關(guān)佳莉 王 剛 張夢蕊 陳 曦 曹藝雯 唐曉清 王康才
(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所,江蘇 南京 210095)
氮素作為植物生長所必需的營養(yǎng)元素之一,是植物體內(nèi)葉綠素、蛋白質(zhì)、核酸和部分激素等物質(zhì)的組成成分,在藥用植物生長發(fā)育、產(chǎn)量與品質(zhì)的形成過程中發(fā)揮著重要作用[1]。菘藍(lán)(IsatisindigoticaFort.)是大宗藥材板藍(lán)根與大青葉的基原植物。過量施用氮肥是其栽培生產(chǎn)上存在的主要問題之一,不僅導(dǎo)致氮素利用效率下降、生產(chǎn)成本增加,引發(fā)生態(tài)環(huán)境污染等問題,而且會(huì)對(duì)藥材產(chǎn)量及藥用品質(zhì)產(chǎn)生不利影響[2-4]。因此,合理施用氮肥是獲取高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)藥材的重要環(huán)節(jié),即對(duì)藥用植物而言,應(yīng)在不顯著降低其產(chǎn)量的條件下,適當(dāng)減少氮肥施用量,以保證藥材品質(zhì),降低生產(chǎn)成本和保護(hù)環(huán)境。
減量施氮對(duì)作物的影響已有大量報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)減量施氮不僅未影響甘藍(lán)[5]、小麥[6]、水稻[7]等作物的產(chǎn)量,還減少了氮肥損失,提高了氮肥利用率。目前,有關(guān)菘藍(lán)營養(yǎng)生理的研究主要集中在氮素形態(tài)、施氮方式對(duì)其的影響[8-10],而關(guān)于低氮營養(yǎng)下菘藍(lán)生長與活性成分積累響應(yīng)的研究尚鮮見報(bào)道。本研究采用盆栽試驗(yàn),研究不同供氮水平對(duì)菘藍(lán)生物量積累、光合參數(shù)、碳氮代謝及藥材質(zhì)量的影響,以期闡明菘藍(lán)對(duì)低氮環(huán)境的生理響應(yīng),為生產(chǎn)實(shí)踐中科學(xué)合理施氮、獲取優(yōu)質(zhì)藥材提供理論依據(jù)。
試驗(yàn)材料為來自山西的菘藍(lán)栽培居群,經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所王康才教授鑒定為十字花科植物菘藍(lán)(IsatisindigoticaFort.)的角果(生產(chǎn)上稱為種子)。
試驗(yàn)于2017年7-12月在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)溫室內(nèi)進(jìn)行。采用育苗移栽方式,挑選籽粒飽滿、大小均勻的種子播于穴盤中,出苗后每10 d澆施一次1/4 Hoagland營養(yǎng)液(氮濃度為3.75 mmol·L-1),每次500 mL?;A(chǔ)營養(yǎng)液中,大量元素與微量元素采用改良Hoagland營養(yǎng)液配方,基礎(chǔ)營養(yǎng)液pH值 6.0。待幼苗真葉長至4~5片時(shí),選擇長勢基本一致的植株,轉(zhuǎn)移至盆栽(外口徑29.6 cm,底直徑 17.8 cm,高19.7 cm)中,栽培基質(zhì)由蛭石和珍珠巖(蛭石∶珍珠巖=2∶1)混合而成。每盆定苗5株。各處理重復(fù)8次,共40盆,隨機(jī)排列。播種40 d后開始處理,每隔7 d澆灌1次處理營養(yǎng)液,于2017年12月10日收獲。
試驗(yàn)設(shè)5個(gè)氮素水平,分別為0(記作N0)、2.5(記作N1)、5.0(記作N2)、10.0(記作N3)、15.0 mmol·L-1(記作CK)。處理營養(yǎng)液均加入硝化抑制劑雙氰胺,用量為處理液中純氮含量的0.4%。不同處理中大量元素配比如表1所示。
表1 不同處理中大量元素配比Table 1 The major elements ratio in different treatments /(mmol·L-1)
注:“—”表示處理營養(yǎng)液中不含列表中對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分。
Note: ‘—’ indicates that the chemical components in the nutrient solution are not included in the list.
