連翹藥材商品規(guī)格等級標準研究

李婷,李石飛*,雷振宏,詹志來,張立偉*

(1.山西大學 分子科學研究所 化學生物學與分子工程教育部重點實驗室,山西 太原 030006; 2.山西振東道地藥材開發(fā)有限公司,山西 長治 047100; 3.中國中醫(yī)科學院 中藥資源中心 道地藥材國家重點實驗室培育基地,北京 100700)

0 引言

連翹(Forsythiae Fructus)為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.) Vahl的干燥果實,具有清熱解毒,消腫散結(jié),疏散風熱之功效。用于癰疽,瘰疬,乳癰,丹毒,風熱感冒,溫病初起,溫熱入營,高熱煩渴,神昏發(fā)斑,熱淋澀痛[1]。目前的連翹藥材資源主要來自野生和半野生(野生撫育),野生資源主要分布中西部地區(qū)的山西、陜西、河南、河北等地,而半野生(野生撫育)資源是圍繞野生連翹習性構(gòu)建。

連翹始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2],并以連翹為正名,后世皆沿用此名稱,常見別名有:《神農(nóng)本草經(jīng)》,謂連翹別名為“一名異翹,一名簡華,一名折根,一名軹,一名三廉?！薄稜栄拧め尣荨吩?連,異翹,郭璞注云:一名連苕,又名連草[3]。張仲景謂翹根為連軺?！端幮哉摗分^連翹為旱連子?！侗静菥V目》將旱連子記為“旱蓮子”[4]。唐《新修本草》注云:此物有兩種,大翹、小翹[5]。宋蘇頌《本草圖經(jīng)》[6]、寇宗奭《本草衍義》[7]、明《本草綱目》[8]及清代《本草備要》[9]、《植物名實圖考長編》[10]等.皆以“連翹”為品名列入草部。《滇南本草》[11]以“苦連翹”收載。

盡管連翹始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,但其基原在歷代本草使用過程中卻發(fā)生了變化。通過對歷代本草進行考證發(fā)現(xiàn),在唐之前連翹的藥用部位是多樣的,果實、莖葉、莖花以及根均可入藥。而到唐代以后主要以果實入藥,其中唐代《新修本草》對連翹進行了詳細描述,稱“此物有兩種:大翹、小翹。大翹葉狹長如水蘇,花黃可愛,生下濕地,著子似椿實之未開者,作房,翹出眾草”,這些特征均符合現(xiàn)今金絲桃屬的湖南連翹(Hypericumascyron)[12]。“小翹”的描述為“其小翹生崗原之上,葉花實皆似大翹而小細,山南人并用之。今京下惟用大翹子,不用莖花也”。隨后宋代蘇頌《本草圖經(jīng)》中對連翹的記載與《新修本草》相似:“有大翹、小翹二種,生下濕地或山崗上;葉青黃而狹長……以此得名,葉狹而小,莖短,才高一、二尺,花亦黃,實房黃黑,內(nèi)含黑子如粟粒,亦名旱連草”?！侗静輬D經(jīng)》中不僅在“大翹”上兩者相秉承,對“小翹”也有了詳細補充,這些補充特征與現(xiàn)今的貫葉連翹(Hypericumperforatum)和趕山鞭(Hypericumattenuatum)相似[12-13]。可見宋以前連翹實則為金絲桃科金絲桃屬湖南連翹或近源植物等。但蘇頌在《本草圖經(jīng)》又增加了木犀科連翹屬的連翹(Forsythiasuspensa),《本草圖經(jīng)》云“今南中醫(yī)家說云:連翹蓋有兩種:一種似椿實之未開者,殼小堅而外完,無跗萼,剖之則中解,氣甚芬馥,其實才干,振之皆落,不著莖也;一種乃如菡萏……”前者的特征正符合木犀科連翹的特征:果實也似椿實,但殼小而堅硬,無宿存花萼,剖開后氣甚香,果實干后即脫落。并附連翹圖5幅,其中鼎州(今湖南常德)連翹與湖南連翹相似,澤州連翹則與木犀科連翹相似。此后,歷代本草對連翹的描述均較一致,均以木犀科植物連翹的果實作為連翹的正品?！吨兴幹尽穂14]和《中國藥典》均以木犀科連翹的果實為連翹正品的唯一來源。

