MRI對比劑Gd-DO3A-Ether-Rhein的合成及其壞死親和性研究

張立邦，張東建，高 萌，金喬梅，吳天澤，楊 陽，張 健*，殷志琦

（1中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥制劑系＆天然藥物活性組分與藥效國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京210009；2江蘇省中醫(yī)藥研究院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，南京210028；3南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 南京210028）

壞死是一種由于急性物理化學(xué)損傷或突然的代謝失敗（如機(jī)械損傷、感染、毒素和缺血）導(dǎo)致的細(xì)胞不可逆損傷的死亡形式［1-2］。細(xì)胞壞死發(fā)生于多種疾病中，如腫瘤、心肌梗死和腦卒中等［3-4］。同時(shí)，一些腫瘤治療方法，如熱消融、血管阻斷劑等，主要通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死達(dá)到殺傷腫瘤的目的［5-6］。因此，非侵入性成像壞死組織對相關(guān)疾病的早期診斷、治療效果評價(jià)及治療方案的調(diào)整具有重要的意義［7-8］。

壞死親和性探針是一類能夠特異性濃聚于壞死組織，從而對壞死組織進(jìn)行可視化的化合物。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)單蒽醌類化合物具有良好的壞死親和性和血漿藥代動力學(xué)性質(zhì)［9］，其中大黃酸（rhein）是一種有潛力的先導(dǎo)化合物?；诖簏S酸構(gòu)建的單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像（SPECT）探針99mTc-HYNIC-Rhein，在心肌壞死的快速成像和腫瘤治療反應(yīng)早期監(jiān)測方面顯示出良好的應(yīng)用潛力［10-11］，但是 SPECT成像空間分辨率較低，難以準(zhǔn)確評估壞死的邊界。

磁共振成像（MRI）是臨床常用的成像手段，該技術(shù)具有時(shí)空分辨率高且沒有輻射的優(yōu)點(diǎn)。因此，本課題組構(gòu)建了基于大黃酸的不同長度烷烴鏈連接臂的 MRI對比劑 Gd-DO3A-Linker-Rhein（GdL1-3），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三者的弛豫率及水溶性表現(xiàn)出較大的差異，這說明連接臂的差異會對造影劑本身的理化性質(zhì)產(chǎn)生影響。同時(shí)，該研究發(fā)現(xiàn)GdL1能夠在給藥后3 h對CA4P治療導(dǎo)致的大鼠皮下W256腫瘤壞死區(qū)域進(jìn)行成像［12］，GdL3具有良好的成像壞死組織的潛力［13］。MRI技術(shù)靈敏度較低，需要大量的對比劑才能顯像，因此需要MRI對比劑具有良好的水溶性，但是GdL3的油水分配系數(shù)為-（0.71±0.01），其水溶性有待提高；另一方面，連接臂的差異會對造影劑的理化性質(zhì)產(chǎn)生影響［12，14］，上述 MRI對比劑僅以烷烴鏈為連接臂構(gòu)建探針，因此更換不同種類的連接臂進(jìn)行更深入的研究，可能得到水溶性更好且保留壞死親和性的以大黃酸為基礎(chǔ)的MRI對比劑。

近年來，醚鏈（ether）被廣泛用于放射性探針的結(jié)構(gòu)修飾中以改善藥物的某些理化性質(zhì)和藥代動力學(xué)特性［14-16］，因此本研究以大黃酸為基礎(chǔ)，以較短的醚鏈（乙氧基乙基）為連接臂構(gòu)建壞死親和性 MRI對比劑 Gd-DO3A-Ether-Rhein（GdE1），考察其水溶性和弛豫率的改變、體內(nèi)外的壞死靶向性及MRI成像效果。

1 材 料

1.1 藥品與試劑

大黃酸（rhein，成都思天德生物有限公司）；苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU）、2-琥珀酰亞胺基-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯（TSTU）（上海畢得醫(yī)藥科技有限公司）、N-乙基二異丙胺（DIPEA）、三氟乙酸（TFA）；［2-（2-氨基乙氧基）乙基］氨基甲酸叔丁酯（上海畢得醫(yī)藥科技有限公司）；1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸三叔丁基酯［DOTA-tris（t-Bu）ester，美國 Macrocyclics公司］；其他試劑均為市售分析純。

