丹參幾丁糖混合液體外抑菌活性初步研究

蘇健芬 黃晨 楊輝

近年來輸卵管阻塞所致不孕高發(fā)［1,2］, 給患者身心健康造成嚴(yán)重影響, 甚至危及家庭幸福。本課題組前期研究表明丹參幾丁糖混合液在輸卵管介入治療再通術(shù)中的臨床效果良好［3］。本文考察丹參幾丁糖混合液的體外抑菌活性, 探索混合劑的最佳配比, 報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌種 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,ATCC 25923), 大腸埃希菌(Escherichia coli, ATCC25922), 來自廣州市微生物研究所。

1.2 藥品 醫(yī)用幾丁糖(上海其勝生物制劑有限公司, 批號18030311)；丹參注射液(山東華信制藥集團(tuán)股份有限公司, 批號：18042401)；丹參幾丁糖混合液(自制, 批號：18070301)；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(北京三藥科技開發(fā)公司, 批號：180513)。

1.3 主要儀器 三洋牌MLS-3020高壓滅菌鍋, YJ-875B 醫(yī)用凈化工作臺(上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司), PSH500A生化培養(yǎng)箱(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)。

1.4 方法 將試驗(yàn)分為六組, A組(對照組)、B組［丹參注射液∶幾丁糖2∶1(V/V)］、C組［丹參注射液∶幾丁糖5∶1(V/V)］、D組［丹參注射液∶幾丁糖10∶1(V/V)］、E組(丹參注射液)、F組(幾丁糖)。通過測量抑菌圈直徑考察不同配比混合物對細(xì)菌的抑菌效果。

1.4.1 丹參幾丁糖混合液的制備工藝［3］于超凈工作臺上,用移液管精密量取丹參注射液及醫(yī)用幾丁糖適量體積, 按照2∶1(V/V)、5∶1(V/V)、10∶1(V/V)比例分別混合用于B組、C組、D組, 分別置于玻璃試管中, 于自動渦旋器上渦旋10 min, 使兩者混合均勻。加入適量合成或半合成高分子助懸劑(甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、聚維酮), 于35～40℃水浴振蕩30～60 min, 使之充分混勻, 形成穩(wěn)定的混懸狀態(tài)。加入5%碳酸氫鈉溶液, 調(diào)節(jié)混合物pH值為 7.5～7.8。

1.4.2 菌液的制備方法 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳, 置營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中, (37±1)℃培養(yǎng)24 h, 培養(yǎng)后用滅菌生理鹽水10倍系列稀釋成103～105個(gè) /ml的菌懸液。

1.4.3 抑菌實(shí)驗(yàn) 向培養(yǎng)皿中倒入預(yù)先熔化好、并滅菌處理過的培養(yǎng)基, 冷卻, 凝固。分別取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌兩種細(xì)菌的菌懸液300 μl于含有營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)皿中,涂布均勻。在每個(gè)培養(yǎng)上放置3個(gè)牛津杯, 杯中加入200 μl同種受試液, 作為3個(gè)平行。放入(37±1)°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后取出, 觀察, 拍照, 測量抑菌圈大小。體外抑菌定性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑＜8 mm為不敏感(-), 8～13 mm為低度敏感(+), 14～19 mm為中度敏感(++), ＞19 mm為高度敏感(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用方差分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌對丹參幾丁糖混合液為高度敏感對照組無抑菌效果。六組抑菌圈直徑比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；B、C、D組的抑菌圈直徑比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B、C、D組的抑菌圈直徑大于E、F組；混合液最佳抑菌效果的配比為5∶1(V/V)。見表1。

表1 丹參幾丁糖混合液和單方制劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑結(jié)果(±s, mm)

表1 丹參幾丁糖混合液和單方制劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑結(jié)果(±s, mm)

注：A～F組比較, P＜0.01；B～D 組比較, P＜0.05

組別細(xì)菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌1 2 3 抑菌圈直徑 1 2 3 抑菌圈直徑A 組 0.73 1.47 1.02 1.07±0.37 0.89 1.37 1.71 1.32±0.41 B 組 21.27 22.78 19.43 21.16±1.68 21.61 20.52 19.73 20.62±0.94 C 組 22.21 23.66 24.76 23.54±1.28 21.47 22.68 21.95 22.03±0.61 D 組 19.95 20.36 19.51 19.94±0.43 19.53 17.24 20.36 19.04±1.62 E 組 15.41 18.02 16.63 16.69±1.31 14.46 16.19 14.88 15.18±0.90 F 組 15.91 12.21 14.27 14.13±1.85 14.83 13.36 12.98 13.72±0.98 F(A～F組 ) 118.310 176.835 F(B～D組) 6.527 5.198 P(A～F組) ＜0.01 ＜0.01 P(B～D組) ＜0.05 ＜0.05

3 討論

多篇文章報(bào)道, 丹參具有抗菌消炎作用, 尤其對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用較強(qiáng), 本文與相關(guān)報(bào)道一致［4］。與抗菌藥物不同, 細(xì)菌很少對中草藥產(chǎn)生耐藥性［5］。因此中藥抗菌具有應(yīng)用潛力。本研究顯示, 丹參注射液和丹參幾丁糖混合液均有良好的抑菌效果。

侯春林等［6］以兔為模型, 研究幾丁糖對骨感染的作用,結(jié)果表明了幾丁糖對骨感染有緩解作用, 其機(jī)理是幾丁糖表面的正電荷對細(xì)菌有很強(qiáng)的吸附與粘著作用, 使細(xì)菌的擴(kuò)散與繁殖受到抑制。同時(shí)Varum等［7］進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究表明,高分子化合物幾丁糖, 在體內(nèi)水解依賴溶菌酶, 降解時(shí)間需要數(shù)月, 長時(shí)間局部保留, 長時(shí)間抑制細(xì)菌繁殖, 從而減輕炎癥。本實(shí)驗(yàn)提示, 丹參幾丁糖混合液的抑菌效果最佳, 最佳配比為5∶1(V/V), 與本研究團(tuán)隊(duì)前期報(bào)道結(jié)果吻合。

綜上所述, 丹參幾丁糖混合液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的抑菌活力均為高度敏感, 強(qiáng)于單方制劑?；旌弦鹤罴岩志Ч呐浔葹?∶1(V/V)?；趯σ志钚缘挠绊?混合液最佳處方和制備工藝有待進(jìn)一步研究。