宋以前,連翹生境為“處處有”,“多生下濕地及山谷間”?！侗静輬D經(jīng)》是最開始記載木犀科連翹的,“今南中醫(yī)家說云:連翹蓋有兩種:一種似椿實之未開者。一種乃如菡萏。今如菡萏者,江南下澤間極多。如椿實者,乃自蜀中來,用之亦勝江南者?！比绱粚嵳邽槟鞠七B翹,如菡萏者為湖南連翹,從此處描述可見湖南連翹以江南為多,木犀科連翹最開始來自蜀中。在《本草圖經(jīng)》中所附的5幅連翹圖中,“澤州連翹”與現(xiàn)今木犀科連翹相一致,“河中府連翹”則與“澤州連翹”較相似,“鼎州連翹”則與湖南連翹相一致,“兗州連翹”和“岳州連翹”則均無從考,與木犀科連翹和湖南連翹均不相似?！侗静輬D經(jīng)》還對連翹的生境和產(chǎn)地進行了描述“生泰……山谷,今汴京及河中、江寧府、澤、潤、淄、兗、鼎、岳、利諸州、南康軍皆有之”?，F(xiàn)今的木犀科連翹和湖南連翹也主產(chǎn)于這些地區(qū)。宋以后的連翹為木犀科連翹而非湖南連翹,故其生境描述為“下濕地亦無,太山山谷間甚多”。目前連翹的主產(chǎn)區(qū)主要是太行山脈、太岳山脈、中條山和伏牛山等周邊地區(qū)。

連翹始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具體性狀質(zhì)量方面的評價較少,無品質(zhì)方面的具體記載,僅見明代《本草原始》[15]“閉口者佳,開瓣者不堪用”之記載。在近代文獻中描述如下:1977版《中國藥典》一部:“青翹”以色較綠,不開裂者為佳。“老翹”以色較黃、瓣大、殼厚者為佳[16]。《中華本草》[17]:青翹以色較綠,不開裂者為佳。老翹以色較黃、瓣大、殼厚者為佳。

1 實驗材料與儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀,美國安捷倫公司;Phenomenex C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),Thermo Scientific 科技中國公司;SB-3200DTS型超聲波掃描清洗機,寧波新芝生物科技有限公司;OHAUS CP114型1/1萬電子分析天平。

65批連翹樣品均來自藥材市場和山西連翹基地,詳細信息見附錄1樣品信息表,經(jīng)山西大學分子科學研究所張立偉教授鑒定分別為木犀科連翹屬植物連翹的干燥果實。連翹酯苷A對照品購自中國食品藥品檢定研究院(批號79916-77-1),連翹苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院(批號110821-201213);甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純均購自天津市大茂化學試劑廠,其他試劑均為分析純,實驗用水為娃哈哈純凈水。

2 實驗方法

2.1 連翹外觀性狀指標的測量

百果重、果柄殘留率、開殼率以及果實直徑和長度的測量，隨機抓取各批連翹中的100顆(老翹2瓣為1顆果實),使用分析天平稱重,即其百果重;對樣品進行挑揀,選出有果柄以及開殼的數(shù)量,計算得果柄殘留率和開殼率;使用數(shù)顯游標卡尺對連翹果實的直徑和長度進行測量。

2.2 化學品質(zhì)指標的測量

按照《中國藥典》連翹的含量測定方法,連翹酯苷A和連翹苷為其主要有效成分。以這兩種成分為化學品質(zhì)指標,用HPLC分別測定了65批連翹樣品中兩種藥效成分的含量。

分別制備供試品和對照品溶液,色譜條件為:乙腈(A)-0.4%冰醋酸水溶液(B)梯度洗脫,0～33 min,15%A,33～43 min,15%～25%A,43～60 min,25%A;檢測波長為277、330 nm;流速為1 mL·min-1;柱溫為25℃;進樣量10 μL。按以上條件用對照品溶液分別進行線性關(guān)系、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復性試驗、準確度5種方法學考察,最后通過相關(guān)系數(shù)r和RSD值的計算結(jié)果表明此方法的線性關(guān)系、儀器精密度、24 h的穩(wěn)定性、重復性和準確度均較好。故不同產(chǎn)地的65批連翹可以采用上述條件,根據(jù)標準曲線計算連翹兩種有效成分含量。