1.2 儀 器

Echo speed Plus 1.5 T磁共振儀（美國GE公司）；AW 4.3后處理工作站；NM120核磁共振造影劑弛豫分析與成像系統(tǒng)（蘇州紐邁分析儀器股份有限公司）；Shandon冰凍切片（英國Thermo Fisher Scientific公司）；全波長多功能酶標(biāo)儀（美國賽默飛世爾科技有限公司）。

1.3 細(xì)胞與動物

人肝癌HepG2細(xì)胞株和人正常肝IO2細(xì)胞株購自上海細(xì)胞庫；雄性SD大鼠，體重（220±10）g，購買自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，合格證號：SCXK（滬）2017-0005。研究中大鼠的護(hù)理符合美國國立衛(wèi)生研究院公布的《實(shí)驗(yàn)動物保健原則》No.85-23（1996年修訂），該項(xiàng)研究得到動物使用委員會和保健機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。

2 方 法

2.1 10-｛［6-（1，8-二羥基蒽醌-3-甲酰氨基）乙氧基乙基］氨基｝羰酰甲基-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸合釓（Gd-DO3A-Ether-Rhein，即GdE1）的合成

2.1.1 化合物1的合成 在500 mL圓底燒瓶中加入大黃酸1.24 g（4.36 mmol）和130 mL乙腈，緩慢滴加［2-（2-氨基乙氧基）乙基］氨基甲酸叔丁酯863μL（4.36 mmol），再加入2-琥珀酰亞胺基-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸酯（TSTU）1.45 g（4.82 mmol），并滴加N-乙基二異丙胺（DIPEA）2 mL（11.5 mmol）至反應(yīng)液，室溫?cái)嚢?24 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉溶劑，經(jīng)過硅膠柱純化（二氯甲烷-甲醇，70∶1）得到黃色固體化合物1（1.08 g，52.43%）。

2.1.2 化合物2的合成 在50 mL圓底燒瓶中依次加入化合物 1 800 mg（1.70 mmol）、三氟乙酸1 mL和二氯甲烷10 mL，室溫條件下反應(yīng)6 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉溶劑，加入無水乙醚10 mL，抽濾，濾餅經(jīng)45℃真空干燥得到黃色濾餅化合物2粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物不進(jìn)行純化。

2.1.3 化合物3的合成 稱取苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU）631 mg（1.66 mmol）、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7，10-四乙酸三叔丁基酯866 mg（1.51 mmol）于50 mL圓底燒瓶中，加入DMF 5 mL室溫?cái)嚢枞芙?，滴加N-乙基二異丙胺（DIPEA）527μL（3.0 mmol），室溫?cái)嚢?～10 min后，將化合物 2粗品（560 mg，1.51 mmol）的DMF（5 mL）溶液滴加到上述反應(yīng)液中，室溫?cái)嚢?2 h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓除去溶劑，得到褐色油狀產(chǎn)物化合物3，不進(jìn)行純化，直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。

2.1.4 配體 10-｛［6-（1，8-二羥基蒽醌-3-甲酰氨基）乙氧基乙基］氨基｝羰酰甲基-1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4，7-三乙酸（DO3A-Ether-Rhein，即 E1）的合成 將上述褐色油狀產(chǎn)物化合物3置于250 mL茄型瓶中，分別加入二氯甲烷9mL和三氟乙酸3 mL，室溫條件下反應(yīng)6 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉溶劑得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)過反相色譜柱純化（流動相為甲醇-水，60∶40）得到黃色固體 DO3A-Ether-Rhein（E1）（865.1 mg，74.82%，該產(chǎn)率由“2.1.2”中化合物1投料量計(jì)算得到）。

2.1.5 Gd-DO3A-Ether-Rhein（GdE1）的合成 將六水合氯化釓250 mg（0.67 mmol）和 E1 500 mg（0.66 mmol）溶于去離子水 10 mL中，用 1 mol／L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至近中性，室溫?cái)嚢?2 h后停止反應(yīng)，減壓除去溶劑，所得產(chǎn)物經(jīng)反相色譜柱純化（流動相為甲醇-水，80∶20）得到黃色固體 Gd-DO3A-Ether-Rhein（GdE1）（468.2 mg，77.79%）。