1.3.1 生物量測定 各處理隨機(jī)選取10株,清水洗凈后用滅菌的濾紙吸干水分,將地上部分與地下部分分開,根和葉均經(jīng)105℃殺青15 min,然后60℃烘干至恒重,分別稱量單株根與葉的干重。并將葉、根的干樣分別粉碎后過60目篩,備用。按照公式計(jì)算根冠比:
根冠比=單株根干質(zhì)量/單株葉干質(zhì)量
(1)。
1.3.2 游離氨基酸含量的測定 采用茚三酮顯色法[11]。分別稱取菘藍(lán)根、葉的干樣各0.1 g于試管中,每處理3次重復(fù),加入10 mL蒸餾水,然后沸水浴20 min,冷卻后過濾,保留上清液。向沉淀中加入5 mL蒸餾水,然后沸水浴10 min,過濾并反復(fù)沖洗殘?jiān)?,合?次的上清液并定容至25 mL。取4支潔凈干燥的試管,其中3支分別加入0.5 mL稀釋過的樣品提取液,1支加入0.5 mL蒸餾水,分別在上述4支試管中加入醋酸緩沖液、水合茚三酮各0.5 mL,混勻后蓋塞并沸水浴12 min,冷卻后再分別加入5 mL 95%乙醇,搖勻。以空白作參比,于波長570 nm下測定吸光度值,并計(jì)算游離氨基酸含量。
1.3.3 硝態(tài)氮含量的測定 采用水楊酸-硫酸法[11]。樣品提取步驟與游離氨基酸相同。吸取0.1 mL樣品液,加入0.4 mL 5%水楊酸-硫酸溶液,混勻后于室溫下放置20 min,緩慢加入9.5 mL 8% NaOH溶液,待冷卻至室溫后,以空白作參比,于410 nm波長下測定其吸光度值。用標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出0.1 mL樣品提取液中硝態(tài)氮含量,再計(jì)算樣品中的硝態(tài)氮含量。
1.3.4 可溶性糖含量的測定 采用蒽酮比色法[11]。樣品提取步驟與游離氨基酸相同。吸取稀釋過的樣品提取液0.5 mL于20 mL刻度試管中,重復(fù)3次,加入1.5 mL蒸餾水。然后加入0.5 mL蒽酮乙酸乙酯試劑,再緩慢加入5 mL濃硫酸,充分振蕩后立即放入沸水浴中準(zhǔn)確保溫1 min,(比色空白用2 mL蒸餾水與0.5 mL蒽酮試劑混合,并一同于沸水浴保溫)。取出后冷卻至室溫,以空白作參比,在630 nm波長下測定其吸光度值,并計(jì)算可溶性糖含量。
1.3.5 光合參數(shù)的測定 于晴朗、陽光充足的天氣,選擇菘藍(lán)植株由內(nèi)至外的第3片功能葉,于2017年12月9日上午9:00-11:00進(jìn)行光合參數(shù)測定。采用 LI-6400便攜式光合作用測量系統(tǒng)(LI-COR公司,美國)測定葉片的凈光合速率(net photosynthetic rate,Pn)、氣孔導(dǎo)度(stomatal conductance,Gs)、胞間CO2濃度(intercellular CO2concentration,Ci)和蒸騰速率(transpiration rate,Tr)。測定時(shí)使用開放式氣路,采用紅藍(lán)光源,光通量密度為1 000 μmol·m-2·s-1。
1.3.6 葉中靛藍(lán)和靛玉紅含量的測定 參照2015年版《中華人民共和國藥典》[4]的方法提取菘藍(lán)葉中的靛藍(lán)、靛玉紅,應(yīng)用超高效液相色譜法測定其含量。色譜條件:Agilent 超高效液相色譜儀。流動(dòng)相為v(甲醇)∶v(水)=72∶28;流速0.300 mL·min-1;檢測波長為289 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣體積2 μL。采用外標(biāo)法計(jì)算葉中靛藍(lán)和靛玉紅含量。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:準(zhǔn)確稱取靛藍(lán)和靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品各1.0 mg,用甲醇溶解后均定容至50 mL,搖勻后用孔徑0.45 μm微孔濾膜過濾。臨用前,用甲醇溶液采用逐級(jí)稀釋法將標(biāo)準(zhǔn)品母液配制成一系列質(zhì)量濃度的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別吸取靛藍(lán)、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品溶液各2 μL進(jìn)行測定。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合。靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=16.022x+21.742,r2=0.999 4(n=3),線性范圍0~2 μg·mL-1;靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=157.32x-9.329 4,r2=0.999 8(n=3),線性范圍0~10 μg·mL-1。
