基于正交試驗(yàn)的藏藥浴藥液發(fā)酵工藝優(yōu)化研究*

黃 河，許 洪，岳 萍，崔 峰，才 多，吳金鵬**

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)工程研究所,天津 300072；2.天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院,天津 300072； 3.西藏自治區(qū)藏醫(yī)院,西藏 拉薩 850000)

·實(shí)驗(yàn)研究·

基于正交試驗(yàn)的藏藥浴藥液發(fā)酵工藝優(yōu)化研究*

黃 河1，許 洪2，岳 萍1，崔 峰1，才 多3，吳金鵬1**

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 生物醫(yī)學(xué)工程研究所,天津 300072；2.天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院,天津 300072； 3.西藏自治區(qū)藏醫(yī)院,西藏 拉薩 850000)

藏藥浴是藏醫(yī)外治療法中的重要手段，對(duì)腦卒中后遺癥、風(fēng)濕類疾病等多種慢性疑難疾病療效顯著。傳統(tǒng)藏藥浴藥液發(fā)酵主要采用室溫自然發(fā)酵法，發(fā)酵時(shí)間長，且過程煩瑣、耗時(shí)，難以滿足當(dāng)現(xiàn)代臨床快速、簡便、安全的藥液制備需求。本研究采用正交試驗(yàn)的方法，開展“五味甘露方”藥液發(fā)酵工藝的優(yōu)化研究。結(jié)果表明，菌種對(duì)藏藥浴液發(fā)酵具有最顯著的影響，最優(yōu)藥液發(fā)酵方案為水溫37 ℃浸泡8 h，采用酒曲作為菌種以8 g/kg添加，在31 ℃下發(fā)酵24 h。研究表明，以藏醫(yī)傳統(tǒng)藥浴液發(fā)酵方法為基礎(chǔ)，對(duì)藏藥浴液發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化完全可行，通過合理選擇發(fā)酵參數(shù)可以顯著縮短藥液制備周期。

藏藥?。凰幰喊l(fā)酵；試驗(yàn)優(yōu)化

藏藥浴是藏醫(yī)外治療法中的重要手段，對(duì)腦卒中后遺癥、風(fēng)濕類疾病等多種慢性疑難疾病療效顯著。當(dāng)藥液作用于皮膚或患處時(shí)，產(chǎn)生的溫?zé)岽碳た梢源碳てつw神經(jīng)末梢感受器，擴(kuò)張血管，促進(jìn)血液與淋巴循環(huán)，加快新陳代謝，改善組織供養(yǎng)條件，調(diào)節(jié)與疏通經(jīng)絡(luò)[1～2]。藏藥浴以“五味甘露湯”為主方，隨癥加減其他藥物開展藥水浴[3～4]。其主要技術(shù)流程包括診斷、配方、藥液制備、藥浴施治與護(hù)理等環(huán)節(jié)，其中尤以藥液制備技術(shù)最為關(guān)鍵，是影響藏藥浴臨床療效的核心環(huán)節(jié)。

傳統(tǒng)藥液發(fā)酵主要采用室溫自然發(fā)酵法，發(fā)酵時(shí)間長(3 d～5 d)，且過程煩瑣、耗時(shí)，無法適應(yīng)現(xiàn)代社會(huì)快速、簡便、安全的需求。近年來，隨著藏藥浴療法的廣泛推廣，出現(xiàn)了3種改良的藏藥浴藥液制備方法：①直接煎煮法，直接煎煮五味甘露藏藥，獲取藥液；②直接煎煮法聯(lián)合乙醇法，在直接煎煮基礎(chǔ)上加入適當(dāng)比例的白酒；③溶解法，將五味甘露藏藥提取成顆粒劑(或膏劑)，使用時(shí)加入熱水溶解。雖然這些方法能明顯縮短藏藥浴液的制備時(shí)間，但其藥液質(zhì)量與傳統(tǒng)發(fā)酵法仍有較大差距。此外，傳統(tǒng)藏藥浴液發(fā)酵基本依賴經(jīng)驗(yàn)完成，沒有形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致不同批次藥液質(zhì)量存在較大差異。因此，本研究基于藏藥浴藏液傳統(tǒng)發(fā)酵工藝，采用試驗(yàn)分析的方法，對(duì)“五味甘露方”藥液發(fā)酵工藝開展優(yōu)化研究，旨在探索既保持傳統(tǒng)工藝特色，又符合現(xiàn)代臨床需求的藏藥浴藥液制備方法。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