2.2 弛豫率測定及體外磁共振成像

參考文獻(xiàn)［13］的方法，以 PBS（pH 7.4）為溶劑，將 GdE1配制成 5個(gè)濃度（0.125，0.25，0.5，1.0，2.0 mmol／L）的樣品，分別檢測5個(gè)樣品對應(yīng)的縱向弛豫時(shí)間t，以濃度為橫坐標(biāo)、1／t為縱坐標(biāo)擬合直線，得到直線的斜率即為r1，利用 NM120（0.5 T）核磁共振造影劑弛豫分析與成像系統(tǒng)對上述5個(gè)樣品進(jìn)行成像，設(shè)置參數(shù)：重復(fù)時(shí)間160ms，層厚0.7 mm，回波時(shí)間13.5 ms。Gd-DOTA弛豫率的檢測方法與GdE1相同。

2.3 油水分配系數(shù)（lgP）的測定

采用搖瓶法進(jìn)行測量［17］，以pH 7.4正辛醇飽和的PBS為溶劑將GdE1配制成不同濃度的樣品，從不同濃度的樣品中各量取3 mL分別在435 nm下測量吸收度，標(biāo)記為A0。測量A0后，再分別加入PBS飽和的正辛醇溶液3 mL，在室溫下劇烈渦旋15 min，然后在14 000 r／min條件下離心5 min，測量PBS層吸收度，標(biāo)記為A1，根據(jù)公式lgP=lg［（A0-A1）／A1］計(jì)算油水分配系數(shù)（lgP），每個(gè)藥物測量3次。

Scheme 1 Synthesis of Gd-DO3A-Ether-Rhein（GdE1）

2.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

分別取人肝癌HepG2細(xì)胞和人正常肝IO2細(xì)胞進(jìn)行消化傳代，在96孔板中接種細(xì)胞（1×104個(gè)／孔），等細(xì)胞出現(xiàn)貼壁現(xiàn)象，吸走培養(yǎng)基，加入無血清組織的的DMEM培養(yǎng)細(xì)胞8 h，分別加入12.5，25，50，100，200μmol／L的 GdE1，空白組（Control）加入無血清的 DMEM，孵育細(xì)胞24 h，吸走培養(yǎng)基，每孔加入 MTT 20μL（5 mg／mL），孵育細(xì)胞4 h，將上清液除去，每孔加入DMSO 150μL，在490 nm處用酶標(biāo)儀測定吸收度，計(jì)算細(xì)胞活力，實(shí)驗(yàn)按照相同的方法進(jìn)行3次。Gd-DOTA的細(xì)胞毒檢測方法與GdE1相同。

2.5 細(xì)胞體外磁共振成像實(shí)驗(yàn)

在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板上加入人肝癌HepG2細(xì)胞，每孔5×105個(gè)，在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)箱中過夜（37℃，5%CO2）。

在57℃條件下孵育1 h誘導(dǎo)細(xì)胞壞死［18］，將經(jīng)高熱處理的細(xì)胞與未經(jīng)高熱處理的細(xì)胞分別取出，離心后將上清液除去，分別加入不含血清的培養(yǎng)基100μL和 GdE1（3×10-3mmol／L）100μL，振蕩混勻后在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30 min，接下來離心10 min（1 000 r／min），吸走上清液，用 PBS洗滌1次，再加入干凈的PBS充分混勻，放在樣品瓶中進(jìn)行磁共振成像。

2.6 大鼠肌肉壞死模型的制備

微波消融是一種常見的誘導(dǎo)組織壞死的手段，根據(jù)文獻(xiàn)方法［19］，本次實(shí)驗(yàn)選取6只220～240 g大鼠，腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg／kg）麻醉，將微波消融針插入大鼠左腿的肌肉中，30 W維持20 s引發(fā)大腿肌肉壞死，為避免感染，在每只大鼠的肌肉內(nèi)注射了1.6×105IU的青霉素。