供試品溶液制備:準(zhǔn)確稱取0.25 g葉粉末于索氏提取器中,加入適量三氯甲烷,浸泡15 h,加熱回流提取至提取液無色。回收溶劑蒸干,殘?jiān)蛹状际蛊淙芙?,然后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,補(bǔ)充甲醇至刻度,搖勻,過濾,即得供試品溶液。
1.3.7 根中(R,S)-告依春含量的測定 參照2015年版《中華人民共和國藥典》[4]的方法提取菘藍(lán)根中的(R,S)-告依春,并采用高效液相色譜法測定其含量。色譜條件:HITACHI D2000高效液相色譜系統(tǒng)(日立公司,日本)。流動(dòng)相為 v(甲醇)∶v(0.02%磷酸溶液)=20∶80;流速0.600 mL·min-1;檢測波長245 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣體積20 μL。采用外標(biāo)法計(jì)算根中(R,S)-告依春含量。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:準(zhǔn)確稱取1.0 mg(R,S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解并定容至25 mL,配制成40 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品母液。微孔濾膜(0.45 μm)濾過,備用。臨用前,用甲醇溶液采用逐級(jí)稀釋法將標(biāo)準(zhǔn)品母液配制成濃度分別為1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg·mL-1的(R,S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)品溶液,分別吸取20 μL進(jìn)行測定。以色譜峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合。(R,S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=116.93x-10.091,r2=0.999 8(n=3),線性范圍0~40 μg·mL-1。
供試品溶液制備:準(zhǔn)確稱取0.5 g根粉末于圓底瓶中,加入25 mL蒸餾水,稱定重量,煎煮2 h,待冷卻后稱定其重量,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。
1.3.8 葉中總黃酮含量的測定 準(zhǔn)確稱取0.100 0 g菘藍(lán)葉粉末,加入10 mL 70%乙醇,超聲波振蕩1 h后過濾,將濾液定容至25 mL,混勻。吸取2 mL濾液于試管內(nèi),加入0.5 mL 50 g·L-1NaNO2,搖勻后靜置6 min,再加入0.5 mL 100 g·L-1Al(NO3)3,搖勻后靜置6 min,然后加入4 mL 40 g·L-1NaOH,最后用70%乙醇定容至10 mL。搖勻后靜置15 min,于510 nm波長下比色,測定吸光度值。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.003 7x+0.002 2,r2=0.999 5(n=3),線性范圍0~40 μg·mL-1,計(jì)算葉中總黃酮含量。
1.3.9 數(shù)據(jù)處理與分析 采用 Microsoft Office Excel 2013、SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,多重比較采用Duncan′s新復(fù)極差法。
由表2可知,隨著氮素濃度的增加,菘藍(lán)葉干重逐漸增加,其中CK顯著高于其他處理(P<0.05)。根干重隨著氮素濃度的增加而增加,但N0與N1之間、N3與CK之間均無顯著差異(P>0.05)。單株干重的變化規(guī)律與葉、根干重的變化趨勢基本一致,N0、N1、N2、N3處理的單株干重與CK相比,分別顯著降低了91.0%、82.4%、52.8%、14.6%。根冠比隨著氮素濃度的增加呈先增加后減少的趨勢,依次表現(xiàn)為N1>N2>N3>N0>CK。表明在低氮條件下,菘藍(lán)根與葉的生長均受到一定程度的抑制,氮素濃度降低到一定水平時(shí)促使植株的根冠比增加,對(duì)菘藍(lán)地下部分生長的促進(jìn)作用大于地上部分。
由表3可知,N0處理下的菘藍(lán)葉中可溶性糖含量最高,且顯著高于其他處理(P<0.05),隨著氮素濃度的增加,葉中可溶性糖含量呈先減少后增加的趨勢,而根中可溶性糖含量的變化規(guī)律與葉中存在差異;在N1~CK范圍內(nèi),根中可溶性糖含量呈先增加后減少的趨勢,N2處理下根中可溶性糖含量顯著高于其他處理(P<0.05),N0與N3之間無顯著差異。葉中游離氨基酸含量隨著氮素濃度的增加呈先增加后減少的趨勢,在N3處理下達(dá)到最大值,N3與CK間無顯著差異(P>0.05);根中游離氨基酸含量變化趨勢與葉中相同,于N3處理下達(dá)到最大值。葉中硝態(tài)氮含量隨著氮素濃度的增加呈先減少后增加的趨勢,其中N3處理的硝態(tài)氮含量顯著低于其他處理;根中硝態(tài)氮含量變化趨勢與葉中一致,但同一氮素濃度下,葉中硝態(tài)氮含量均高于根。