藏麻黃、水柏枝、大籽蒿、圓柏、黃花杜鵑(西藏自治區(qū)藏醫(yī)院)；活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)；酒曲(安琪酵母股份有限公司)。FA2004N電子天平(讀數(shù)精度0.1 mg，河南兄弟儀器設(shè)備有限公司)；煎藥壺(康爾順貿(mào)易有限公司)；8分杯發(fā)酵機(jī)(廣東小熊電器有限公司)；HT511酒精濃度計(jì)折光儀(鄭州南北儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 五味甘露方主劑配制

以《四部醫(yī)典·后續(xù)部》、《祖先言教》、《藏醫(yī)十八支》、《千萬舍利》、《藍(lán)琉璃》等傳統(tǒng)典籍中記載的藏藥浴方劑、用法和注意事項(xiàng)為基礎(chǔ)，配制五味甘露藏藥。五味甘露藏藥組成為藏麻黃、圓柏、大籽蒿、水柏枝、黃花杜鵑。5種藥材的質(zhì)量百分比均為20 %，每份五味甘露藏藥為50 g。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)藏藥浴藥液發(fā)酵傳統(tǒng)工藝，以五味甘露藏藥為主藥，青稞為輔料進(jìn)行配制發(fā)酵，兩者質(zhì)量比為3∶1。藥液發(fā)酵經(jīng)浸泡、煮制、發(fā)酵3個(gè)過程。①浸泡：在藏藥中加入純凈水，藏藥與水的體積比為1∶3。②煮制：將浸泡好的藏藥煮沸，待水面降至與藏藥表面齊平時(shí)停火。③發(fā)酵：將煮制好的藏藥自然冷卻至發(fā)酵溫度，并維持該溫度直至發(fā)酵結(jié)束。

為優(yōu)化藥液發(fā)酵條件，選用試驗(yàn)優(yōu)化的方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)。試驗(yàn)優(yōu)化是應(yīng)用數(shù)學(xué)的一個(gè)新興分支，通過合理設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，可大大減小試驗(yàn)次數(shù)、有效控制試驗(yàn)干擾、科學(xué)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)優(yōu)化目標(biāo)[5～8]。根據(jù)藏藥浴液發(fā)酵工藝需求，選定浸泡水溫、浸泡時(shí)間、菌種、菌量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間作為考察的6個(gè)因素,每個(gè)因素各取2個(gè)水平，設(shè)誤差1列(見表1)。根據(jù)選定的因素水平，采用L8(27)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，以HT511酒精濃度計(jì)折光儀測定的酒精度值(°)作為考察指標(biāo)。對(duì)考察結(jié)果進(jìn)行極差與方差分析，以P<0.1為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 試驗(yàn)因素表

2 結(jié) 果

2.1 試驗(yàn)結(jié)果

以L8(27)為正交表進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，經(jīng)藥劑配比、浸泡、煎煮、發(fā)酵等步驟進(jìn)行藏藥浴液制備，以折合酒精度作為考察指標(biāo)。藥液制備過程如圖1所示，試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置與試驗(yàn)結(jié)果見表2。

圖1 藏藥浴液制備過程

試驗(yàn)號(hào)ABCDEFG酒精度111111117．521112222133122112264122221113．5521212129．562122121117221122178221211216

2.2 結(jié)果分析

表3的方差結(jié)果表明，菌種因素(C)對(duì)藏藥浴液發(fā)酵具有最顯著的影響，對(duì)藏藥浴液酒精度產(chǎn)生影響的因素作用權(quán)重排序?yàn)镈>F>G>A>E>B。最優(yōu)藥液發(fā)酵方案為A2-B2-D2-E2-F1-G2，即水溫37 ℃浸泡8 h，采用酒曲作為菌種以8 g/kg 添加，在31 ℃下發(fā)酵24 h，可得到最優(yōu)的酒精產(chǎn)出。