2.7 肌肉壞死模型大鼠的MR成像及數(shù)據(jù)處理

將肌肉壞死模型大鼠分為兩組：對照組（Gd-DOTA）3只，給藥組（GdE1）3只。起初采用T1WI和T2WI掃描6只大鼠的腿部，兩組均按照0.1 mmol／kg的濃度給藥，給藥后進(jìn)行 CET1WI掃描，掃描后利用GE AW4.3工作站處理數(shù)據(jù)。參數(shù)設(shè)置為［13］：T1W SE序列：TE 24 ms，TR 550 ms；CE-T1W SE序列：TE 60 ms，TR 550 ms；T2W FSE序列：TE 88 ms，TR 2920 ms。間隔0.2 mm，層厚3mm，F(xiàn)OV 100×100 cm2，NEX 2次，矩陣224×192。

在相同截面同一位置的肌肉MRI圖像上挑選感興趣區(qū)域（ROI），對該區(qū)域不同時(shí)間點(diǎn)的信號值（SI）進(jìn)行測量，根據(jù)公式 CR=SInecrosis／SInormal計(jì)算壞死肌肉與正常肌肉的對比度（CR），分別計(jì)算給藥后各時(shí)間點(diǎn)的CR。

2.8 大體切片及HE染色

在MRI掃描結(jié)束前6 h每組取1只大鼠尾靜脈注射0.05%伊文思藍(lán)溶液0.4 mL，掃描結(jié)束后將給予伊文思藍(lán)的大鼠進(jìn)行安樂死，使其平躺固定在大鼠紙板上，置于-20℃冰箱冰凍8 h，隨后在大體切片機(jī)上進(jìn)行切片，當(dāng)切到與MRI圖像對應(yīng)的層面時(shí)用數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍照。

在上述冷凍大鼠體內(nèi)取出部分相關(guān)肌肉組織，用冰凍切片機(jī)切成10μm薄片，將薄片進(jìn)行HE染色，染色后用數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍照，最后在顯微鏡下觀察肌肉細(xì)胞的形態(tài)。

2.9 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié) 果

3.1 配體E1的結(jié)構(gòu)鑒定

通過1H NMR、13C NMR、ESI-MS鑒定其結(jié)構(gòu)。1H NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：11.80（2H，s，-OH），8.99（s，1H，-NH），8.50（s，1H，-NH），7.85～7.72（m，4H，Ar-H），7.40（d，1 H，J=9.0 Hz，Ar-H），3.92（m，2H，CH2-O），3.81（m，2H，-OCH2），3.61～2.81（m，12H，6×CH2），1.42～1.24（m，16H，8×CH2）。13C NMR（75 MHz，DMSO-d6） δ：191.35，171.37，164.19，161.23，141.54，137.51，124.52，122.42，119.38，117.55，68.40，54.84，54.00，53.10，50.52，48.77，39.23，38.78。分子式：C35H44N6O13。ESI-MSm／z：757.3［M+H］+。

3.2 GdE1的弛豫測定及體外成像

圖1-A呈現(xiàn)了不同濃度的GdE1以及Gd-DOTA的成像圖，從左到右濃度逐漸增加，由此可知在0～2 mmol／L濃度范圍內(nèi)，隨著造影劑的濃度的增加，信號逐漸增強(qiáng)。從圖1-B可以看出GdE1在PBS中的r1（5.45，R2＞0.99）顯著高于臨床上常用的磁共振對比劑Gd-DOTA（4.08，R2＞0.99）。

3.3 油水分配系數(shù)（lg P）的測定

測得GdE1的lgP為-（1.66±0.09）。

3.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

圖2-A可以看出在12.5～200μmol／L濃度范圍內(nèi)，GdE1組和Gd-DOTA組的HepG2細(xì)胞存活率均與空白組沒有顯著性差異（P＞0.05），說明在此濃度范圍內(nèi)GdE1和Gd-DOTA對人肝癌HepG2細(xì)胞沒有毒性。圖2-B中可以看出，在12.5～25μmol／L濃度范圍內(nèi)，GdE1組和 Gd-DOTA組的IO2細(xì)胞存活率均與空白組沒有顯著性差異（P＞0.05），說明在低濃度范圍內(nèi) GdE1和Gd-DOTA對人正常肝IO2細(xì)胞沒有毒性。但是在 50～200μmol／L濃度范圍內(nèi)，GdE1組的IO2細(xì)胞存活率均與空白組相比具有顯著性差異（P＜0.05）；在 100～200μmol／L濃度范圍內(nèi)，Gd-DOTA組的細(xì)胞存活率與空白組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。因此，相比于肝癌細(xì)胞，GdE1與Gd-DOTA在正常肝細(xì)胞中的安全性較低。

