過氧化物酶法檢測sdLDL-C的分析性能評價

杜敏

摘要：目的? 分析過氧化物酶法檢測小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C）的性能。方法? 選擇2018年10月～2018年12月在我院接受健康體檢的120例體檢者作為研究對象，均采用過氧化物酶法對sdLDL-C進行檢測。以美國臨床實驗室標準協(xié)會EP文件要求，對過氧化物酶法檢測sdLDL-C的精密度、參考區(qū)間、抗干擾能力進行評估和分析。結(jié)果? 低值總精密度、高值總精密度分別為（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。低值總CV、高值總CV分別為3.14%、2.80%，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。男性中青年組sdLDL-C水平為（0.61±0.18）mmol/L，高于女性中青年組的（0.43±0.10）mmol/L;男性老年組sdLDL-C水平為（0.75±0.12）mmol/L，低于女性老年組的（0.89±0.20）mmol/L，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在血紅蛋白、膽紅素、乳糜微粒干擾水平分別為5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，與試劑盒廠商說明書提供的參考數(shù)據(jù)相符。結(jié)論? 過氧化物酶法應(yīng)用于sdLDL-C的檢測中，在抗干擾性、重復性、操作性方面具有一定優(yōu)勢，符合實驗室常規(guī)檢測的需要。

關(guān)鍵詞：過氧化物酶法;sdLDL-C;膽固醇;性能評價

中圖分類號：R446.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.14.060

文章編號：1006-1959（2019）14-0178-02

Abstract：Objective? To analyze the performance of peroxidase assay for small， dense low-density lipoprotein cholesterol （sdLDL-C）. Methods? 120 patients who underwent a physical examination in our hospital from October to December 2018 were enrolled in the study. All of them were tested by sdLDL-C by peroxidase method. The precision， reference interval， and anti-interference ability of sdLDL-C were measured and analyzed by peroxidase method according to the requirements of EP file of American Clinical Laboratory Standards Association. Results? The total precision of the low value total precision and high value were （0.06±0.02） mmol/L and （2.18±0.07） mmol/L， respectively，the difference was statistically significant （P<0.05）. The total CV of low value and the total CV of high value were 3.14% and 2.80%， respectively，the difference was statistically significant （P<0.05）. The sdLDL-C level in male middle-aged group was （0.61±0.18） mmol/L， which was higher than that in female middle-aged group （0.43±0.10） mmol/L; the male sdLDL-C level was （0.75±0.12） mmol/L， lower than the female elderly group （0.89 ± 0.20） mmol / L， the difference was statistically significant （P<0.05）. The interference levels of hemoglobin， bilirubin， and chylomicrons were 5 g/L， 598.5 μmol/L， and 67.7 mmol/L， respectively， which were consistent with the reference data provided by the kit manufacturer's instructions.Conclusion? The peroxidase method has certain advantages in the detection of sdLDL-C in terms of anti-interference， repeatability and operability， and meets the needs of routine laboratory testing.

Key words：Peroxidase method;sdLDL-C;Cholesterol;Performance evaluation

小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C）是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）中的一種常見分型[1]。研究表明，sdLDL-C是致動脈粥樣硬化的主要亞型，且與動脈粥樣硬化類疾病發(fā)生心腦血管事件有密切聯(lián)系，對心腦血管疾病的評估具有較高的參考價值[2]。目前，sdLDL-C的檢測方法比較多，過氧化物酶檢測法便是其中之一。過氧化物酶檢測法相較于梯度凝膠電泳法、密度梯度超速離心法、核磁共振光譜法等檢測sdLDL-C的方法，較容易在臨床實驗室推廣應(yīng)用，從而為臨床常規(guī)檢測sdLDL-C提供了可能[3]。為進一步探究過氧化物酶檢測法在sdLDL-C檢測中的應(yīng)用及效果，本研究針對30例收治的健康體檢者，采用過氧化物酶檢測法檢測sdLDL-C進行了分析，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2018年10月～12月黑龍江省佳木斯市中心醫(yī)院120例健康體檢者作為研究對象，排除合并嚴重的臟器功能衰竭者，年齡21～78歲。其中男64例，年齡21～78歲，平均年齡（45.84±2.35）歲;女56例，年齡22～78歲，平均年齡（45.05±2.41）歲。根據(jù)年齡將21～59歲設(shè)為中青年組，60～78歲設(shè)為老年組。男中青年組40例，平均年齡（33.26±3.12）歲;男老年組24例，平均年齡（64.23±2.08）歲;女中青年組30例，平均年齡（34.05±3.39）歲;女老年組26例，平均年齡（63.89±2.17）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，研究對象均知情同意，并簽署同意書。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑? sdLDL-C過氧化物酶法檢測試劑盒，配套膠質(zhì)校準品，配套質(zhì)控品1和2（16-0622），由北京九強生物試劑公司提供，全自動生化分析儀由日本Hitachi7600公司提供。

1.2.2標本采集? 于清晨8時空腹狀態(tài)下采集受檢者靜脈血，劑量為5 ml，保存至黃頭管（分離膠管）中，30 min內(nèi)在3000 r/min的環(huán)境下離心處理5 min，而后保存于-20℃的冰箱中，于2 h內(nèi)集中檢測。

1.2.3檢測方法? 采用過氧化物酶法進行檢測，試劑盒采用兩步法分析。檢測溫度設(shè)置為37℃，主波長和副波長分別設(shè)置為600 nm、700 nm，反應(yīng)時間為10 min，校準方式為亮點線性校準。