2.3 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 17. 0 統(tǒng)計軟件對65批連翹藥材中包括外觀性狀和化學品質(zhì)在內(nèi)的5個指標進行描述統(tǒng)計分析,通過各變量的均值、標準差、均值的聯(lián)合置信空間判斷該分類是否顯著合理;以商品規(guī)格等級為分類變量,從道地產(chǎn)區(qū)和各藥材市場對連翹藥材的5個指標進行了多重對應分析,并結(jié)合市場實際情況,完善連翹商品規(guī)格等級標準。

3 結(jié)果與分析

3.1 連翹中藥材商品規(guī)格等級考證匯總

3.1.1 連翹現(xiàn)有商品規(guī)格等級文獻匯總

目前對連翹藥材商品規(guī)格等級劃分的規(guī)定主要是依據(jù)國家中醫(yī)藥管理局1984年頒布的《76種藥材商品規(guī)格標準》[18]:將連翹藥材劃分為老翹和青翹兩個規(guī)格,均為統(tǒng)貨。2016年成都天地網(wǎng)信息科技有限公司聯(lián)合中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所聯(lián)合發(fā)表的《梔子吳茱萸等7種果實種子類藥材商品電子交易規(guī)格等級標準》[19]研究論文。該研究通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)地和市場,青翹均出現(xiàn)選貨(去柄貨),這類青翹主要是選擇一些青翹較大的,不開口,然后進行去柄,俗稱去柄貨,因此在《76種中藥材商品規(guī)格標準》基礎上進行了細化,連翹依然分青翹和老翹兩種規(guī)格,等級上進行了選貨和統(tǒng)貨之分,分為青翹選貨和統(tǒng)貨、老翹選貨和統(tǒng)貨,依據(jù)開口個重量占比、碎瓣重量占比、枝梗葉重量占比進行劃分。

3.1.2 連翹商品規(guī)格產(chǎn)地加工和市場流通情況調(diào)查

為了更好地獲悉連翹采收加工和市場流通情況,也為了制定出較好的連翹商品規(guī)格等級的劃分標準。我們對河北安國、安徽亳州、成都蓮花池、河南禹州四個國家級中藥材市場的連翹流通狀況以及連翹道地產(chǎn)區(qū)(山西安澤產(chǎn)區(qū)、山西平順產(chǎn)區(qū)、河北涉縣產(chǎn)區(qū))的連翹采收加工情況進行了調(diào)研,并收集了相應的連翹藥材樣品,其中老翹統(tǒng)貨樣品14個,青翹選貨和統(tǒng)貨樣品共51個。根據(jù)調(diào)查的結(jié)果發(fā)現(xiàn):1)連翹的炮制存在不同的方式,有水煮烘干、汽蒸烘干、直接炕干和直接曬干。干燥方法主要是炕干,大型制藥企業(yè)會采用烘干方式。2)連翹有青翹和老翹兩個規(guī)格,老翹均為統(tǒng)貨,青翹在個別市場和產(chǎn)地加工作坊均出現(xiàn)了青翹選貨,即青翹去柄貨。3)青翹的采收時間不一致,在產(chǎn)地和市場均能見到不同采收時間的青翹。