3.5 體外細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)

圖3顯示，在與GdE1共同孵育30 min以后，壞死細(xì)胞的亮度明顯比活細(xì)胞的亮度高，同時(shí)壞死細(xì)胞的信號強(qiáng)度（4 369±70）顯著高于活細(xì)胞（2 555±84）（P＜0.05），這些現(xiàn)象表明 GdE1能夠被壞死細(xì)胞特異性攝取。

Figure 1 Relaxation measurement and images of GdE1（upper panels）and Gd-DOTA（lower panels）in PBS（pH 7.4）with different conditions（0.125，0.25，0.5，1.0，2.0 mmol／L）A：Images ofGdE1 and Gd-DOTA；B：Relaxivity of GdE1 and Gd-DOTA

Figure 2 MTT assay of GdE1 and Gd-DOTA with different conditions（0，12.5，25，50，100，200μmol／L）A：MTT in the human hepatocellular carcinoma HepG2 cells（±s，n=3）；B：MTT in the human normal hepatic IO2 cells（±s，n=4）*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group

Figure 3 MR images of the human hepatocellular carcinoma HepG2 cellsA：HepG2 treated with GdE1 for 30 min；B：HepG2 heated in 57°C for 1 h and then treated with GdE1 for 30 min

3.6 大鼠肌肉壞死成像、大體切片及組織化學(xué)染色結(jié)果

如圖4-A所示，GdE1組在給藥后1 h，壞死肌肉信號強(qiáng)度明顯高于正常肌肉，但壞死組織的邊界有些模糊；等到了給藥后3 h，壞死肌肉與正常肌肉信號的壞死比（CR）達(dá)到2.00±0.12（圖4-B），顯著高于給藥后0 h（1.27±0.03）（P＜0.05），且壞死區(qū)域邊界十分清晰；給藥后3～9 h，CR逐漸下降，且給藥后3～5 h內(nèi)CR大于1.71，在這個(gè)時(shí)間范圍內(nèi)依然能夠清楚區(qū)分壞死組織與正常組織，但給藥9 h后CR降低至1.37±0.23（圖4-B），此時(shí)壞死肌肉區(qū)域的信號強(qiáng)度已經(jīng)與正常肌肉相差無幾；圖4-A中GdE1組最右邊一列大體切片圖像表明成功制造了壞死肌肉模型，伊文思藍(lán)能夠與體內(nèi)壞死組織特異性結(jié)合，并將壞死組織染成藍(lán)色，圖片中藍(lán)色區(qū)域?yàn)榧∪鈮乃啦课弧?/p>

圖4-A中，Gd-DOTA組最右邊一列表明肌肉壞死模型的成功制造，藍(lán)色區(qū)域?yàn)榧∪鈮乃啦课?，但在給藥后1～9 h并沒有觀察到肌肉壞死區(qū)域有明顯的信號增強(qiáng)；圖4-B表明，Gd-DOTA組的CR在給藥后0 h達(dá)到最高為1.23±0.02，而在給藥后1～9 h壞死比相差不大（CR都接近于1.00），可能是由于Gd-DOTA在體內(nèi)代謝很快，在給藥后1 h內(nèi)已經(jīng)完全從壞死組織中清除，失去了對壞死組織的成像能力。

圖4-C的HE染色結(jié)果在組織化學(xué)層面證明了模型的成功，正常肌肉區(qū)域細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞完整性較好，而壞死肌肉區(qū)域細(xì)胞的完整性遭到破壞且排列順序混亂。