表2 不同供氮水平對(duì)菘藍(lán)根與葉干重及根冠比的影響Table 2 Effect of different nitrogen levels on dry weight and root to shoot ratio of I. indigotica
注:同列不同字母表示各處理間在5%水平差異顯著。下同。
Note: Different letters in the same column indicate significant difference among different treatments at 0.05 level. The same as following.
表3 不同供氮水平對(duì)菘藍(lán)根與葉中可溶性糖、游離氨基酸、硝態(tài)氮含量的影響Table 3 Effect of different nitrogen levels on contents of soluble sugar, free amino acid and nitrate nitrogen in leaves and roots of I. indigotica /(mg·g-1DW)
由圖1可知,隨著氮素濃度的增加,菘藍(lán)葉片的Pn呈先升高后降低的趨勢,N2、N3、CK間差異不顯著,但均顯著高于N0、N1(P<0.05);Gs也呈先升高后降低的趨勢;葉片Tr的變化規(guī)律與Gs一致;而Ci則呈逐漸降低的趨勢。表明氮素濃度過低不利于菘藍(lán)植株進(jìn)行光合作用。
由表4可知,不同供氮水平對(duì)菘藍(lán)葉中靛藍(lán)、靛玉紅含量的影響存在差異。靛藍(lán)含量隨著氮素濃度的增加逐漸增加,N3和 CK下的靛藍(lán)含量均顯著高于其他處理(P<0.05),但二者間無顯著差異。靛玉紅含量則隨著氮素的濃度增加呈先減少后增加的趨勢,低氮條件下的靛玉紅含量較高。根中(R,S)-告依春的含量隨著氮素濃度的增加呈先增加后減少的趨勢,在N3處理下達(dá)到最高。葉中總黃酮含量隨著氮素濃度的增加而逐漸減少,N0處理下達(dá)到最高,N0與N1間無顯著差異(P>0.05),但二者的總黃酮含量均顯著高于其他處理(P<0.05),且N2、N3、CK間無顯著差異(P>0.05)。
由表5可知,隨著氮濃度的增加,葉中靛藍(lán)、靛玉紅、總黃酮單株產(chǎn)量均呈上升的趨勢,且均在CK處理達(dá)到最高。與CK相比,N3處理下的靛藍(lán)、靛玉紅、總黃酮單株產(chǎn)量分別下降了23.4%、20.4%、15.4%;N0處理下的靛藍(lán)、靛玉紅、總黃酮單株產(chǎn)量分別下降了97.5%、89.7%、90.5%。根中(R,S)-告依春單株產(chǎn)量則隨著氮濃度的增加呈先增加再減少的趨勢,在N3處理下達(dá)到最高,與CK相比,N3處理的(R,S)-告依春單株產(chǎn)量增加了43.2%。
對(duì)各處理的菘藍(lán)生物量與活性成分指標(biāo)間進(jìn)行Pearson 相關(guān)性分析。由表6可知,葉干重與根干重呈極顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.991。葉干重與總黃酮含量呈極顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為-0.990。靛藍(lán)含量與靛玉紅、總黃酮含量之間均呈極顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為-0.974、-0.969。綜上表明,氮素對(duì)于不同活性成分的調(diào)控特點(diǎn)存在差異。
注:不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。Note: Different lowercase letters indicate significant different at 0.05 level.圖1 不同供氮水平對(duì)菘藍(lán)光合參數(shù)的影響Fig.1 Effect of different nitrogen levels on photosynthetic parameters of I. indigotica
表5 不同供氮水平下菘藍(lán)主要活性成分的單株產(chǎn)量Table 5 The yield per plant of the main active components under different nitrogen levels
表6 菘藍(lán)生物量與活性成分指標(biāo)間相關(guān)性分析Table 6 Correlation analysis among biomasses and active components indexes in I. indigotica under different nitrogen levels
注:*表示在0.05水平相關(guān)性顯著;**表示在0.01水平相關(guān)性極顯著。
Note:*indicates correlation is significant at 0.05 level.**indicates correlation is extremely significent.