3.2 連翹中藥材規(guī)格等級劃分

鑒于目前連翹流通中出現(xiàn)了青翹去柄貨的情況,并結(jié)合歷代對連翹品質(zhì)的評價,我們對收集回來的連翹藥材樣品進行了外觀指標數(shù)據(jù)測量。數(shù)據(jù)測量值主要有:開殼率、百果重、果柄殘留率以及果實直徑和長度。通過SPSS軟件對數(shù)據(jù)進行分布頻率分析,結(jié)果見表1,并給出相應正態(tài)分布直方圖(圖1)。由于不同規(guī)格等級連翹果實的直徑和長度無差異,均符合《中國藥典》規(guī)定,故未對此項進行進一步分析。從表中可以發(fā)現(xiàn),青翹(選貨和統(tǒng)貨)與老翹,在百果重、果柄殘留率和開殼率都存在顯著差異的,完全屬于兩種規(guī)格。青翹選貨和統(tǒng)貨,在百果重上盡管均值有差異,但以均值來劃分等級不合理,因為在90%和80%的置信區(qū)間,青翹選貨和統(tǒng)貨是沒有差異的。在開殼率上,青翹選貨和統(tǒng)貨不僅在均值上差異不顯著,且在90%和80%的置信區(qū)間也沒有差異。但是在果柄殘留率上,青翹選貨和統(tǒng)貨,在均值和90%和80%的置信區(qū)間,兩者都是存在極顯著差異的。青翹選貨和統(tǒng)貨各測量值的正態(tài)分布直方圖進一步表明,青翹和老翹的差異是顯著的,青翹選貨和統(tǒng)貨在果柄殘留率的差異也是顯著的。在百果重和開殼率上,盡管青翹選貨和統(tǒng)貨在均值、90%和80%置信區(qū)間差異不顯著,但是從分布圖中可以發(fā)現(xiàn),青翹選貨在百果重和開殼率上的分布范圍較統(tǒng)貨要窄,也就是說選貨較統(tǒng)貨還是有一定差異的,而統(tǒng)貨則較廣泛。

表1 連翹商品規(guī)格等級數(shù)據(jù)測量結(jié)果

Fig.1 Histogram of Qingqiao Xuanhuo, Qingqiao Tonghuo and Laoqiao Tonghuo圖1 青翹選貨、青翹統(tǒng)貨和老翹統(tǒng)貨各測量數(shù)據(jù)的直方圖

因此,結(jié)合連翹的本草和歷代品質(zhì)考證,并通過對市場和產(chǎn)地所流通的不同規(guī)格等級連翹的各項數(shù)值的測定,將連翹商品規(guī)格等級分為青翹和老翹兩個規(guī)格,青翹分為選貨和統(tǒng)貨兩個等級,相應的分級標準(草案)見表2。青翹選貨和統(tǒng)貨兩者的主要區(qū)分在于果柄的殘留率,當青翹選貨在90%置信區(qū)間,其果柄殘留率為14%,在95%置信區(qū)間為10%,兩者之間差異不大,且考慮到實際操作性,故取10%作為區(qū)分點。根據(jù)圖1的分析,青翹統(tǒng)貨果柄殘留率在30%～80%之間,故不做要求。由于不同青翹加工方式均可制備青翹選貨和統(tǒng)貨,故對青翹的加工方式也不做要求,但目前市場和產(chǎn)地普遍存在不同加工方式青翹商品(見表2注1)。

表2 連翹商品規(guī)格等級劃分表(草案)

Fig.2 Characters of different commodity and grade standard of Forsythia Fructus圖2 不同商品規(guī)格等級的連翹商品性狀圖

3.3 不同商品規(guī)格等級連翹中的連翹酯苷A和連翹苷含量測定

采用2015版《中國藥典》中連翹酯苷A和連翹苷的測定方法,對以上所有連翹樣品進行連翹酯苷A和連翹苷含量測定,結(jié)果見表1,并用直方圖對數(shù)據(jù)進行分析(圖3)。從表1中可以看出,青翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量是符合藥典規(guī)定的,而部分老翹中連翹苷的含量是未達到藥典規(guī)定的。青翹選貨中的連翹酯苷A的含量與青翹統(tǒng)貨相比是存在顯著差異的,且選貨中連翹酯苷A含量的均值遠高于統(tǒng)貨。青翹選貨中連翹苷的含量與青翹統(tǒng)貨相比是不存在顯著差異,但其含量均值略高于統(tǒng)貨。進一步通過分布直方圖分析,從中也可以發(fā)現(xiàn),青翹選貨中,連翹酯苷A的含量普遍在5.5%～8.5%之間,連翹苷的含量在0.45%～1.25%之間;而青翹統(tǒng)貨中,連翹酯苷A的含量普遍在2.0%～8.0%之間,連翹苷的含量在0.25%～1.00%之間。很顯然,青翹統(tǒng)貨中連翹酯苷A和連翹苷的分布較選貨廣,也就是說,盡管青翹選貨中連翹酯苷A和連翹苷的含量不是最高,但其整體含量值的范圍卻是要好于統(tǒng)貨,即青翹選貨的質(zhì)量是要優(yōu)于統(tǒng)貨的。這一結(jié)果從有效成分的含量上,確證了青翹選貨和統(tǒng)貨分級的合理性。

