哮喘患兒外周血Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細胞及相關因子變化情況分析

孫麗好

洛陽北方企業(yè)集團有限公司職工醫(yī)院兒科，河南省洛陽市 471000

支氣管哮喘是以氣道重塑和炎性反應為主要病理特征的慢性呼吸道疾病，高發(fā)于兒童[1]。流行病學調(diào)查顯示，我國兒童支氣管哮喘發(fā)生率為2%～5%，且發(fā)病年齡呈逐漸減小趨勢[2]。支氣管哮喘的發(fā)病機制目前仍未完全明確，其中T淋巴細胞亞群異?；罨癁樾猅細胞被認為是支氣管哮喘發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)，也是氣道炎性反應擴大的重要因素[3]。本文以支氣管哮喘初診患兒為觀察對象，檢測了外周血Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細胞及相關細胞因子在哮喘發(fā)病、緩解中的變化情況，為哮喘發(fā)病機制的研究提供參考。

1 對象與方法

1.1 觀察對象 選取2016年6月—2017年10月間本院收治的支氣管哮喘初診患兒116例為初診組，其中男64例，女52例，平均年齡(6.85±2.18)歲。另取90例經(jīng)哮喘治療后癥狀緩解的患兒為緩解組，其中男49例，女41例，平均年齡(6.63±1.84)歲。初診組和緩解組均符合兒童支氣管哮喘診治指南(中華醫(yī)學會兒科學分會，2016版)中的診斷標準；排除肺結核、肺炎、支原體感染等疾病。選取同期在本院行常規(guī)體檢的健康兒童60例為對照組，其中男32例，女28例，平均年齡(6.90±1.42)歲。各組性別構成、年齡之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；本文經(jīng)倫理委員會批準，受試兒童或其監(jiān)護人均簽署知情同意書。

1.2 方法 抽取兒童空腹肘靜脈血3ml，肝素抗凝，96孔板中分別加入100μl靜脈血和100μl DMEM細胞培養(yǎng)基，滴加刺激劑和阻斷劑各20μl，放入37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中孵育5～8h，取200μl加入流式細胞管，分別滴加10μl的CD3-H7、CD4-Fitc單克隆抗體，避光反應45min，依次加入固定劑、破膜劑各100μl，分別避光反應20min，分別滴加10μl的IL-17-Cy5、IL-22-Pe單克隆抗體，避光反應30min，磷酸緩沖液重懸細胞，上流式細胞儀檢測，以CD3+CD4+IL-17+IL-22-為Th17細胞，CD3+CD4+IL-17-IL-22+為Th22細胞。另取100μl靜脈血加入流式細胞管，滴加CD4-Fitc、CD25-Pe、CD127-Cy5單克隆抗體，避光反應20min，滴加細胞裂解液300μl，2 000r/min離心10min，棄去上清，磷酸緩沖液重懸細胞，計算CD4+細胞中CD4+CD25+CD127+百分率為調(diào)節(jié)性T細胞水平。酶標法常規(guī)檢測血漿中IL-17、IL-21、IL-22、IL-35水平。

2 結果

2.1 各組Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細胞及嗜酸性粒細胞水平比較 初診組外周血調(diào)節(jié)性T細胞水平明顯低于緩解組和對照組，Th17細胞、Th22細胞、嗜酸性粒細胞水平明顯高于緩解組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；緩解組外周血調(diào)節(jié)性T細胞水平明顯低于對照組，Th17細胞、Th22細胞、嗜酸性粒細胞水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 各組T細胞相關細胞因子水平比較 初診組外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明顯高于緩解組和對照組，IL-35水平明顯低于緩解組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；緩解組外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明顯高于對照組，IL-35水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細胞及嗜酸性粒細胞水平比較

注：與對照組相比，aP<0.05；與緩解組相比，bP<0.05。

表2 各組T細胞相關細胞因子水平比較

注：與對照組相比，aP<0.05；與緩解組相比，bP<0.05。

2.3 嗜酸性粒細胞計數(shù)與Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細胞水平的相關性 Pearson相關性分析顯示，外周血嗜酸性粒細胞計數(shù)與Th17、Th22水平呈正相關(r=0.864、0.928，P<0.05)，與調(diào)節(jié)性T細胞水平呈負相關(r=-0.675，P<0.05)。

3 討論

支氣管哮喘是兒童常見的慢性氣道炎性疾病，自身免疫系統(tǒng)功能紊亂與病情的發(fā)生、發(fā)展密切相關，其中T淋巴細胞亞群平衡失調(diào)發(fā)揮關鍵作用[4]。調(diào)節(jié)性T細胞可通知多種細胞因子，對抗原特異性免疫反應發(fā)揮直接或間接的抑制作用，誘發(fā)機體出現(xiàn)免疫耐受[5]。Th17細胞是可特異性分泌IL-17的輔助性T細胞亞群，細胞因子IL-17可聚集并活化中性粒細胞，發(fā)揮修復受損組織、抗病原微生物等生理活性[6]；Th17細胞還可分泌IL-21，通過自分泌方式經(jīng)STAT3通路刺激Th0細胞向Th17細胞的分化，同時誘導CD4+Th0細胞分泌IL-17，可維持并增強Th17細胞的生理作用[7]。Th22細胞是可特異性分泌IL-22的輔助性T細胞亞群，在胃癌、肺癌、肝癌等腫瘤及自身免疫性疾病、病毒感染的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[8]。

本結果顯示，支氣管哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T細胞和細胞因子IL-35水平均較正常兒童明顯減少，且隨病情的緩解調(diào)節(jié)性T細胞和IL-35水平明顯升高。提示調(diào)節(jié)性T細胞介導的免疫耐受參與了病情的進展，且與呼吸道炎癥存在關聯(lián)。支氣管哮喘患兒嗜酸性粒細胞水平較正常兒童明顯升高，且與哮喘嚴重程度相關，與Th17、Th22水平呈正相關，與調(diào)節(jié)性T細胞水平呈負相關。本文中Th17細胞及細胞因子IL-17、IL-21水平在支氣管哮喘患兒中明顯升高，可能與Th17細胞經(jīng)IL-17、IL-21加重體內(nèi)病理性免疫應答，誘導哮喘癥狀加重有關。相關研究顯示，支氣管哮喘患者活檢、痰標本、肺泡灌洗液中IL-17表達水平明顯高于健康人群，與本文結果一致[9]。本文中支氣管哮喘患兒初診和緩解者外周血Th22細胞水平均較正常兒童明顯上升，提示Th22細胞水平與哮喘患兒病情嚴重程度相關，可能參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。