1.2.4精密度檢測? 參照美國臨床實驗室標準協(xié)會（CLSI）臨床化學設(shè)備操作精密度評價核準指南，取0.50 mmol/L（低值混合血清）、2.20 mmol/L（高值混合血清）作為實驗標本。對標本進行反復檢測，次數(shù)控制為20次，計算平均值、標準差以及變異系數(shù)（CV），得到批內(nèi)精密度相關(guān)數(shù)據(jù)。在此基礎(chǔ)上，再于每天對標本進行2次測定，每次測定做2份，測定20 d，計算出平均值、標準差以及CV，得到批間精密度。

1.2.5抗干擾試驗? 參照CLSI相關(guān)指南，取健康受檢者EDTA-k2抗凝的全血樣品，進行離心處理后將血漿去除，取上層血清，反復凍融后配制成高水平（50 g/L）的溶血樣品備用。取黃疸和脂濁者標本作為干擾物質(zhì)。混合血清分為2份，1份加入干擾物質(zhì)，1份不加干擾物質(zhì)（加等量去離子水），按比例混合成不同的水平梯度，測定3次，在血紅蛋白、膽紅素、乳糜微粒干擾水平計算分析干擾。若結(jié)果≤10.0%表示無干擾影響。

1.3統(tǒng)計學方法? 數(shù)據(jù)分析使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件包，計量資料采用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用（%）表示，組間比較采用？字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1精密度檢測? 低值總精密度、高值總精密度分別為（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。低值總CV、高值總CV分別為3.14%、2.80%，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2不同性別sdLDL-C參考區(qū)間比較? 男性中青年組sdLDL-C參考區(qū)間水平高于女性中青年組，男性老年組低于女性老年組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.3抗干擾試驗? 在血紅蛋白、膽紅素、乳糜微粒干擾水平分別為5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，與試劑盒廠商說明書提供的參考數(shù)據(jù)相符，可用于抵抗臨床常見的干擾問題。

3討論

近年來，心血管疾病的發(fā)病率及致死率不斷上升，已位居我國國民死因首位[4]。動脈粥樣硬化是造成心血管疾病的主要因素，而動脈粥樣硬化又是多種因素共同作用的結(jié)果，較為常見的因素如肥胖、糖尿病、高血壓、血脂異常等。其中，血脂異常作為動脈粥樣硬化的常見因素，受到了臨床的廣泛關(guān)注，可以通過對三酰甘油、總膽固醇及高、低密度脂蛋白膽固醇的檢測進行評估。研究發(fā)現(xiàn)，小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C）可以作為新的脂類危險因素，應(yīng)用在缺血性心血管疾病患者的評估和預后中，具有較高的應(yīng)用價值[5]。

過氧化物酶法sdLDL-C試劑盒的檢測原理源于Hiran等提出利用特殊表面活性劑與脂蛋白的特異性反應(yīng)從而檢測sdLDL-C水平的理論。即選用聚氧乙烯芐基苯基醚衍生物作為表面活性劑選擇性地解離出非LDL-C脂蛋白成分，膽固醇酯被膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶分解掉，大而輕低密度脂蛋白被鞘磷脂酶水解，從而只有剩余的sdLDL-C參與顯色反應(yīng)。該方法利用特異表面活性劑使試劑中的酶可以和特定的脂蛋白發(fā)生特異的反應(yīng)，sdLDL-C被釋放出來參與顯色反應(yīng)的原理進行檢測，具有較強的操作性。本研究中低值總精密度、高值總精密度分別為（0.06±0.02）mmol/L、（2.18±0.07）mmol/L，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。低值總CV、高值總CV分別為3.14%、2.80%，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。男性中青年組sdLDL-C水平高于女性中青年組，男性老年組sdLDL-C水平低于女性老年組（P<0.05）。在血紅蛋白、膽紅素、乳糜微粒干擾水平分別為5 g/L、598.5 μmol/L、67.7 mmol/L，與試劑盒廠商說明書提供的參考數(shù)據(jù)相符。且仍與CLSI相關(guān)指南一致，提示過氧化物酶法檢測的價值。

綜上所述，過氧化物酶法檢測sdLDL-C效果明顯，可滿足臨床常規(guī)檢測要求，具有一定的應(yīng)用價值。

參考文獻：

[1]聞華，張潤玲.小而密低密度脂蛋白膽固醇臨床檢測應(yīng)用的研究進展[J].標記免疫分析與臨床，2017，24（12）：1440-1442.

[2]成士清，鞠瑛，欒芳，等.清除法測定小而密低密度脂蛋白膽固醇的方法學評價及臨床應(yīng)用初探[J].中華檢驗醫(yī)學雜志，2017，40（4）：253.

[3]徐競，李美英，周曾.小而密低密度脂蛋白膽固醇聯(lián)合同型半胱氨酸檢測對腦梗死老年患者預后評估的價值[J].安徽醫(yī)學，2017，38（9）：64-68.

[4]Wang M，Li YF，Guo YG，et al.Positive correlation between plasma PCSK9 and tissue factors levels in patients with angiographically diagnosed coronary artery disease and diabetes mellitus[J]. Journal of Geriatric Cardiology Jgc，2016，13（4）：312-315.

[5]Zhang Y，Xu RX，Li S，et al.Association of plasma small dense LDL cholesterol with PCSK9 levels in patients with angiographically proven coronary artery disease[J].Nutr Metab Cardiovasc Dis，2015，25（4）：426-433.

收稿日期：2019-2-13;修回日期：2019-2-24

編輯/馮清亮