氮素是植物生長與代謝過程中的重要影響因子,氮素不足時(shí)植株矮小且生長緩慢,氮素充足時(shí)植株生長較為旺盛,但氮素過量會(huì)對(duì)生長產(chǎn)生不利影響[12]。研究表明,氮素對(duì)植物生物量積累和產(chǎn)量形成具有促進(jìn)效應(yīng)。張?jiān)骑L(fēng)等[13]研究發(fā)現(xiàn)隨著氮濃度的增大,擬巫山淫羊藿的單株生物量和葉干重均顯著升高。盧麗蘭等[14]研究表明,高氮有利于廣藿香生長,可顯著提高其單株重量,這與本研究結(jié)果相同。本研究中,菘藍(lán)根與葉的干重均隨著氮素濃度的增加而增加,且CK的葉干重顯著高于其他處理,但CK的根鮮重、根干重與N3之間無明顯差異,表明適當(dāng)減少氮素供給,對(duì)菘藍(lán)根生物量積累影響較小,但氮素供應(yīng)過少會(huì)抑制根與葉的生物量積累。本研究還發(fā)現(xiàn)菘藍(lán)地上部分與根系在低氮營養(yǎng)下的響應(yīng)存在差異,其根冠比隨著氮素濃度增加呈先升高后降低的趨勢,在N1處理下達(dá)到最大值。這是由于在氮素供應(yīng)水平較低時(shí),植物分配至地下部分的光合產(chǎn)物比例增加,相對(duì)提高根系生物量來適應(yīng)環(huán)境變化,以獲取更多養(yǎng)分,從而增大根冠比。低氮條件下,植株根冠比增加可能屬于植物耐氮素脅迫的機(jī)制之一。
供氮水平對(duì)于植物體的碳氮代謝也存在顯著影響。孫興祥等[15]研究表明,菠菜中的可溶性糖含量隨氮素濃度的降低呈上升趨勢;張梅等[16]研究發(fā)現(xiàn)甜菜生長發(fā)育前期,隨著施氮量的增加,葉片可溶性糖積累量整體上呈先降低后升高的趨勢,中期逐漸下降,這與本研究結(jié)果相似。本研究中,菘藍(lán)葉的可溶性糖含量隨著氮素濃度的增加而呈先減少后增加的趨勢,在N0處理達(dá)到最大值,根中可溶性糖含量在2.5~15.0 mmol·L-1范圍內(nèi)呈先升高后降低的趨勢。這可能是由于氮素濃度較高時(shí),植株代謝較旺盛,大量可溶性糖轉(zhuǎn)化為碳架,導(dǎo)致可溶性糖含量下降。硝態(tài)氮和氨基酸含量在一定程度上可反映植物的氮素代謝情況。前人研究發(fā)現(xiàn),低氮脅迫下,大豆葉與根系中硝態(tài)氮、游離氨基酸含量均低于正常氮素處理[17],這與本研究結(jié)果相似。本研究中,菘藍(lán)葉與根中游離氨基酸含量變化趨勢一致,均隨著氮素濃度的增加而呈先增加后減少的趨勢,在N3處理下達(dá)到最大值;菘藍(lán)葉與根中的硝態(tài)氮含量則表現(xiàn)出先減少后增加的趨勢,N3處理的硝態(tài)氮含量顯著低于其他處理。氮素濃度較大時(shí)硝態(tài)氮含量低,可能是由于氮素濃度高,植物體內(nèi)氮代謝關(guān)鍵酶活性較高,促進(jìn)了無機(jī)氮向有機(jī)氮的轉(zhuǎn)化,使得硝態(tài)氮的還原量大于吸收量。而在低氮條件下,氮代謝酶活性較低,硝態(tài)氮積累相對(duì)較多,導(dǎo)致其含量升高。同一供氮水平下葉中硝態(tài)氮含量高于根中硝態(tài)氮含量,可能是由于被吸收的硝態(tài)氮部分被根系直接轉(zhuǎn)化,大量硝態(tài)氮被轉(zhuǎn)移至葉片中。
