以峰面積為縱坐標，以進樣量為橫坐標，計算三種對照品的線性回歸方程如下。

表告依春Y =763831725.7X -73912.16，r=0.9998，n=6

綠原酸Y=174631919.4 X -36860.67，r=0.9999，n=6

毛蕊花糖苷Y =123761238.4X -9398.40，r=0.9998，n=6

結果表明，表告依春、綠原酸、毛蕊花糖苷分別在21.12～2112.00，20.09～2009.83ng，19.32～1932.32ng范圍內線性關系良好。

3 討論

3.1 流動相選擇

小兒感冒顆粒中化學成分較復雜，為達到較好的分離效果，實驗中參考不同文獻[10-11]曾選擇過不同比例的甲醇（或乙腈）與0.1%磷酸（或冰醋酸溶液）作為流動相，其中以乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫分離效果最為良好，故選擇該流動相體系。

3.2 提取方法選擇

在供試品制備時分別考察了不同提取溶劑，結果發(fā)現(xiàn)70%甲醇提取效果較好，又考察了超聲提取、回流提取，結果發(fā)現(xiàn)回流提取可提取完全;同時對回流處理的時間進行了考察，發(fā)現(xiàn)回流處理30分鐘即可提取完全。

3.3 檢測波長選擇

精密稱取表告依春、毛蕊花糖苷、綠原酸對照品，用甲醇配制成適宜的濃度，在200～400nm進行光譜掃描。結果表明表告依春在245nm波長處有最大吸收，毛蕊花糖苷在332nm波長處有最大吸收，綠原酸在326nm波長處有最大吸收。綜合考慮樣品各吸收峰情況及雜質干擾選擇245nm作為測定波長。

參考文獻：

[1] 吳平平，李桂龍，靳文仙，等.小兒感冒顆粒中綠原酸測定方法的改進[J].中草藥，2011，42（6）：1135-1137.

[2] 彭文進，趙士冶，馮秀珍，等.高效液相色譜法測定小兒感冒顆粒中靛藍與靛玉紅含量[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3（6）：1-2.

[3] 宦正丹，倪慧艷.氣相色譜法測定小兒感冒顆粒中薄荷腦的含量[J].抗感染藥學，2018，19（5）：1483-1486.