干擾素-γ和白細(xì)胞介素-22聯(lián)合檢測在原發(fā)性免疫性血小板減少性紫癜中的臨床意義

田勇 高鵬 韓梅 王雪野 肖中平 陳晶 弓長麗 封韜 李凌君 王雪梅 孔令環(huán) 王新梅 付堃

(1長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 1301172;2吉林省人民醫(yī)院)

原發(fā)性免疫性血小板減少性紫癜(ITP)是一種由多種機(jī)制共同參與的自身免疫介導(dǎo)的血小板減少綜合征，其發(fā)病機(jī)制尚未清楚，是臨床上最為常見的自身免疫出血性疾病。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為 ITP是由于體液免疫機(jī)制發(fā)生異常，而出現(xiàn)血小板表面特異性抗體，從而使血小板在降解過程中暴露隱匿性表位，隱匿性表位的 T細(xì)胞被抗原提呈細(xì)胞所識(shí)別產(chǎn)生了血小板抗體，引起 ITP患者血小板破壞〔1〕。研究發(fā)現(xiàn)〔2〕，有些患者體內(nèi)雖然存在血小板自身抗體，但疾病仍可以緩解，而有些患者體內(nèi)檢測不到血小板自身抗體，進(jìn)而表明 ITP的發(fā)病可能存在其他相關(guān)因素，細(xì)胞免疫在 ITP的發(fā)病中占主導(dǎo)地位。本文擬探討干擾素(IFN)-γ和白細(xì)胞介素(IL)-22在 ITP中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 吉林省人民醫(yī)院2017年12月至2019年6月診療的 ITP患者30例為觀察組，男11例，女19例，年齡54～74歲，中位年齡為(58.34±14.25)歲，其中達(dá)到完全反應(yīng)(CR)標(biāo)準(zhǔn)28例，有效(R)標(biāo)準(zhǔn)2例，均符合血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)〔3〕。該院體檢健康者20例為對(duì)照組，男11例，女9例，年齡55～72歲，中位年齡為(58.43±13.78)歲，兩組年齡、性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。均簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集 分別抽取對(duì)照組及觀察組治療前后的肘靜脈血4 ml，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，3 000 r/min離心20 min后，分離其血漿，分裝后保存在-20℃冰箱準(zhǔn)備測量。

1.3 檢測方法 分別檢測治療前后血漿中IFN-γ和IL-22水平，選用依科賽酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(批號(hào)：211099)，按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作，將標(biāo)本及試劑盒常溫放置達(dá)室溫，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，配置生物素化抗體的工作液及酶結(jié)合物工作液。進(jìn)行加樣、孵育、洗板，加入 IFN-γ和 IL-22抗體，洗板、避光孵育15 min顯色，加終止液終止反應(yīng)，上酶標(biāo)儀讀板，最后選用450 nm波長讀數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的均數(shù)間比較采用單因素方差分析；不符合正態(tài)分布的均數(shù)間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

觀察組治療前、后血漿中IFN-γ濃度、IL-22濃度明顯高于對(duì)照組(P<0.001、P<0.05)。觀察組治療前、后血漿中IFN-γ、IL-22濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見表1。

表1 兩組治療前后血漿IFN-γ和IL-22水平比較

3 討 論

ITP是由于血小板過多破壞而發(fā)生的自身免疫性出血性疾病〔4〕。臨床上關(guān)于ITP的診斷缺乏特異性標(biāo)志，并且 ITP發(fā)病機(jī)制至今尚未清楚，最近研究表明，ITP發(fā)病可能與細(xì)胞免疫相關(guān)，并且眾多細(xì)胞因子參與ITP發(fā)病〔5〕。IFN-γ屬于IL-1家族中的成員，是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種固有炎癥、免疫應(yīng)答的抑制劑〔6〕。研究〔7〕表明，保持Th1/Th2細(xì)胞的平衡在自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中是至關(guān)重要的因素。Th細(xì)胞的分化失衡是導(dǎo)致ITP患者免疫功能紊亂的主要因素。 根據(jù)Th分泌細(xì)胞因子的不同分為Th1和Th2。IFN-γ主要由Th1細(xì)胞分泌，IL-4主要由Th2細(xì)胞分泌。IFN-γ可以通過抑制Th2類細(xì)胞因子的產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)Th1類細(xì)胞因子的產(chǎn)生。本研究結(jié)果提示，ITP患者存在Th1細(xì)胞免疫功能的紊亂，表明IFN-γ可能參與ITP發(fā)病，這一結(jié)論與之前的結(jié)果基本相同〔8〕。 IL-22最早是用 IL-9刺激一株 T淋巴瘤細(xì)胞系所發(fā)現(xiàn)〔9〕，主要由Th1、Th17、Th22細(xì)胞分泌，且CD8+T細(xì)胞、自然殺傷(NK)22細(xì)胞及內(nèi)生淋巴細(xì)胞也可以分泌IL-22。 Wolk等〔10〕研究表明，克隆恩病患者血漿中 IL-22水平高于健康對(duì)照組，與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，從而表明了 IL-22可能參與克隆恩病的發(fā)病過程。相反，有學(xué)者證實(shí)，銀屑病患者血清中IL-22水平顯著低于正常人〔11〕。所以IL-22可能參與了自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，并且起著致病性或保護(hù)性的作用。本研究結(jié)果與以往的研究結(jié)果基本一致〔12～14〕。IL-22與IFN-γ在ITP的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著協(xié)同致病作用，兩種因子可能共同參與ITP發(fā)病。

綜上，ITP作為一種自身免疫性疾病，存在著多種細(xì)胞因子的異常，臨床上聯(lián)合檢測 ITP患者血漿中 IFN-γ和 IL-22細(xì)胞因子水平，對(duì)于判斷其病情的變化、治療效果及其預(yù)后都具有重要的臨床意義。