供氮水平對(duì)于植物的光合作用有較大影響??嵇Q凌等[18]研究表明,過低的氮素水平會(huì)導(dǎo)致喜樹幼苗光合作用能力下降;李強(qiáng)等[19]研究發(fā)現(xiàn)在低氮脅迫下,苗期玉米葉片的Pn、Gs、Tr顯著降低,Ci顯著增加。本研究中,菘藍(lán)的Pn、Tr、Gs均隨著氮素濃度的增加呈先升高后降低的趨勢,Ci呈逐漸降低趨勢,這與許楠等[20]的研究結(jié)果類似。植物碳代謝和氮代謝相互影響與制約,氮素供應(yīng)水平過高導(dǎo)致光合能力下降,可能是由于植物碳代謝與氮代謝均需要同化力及碳架。植物中氮素含量升高使氮同化作用增強(qiáng),與光合碳同化競爭同化力,導(dǎo)致CO2同化速率降低。此外,氮同化加強(qiáng)后,呼吸作用向光合碳同化提供碳架的能力減弱,使CO2同化速率下降[17]。植物光合作用屬于碳代謝的一部分,與同化產(chǎn)物在植物體內(nèi)的分配與積累過程有一定內(nèi)在聯(lián)系。當(dāng)植物氮素缺乏時(shí),葉片Pn較低,葉中可溶性糖含量積累較多;在氮素充足時(shí),植物向葉片投入較多氮營養(yǎng),促進(jìn)光合能力的提高,植物對(duì)于營養(yǎng)的需求增加,進(jìn)而向根系分配較多光合產(chǎn)物以促進(jìn)根系生長,增強(qiáng)根系對(duì)氮素的吸收,植株氮代謝活動(dòng)旺盛,硝態(tài)氮含量降低。影響植物光合作用的主要因素為氣孔限制和非氣孔限制,葉片Pn、Gs和Ci同時(shí)下降,說明Pn下降主要因?yàn)闅饪滓蛩?,而Pn、Gs下降、Ci升高說明非氣孔限制是Pn降低的主要限制因素[21]。本研究中,N0~N3范圍內(nèi),隨著氮濃度的減小,菘藍(lán)Pn、Gs、Tr均降低,Ci呈升高趨勢,Pn與Tr、Gs均呈極顯著正相關(guān),與Ci間呈顯著負(fù)相關(guān),說明菘藍(lán)光合作用主要受非氣孔因素限制。
藥用植物的藥效成分大多數(shù)為次生代謝產(chǎn)物。次生代謝產(chǎn)物是植物在與外界環(huán)境相互作用的過程中逐漸形成的,其形成除與遺傳因素有關(guān)外,主要還受到生態(tài)因子的影響[22]。氮素可能通過影響植物中的碳氮代謝,也可能通過影響次生代謝過程的酶系統(tǒng)等方面,來調(diào)控植物的次生代謝途徑,影響次生代謝產(chǎn)物含量[23]。兼顧藥用植物產(chǎn)量及品質(zhì)是生產(chǎn)實(shí)踐中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),施用氮肥應(yīng)考慮菘藍(lán)生長與其次生代謝產(chǎn)物積累的平衡。
大多數(shù)生物堿屬于含氮化合物,其代謝途徑較為復(fù)雜。研究發(fā)現(xiàn)氮素對(duì)于生物堿的生物合成與積累有促進(jìn)作用。丁麗潔等[24]研究表明,在一定氮素濃度范圍內(nèi),黃檗中小檗堿、藥根堿和掌葉防己堿均隨著氮素濃度增加而增加。朱孟炎等[25]研究表明,低氮水平下,長春花葉片中的文朵靈、長春質(zhì)堿、長春堿含量均顯著低于正常和高氮水平。本研究中,菘藍(lán)葉中靛藍(lán)含量隨著氮素濃度的增加逐漸增加,根中(R,S)-告依春含量隨著氮素濃度的呈先增后減少的趨勢,在N3處理下達(dá)到最高。但也有研究表明,氮素脅迫條件刺激了植物體內(nèi)某些次生代謝物質(zhì)的合成,使部分生物堿成分含量提高。