Fig.3 Histogram of active component content of Qingqiao Xuanhuo, Qingqiao Tonghuo and Laoqiao Tonghuo圖3 青翹選貨、青翹統(tǒng)貨和老翹統(tǒng)貨中有效成分含量的分布直方圖

4 討論

中藥材商品規(guī)格等級是評價中藥材質(zhì)量優(yōu)劣的重要參考指標,影響著同種藥材價格高低,對促進中藥材“優(yōu)質(zhì)優(yōu)價”,方便、規(guī)范市場交易,以及對整個中藥行業(yè)的發(fā)展具有重要意義[20]。連翹作為常用清熱解毒藥,不僅在中成藥中使用廣泛,在臨床上亦是首選的清熱解毒藥。因此,對流通中的連翹商品規(guī)格等級研究及標準制定不僅能確保連翹品質(zhì),也能規(guī)范市場,確保百姓用藥的安全。目前流通中連翹商品規(guī)格主要還是依據(jù)中國中醫(yī)藥管理局1984年頒布的《七十六種藥材商品規(guī)格標準》所執(zhí)行,亦是《中國藥典》所規(guī)定的標準,即依據(jù)采收期分青翹和老翹兩個規(guī)格。作為果實一類的藥材,目前在連翹流通中出現(xiàn)青翹去柄貨,該類商品并不是依據(jù)傳統(tǒng)果實類大小進行劃分[21],主要是依據(jù)含果柄的數(shù)目進行劃分。依據(jù)《中國藥典》中的青翹的描述“基部有小果柄或已脫落”,可見果柄在《中國藥典》并不是一個重要的指標。然而實際情況,在青翹的采收過程中往往采用折枝、直接擼的方式,這也就導致了目前流通中青翹藥材基本都含果柄(果柄殘留率在30%～80%之間)、枝葉等。因此,流通中青翹商品等級出現(xiàn)了重點以果柄有無進行劃分,而不是依據(jù)傳統(tǒng)果實類大小進行劃分。故本文也是依據(jù)現(xiàn)有的連翹商品流通情況進行了分級標準的制定,表現(xiàn)出了一定的局限性,未來應該在更多樣本的基礎上再結(jié)合果實大小、開殼率等指標進行更合理標準研究,這樣也符合有關(guān)連翹品質(zhì)的評價。

青翹選貨中連翹酯苷A和連翹苷的含量整體上要高于青翹統(tǒng)貨,一方面可能是由于選貨是精選出來,其果實大小及果柄等因素對有效成分含量起到一定作用;另一方面可能是由于青翹統(tǒng)貨來源廣泛所致,由于產(chǎn)地、采收時間、加工方式等均可影響連翹中的有效成分含量,而流通中青翹統(tǒng)貨是多樣的,其有效成分含量的結(jié)果因此也是多樣。這一結(jié)果不僅表明本文青翹等級的劃分具有一定合理性,同時也提示在青翹的采收、加工等過程中應當注重規(guī)范化和標準化,這樣才能生產(chǎn)出質(zhì)量相對穩(wěn)定的青翹藥材。

通過本文的研究,發(fā)現(xiàn)青翹和老翹中連翹酯苷A和連翹苷的含量差異非常大,特別是老翹中的連翹酯苷A和連翹苷的含量非常低甚至不達《中國藥典》要求,這一結(jié)果也與眾多文獻研究結(jié)果相一致[22-24]。這提示我們依據(jù)《中國藥典》連翹的規(guī)定,采用同一指標來評價青翹和老翹的質(zhì)量是不合理的。青翹和老翹在連翹酯苷A和連翹苷含量的限量指標上應分開設定,這樣不僅能更好地規(guī)范連翹的質(zhì)量標準和市場行為,也能為青翹和老翹不同用法提供依據(jù),還能對以青翹為主各類中成藥的質(zhì)量標準與控制起到區(qū)分和指導作用。