表3 藏藥浴液發(fā)酵的方差分析表

3 討論與結(jié)論

根據(jù)《四部醫(yī)典·后續(xù)部》和近年來的臨床報(bào)道，藏藥浴適應(yīng)證包括四肢強(qiáng)直或攣急、跛蹺、癤癰、炭疽、新舊瘡瘍炎腫、各種皮膚病、婦女產(chǎn)后風(fēng)、弓腰駝背關(guān)節(jié)變形、肌膚之間黃水充斥等，臨床治療范圍非常廣泛[9～12]。但傳統(tǒng)藏藥浴液發(fā)酵制備方法由于制備時(shí)間長、操作繁瑣、人工成本高、批量制備困難等，限制了藏藥浴的發(fā)展及推廣。因此，基于藏醫(yī)傳統(tǒng)藥浴液發(fā)酵方法，優(yōu)化藥浴發(fā)酵工藝，縮短發(fā)酵時(shí)間，規(guī)范發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)是本研究的核心目標(biāo)。本研究采用科學(xué)的試驗(yàn)優(yōu)化方法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，大大減小了試驗(yàn)量。結(jié)果表明，菌種對(duì)藏藥浴液發(fā)酵具有最顯著的影響，采用酒曲進(jìn)行藏藥浴液發(fā)酵效果最好。結(jié)果提示，最優(yōu)藥劑浸泡時(shí)間為8 h，藥液發(fā)酵時(shí)間為24 h，但該結(jié)果顯著性并不明顯，因此在以藥液發(fā)酵效率作為考核指標(biāo)時(shí)可以進(jìn)一步縮短浸泡時(shí)間與發(fā)酵時(shí)間，這對(duì)藏藥浴液的工業(yè)化生產(chǎn)具有重要參考價(jià)值。

綜上所述，以藏醫(yī)傳統(tǒng)藥浴液發(fā)酵方法為基礎(chǔ)，進(jìn)行藏藥浴液發(fā)酵優(yōu)化是可行的，通過合理選擇發(fā)酵參數(shù)可以大大縮短藥液制備周期。

[1] 黃福開.中國藏藥浴[M].北京：中國藏學(xué)出版社,2003.

[2] 黃福開.論藏藥浴的學(xué)術(shù)內(nèi)涵及其發(fā)展[J].中國藏學(xué),2002(2):26-32.

[3] 黃福開,劉英華.藏藥浴“五味甘露方”源流考[J].中國藏學(xué),2002(4):129-138.

[4] 吉太加.論“五味甘露方”與藏藥浴[J].中國藏學(xué),2007(3):157-161.

[5] 滕海英,祝國強(qiáng),黃 平,等.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)例分析[J].藥學(xué)服務(wù)與研究,2008,8(1):75-76.

[6] 劉玉紅,崔紅梅,陳 燕,等.正交試驗(yàn)法研究甘草的提取工藝[J].中成藥,2004,26(3):239-241.

[7] 何文斐,李士敏,楊鑫驥.正交試驗(yàn)探討金銀花揮發(fā)油的提取條件[J].中國中藥雜志,2003,28(2):172-173.

[8] 黃 園,徐雄良,張志榮,等.正交試驗(yàn)法研究水提與醇提對(duì)大黃蒽醌提取率的影響[J].中成藥,2003,25(4):273-276.

[9] 段利學(xué).藏藥浴與養(yǎng)生保健[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2014,20(6):71-73.

[10] 李先加.藏藥浴治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎223例臨床觀察[J].中國民族醫(yī)藥雜志,1997(2):15-16.

[11] 齊曉輝.略論藏藥浴與康復(fù)醫(yī)學(xué)相結(jié)合治療CVA運(yùn)動(dòng)障礙[J].中國藏學(xué),2007(3):162-166.

[12] 倉菊卓瑪,邊 巴.藏藥浴治療痙攣型腦癱兒的臨床治療效果[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2012,18(2):18-19.

①國家科技支撐計(jì)劃“民族醫(yī)藥病證結(jié)合及特色治療技術(shù)臨床研究”(編號(hào)：2014BAI10B10)；

②西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥管理局科技專項(xiàng)“藏藥浴藥液制備關(guān)鍵技術(shù)及療效研究”(編號(hào)：2017038)。

**通訊作者。

R944.1+2

A

1006-978X(2017)06-0007-02

2017-10-05

2017-10-30

朱慶文