孫世芹等[26]研究發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)偷{迫能夠顯著增加喜樹幼苗中的喜樹堿含量。本研究中,菘藍(lán)葉中靛玉紅含量隨著氮素濃度的增加表現(xiàn)出先減少后增加的趨勢。靛玉紅和靛藍(lán)屬于吲哚類生物堿,(R,S)-告依春為含硫類生物堿,這3類成分均為含氮次生代謝物。適當(dāng)?shù)牡毓?yīng)有利于菘藍(lán)中靛藍(lán)與(R,S)-告依春的積累,而低氮條件促進(jìn)了靛玉紅含量增加。根中(R,S)-告依春單株產(chǎn)量在N3處理下達(dá)到最高,表明適當(dāng)降低施氮量,可以獲得活性成分含量較高的板藍(lán)根。通過調(diào)節(jié)氮素水平可以調(diào)控藥用植物部分次生代謝產(chǎn)物的水平,為生產(chǎn)上獲得高品質(zhì)藥材提供了可能的途徑。
氮素對(duì)黃酮類化合物的合成代謝過程也有一定調(diào)控作用。菘藍(lán)葉中總黃酮含量隨著氮素濃度的降低呈逐漸增加的趨勢,0~5 mmol·L-1氮濃度范圍內(nèi)的總黃酮含量顯著高于其他處理。研究表明,在低氮環(huán)境下,黃酮與異黃酮合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平升高,可以通過氮素來調(diào)控黃酮類化合物的含量[27]。L?vdal等[28]研究發(fā)現(xiàn)在低氮條件下,番茄葉片中黃酮成分槲皮素、山奈酚及鼠李素的含量均有所升高,這與本研究結(jié)果相似。Liu等[29]研究表明,缺氮可使菊花葉片的黃酮含量保持在較高水平;向達(dá)兵等[30]研究發(fā)現(xiàn)施氮會(huì)顯著降低苦蕎麥中的蘆丁含量,但對(duì)槲皮素含量無顯著影響。上述結(jié)果表明,降低氮素濃度有利于植物中黃酮類成分的合成。在低氮條件下,不同植物中生物堿與黃酮類成分的響應(yīng)存在差異,且菘藍(lán)中靛藍(lán)含量與靛玉紅、總黃酮含量之間均呈極顯著負(fù)相關(guān),這可能與植物自身營養(yǎng)特性有關(guān),也可能與次生代謝產(chǎn)物復(fù)雜的合成過程有關(guān),但相關(guān)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
本研究結(jié)果表明,氮素供應(yīng)水平對(duì)菘藍(lán)生長及藥材質(zhì)量有顯著影響。氮素濃度在0~5 mmol·L-1范圍內(nèi),菘藍(lán)根與葉生物量積累及光合作用均受到一定程度的抑制。適當(dāng)?shù)牡毓?yīng)有利于菘藍(lán)中靛藍(lán)與(R,S)-告依春積累,而降低氮素濃度有利于增加靛玉紅與總黃酮含量。根中(R,S)-告依春單株產(chǎn)量在N3(10 mmol·L-1)處理下達(dá)到最高,可以通過適當(dāng)降低氮素濃度獲得活性成分含量較高的板藍(lán)根。在實(shí)際田間栽培生產(chǎn)中,為獲得產(chǎn)量穩(wěn)定、品質(zhì)較好的藥材,可以考慮適當(dāng)降低氮肥用量,調(diào)控菘藍(lán)部分次生代謝產(chǎn)物的水平,以獲得高品質(zhì)藥材,但具體減量施氮措施還有待進(jìn)一步研究。