以上結(jié)果表明，GdE1能夠被壞死肌肉特異性攝取，且停留時(shí)間較長，能夠在給藥后3～5 h對壞死區(qū)域進(jìn)行成像；而Gd-DOTA則在給藥后1 h內(nèi)快速從壞死組織中清除，這進(jìn)一步說明了GdE1具有壞死親和性。

4 討 論

本研究以大黃酸為底物，以較短的醚鏈（乙氧基乙基）為連接臂構(gòu)建了MRI對比劑Gd-DO3A-E-ther-Rhein（GdE1）。研究結(jié)果表明，GdE1水溶性良好且弛豫率較高，在體內(nèi)外均表現(xiàn)出良好的壞死靶向性，能夠通過MRI成像微波消融誘導(dǎo)的大鼠肌肉壞死部位，在壞死相關(guān)疾病的診斷中表現(xiàn)出良好的應(yīng)用潛力。

與之前報(bào)道的以烷烴鏈為連接臂的探針GdL1-3相比，GdE1的理化性質(zhì)顯著發(fā)生改變。為提高磁共振對比劑水溶性，可以在分子結(jié)構(gòu)中引入極性基團(tuán)，有報(bào)道在疏水性基團(tuán)與Gd-DTPA之間引入親水性基團(tuán)磷酸二酯能夠降低化合物的疏水性［20］。本研究中 GdE1（lgP=-1.66±0.09）水溶性高于以烷烴鏈為連接臂的GdL2（lgP=-1.32±0.01）和 GdL3（lgP=-0.71±0.01），說明分子結(jié)構(gòu)中引入親水性的醚鏈能夠提高分子探針的水溶性；此外，之前的研究中，以乙基為連接臂的GdL1（lgP=-2.15±0.01）水溶性最好，以丁基為連接臂的GdL2次之，以己基為連接臂的GdL3最差［12］，而新構(gòu)建的GdE1水溶性低于GdL1，可能是因?yàn)檫B接臂長度越短分子的水溶性越好。弛豫率方面，GdE1（r1=5.45）顯著低于 GdL1-3（r1分別為 7.28，7.35和8.03），可能是因?yàn)閷⑼闊N鏈替換為醚鏈增加了順磁性螯合物整體的旋轉(zhuǎn)擴(kuò)散速率［20］，或者醚鏈在水中沒有完全伸展導(dǎo)致水分子與Gd3+的接觸減少［21］，這些因素都會導(dǎo)致弛豫率的降低，具體的原因還有待深入的研究。

與之前以烷烴鏈為連接臂的探針GdL1和GdL3相比，GdE1在壞死組織中的保留時(shí)間明顯減少。GdL1能夠在給藥后3～12 h對壞死肝臟進(jìn)行MRI成像，該時(shí)段內(nèi)的 CR均大于1.95±0.15［12］；此外，GdL3在給藥后12 h壞死與正常肝臟的CR為2.36±0.20［13］，依然維持在較高水平，這表明兩者在壞死組織中有很長的保留時(shí)間。本研究中，GdE1成像時(shí)間窗僅為給藥后3～5 h，可見將分子結(jié)構(gòu)中的烷烴鏈替換為醚鏈會導(dǎo)致造影劑在壞死組織中被較快清除。之前的研究表明，以大黃酸為基礎(chǔ)構(gòu)建的造影劑的壞死親和性可能是由于分子與壞死組織中暴露的DNA結(jié)合所致［11-12］，因此，GdE1在壞死組織中保留時(shí)間的減少可能是因?yàn)榉肿优c壞死組織中的DNA結(jié)合能力下降，目前GdE1與DNA的體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。

本研究表明，對于 Gd-DO3A-Linker-Rhein探針，更換連接臂種類會改變分子探針的理化性質(zhì)及其在壞死組織中的保留時(shí)間，后續(xù)可以將哌啶或甘氨酸鏈［14］作為連接臂繼續(xù)研究。此外，本研究僅在細(xì)胞和肌肉壞死模型中評價(jià)了GdE1的壞死靶向性，今后可以在心肌梗死模型［11］、肝臟缺血再灌注模型或藥物誘導(dǎo)的腫瘤壞死模型［22］中進(jìn)一步評價(jià)該探針的壞死親和性。