硫辛酸對老年2型糖尿病腎病患者足細(xì)胞標(biāo)志蛋白、明膠酶相關(guān)載脂蛋白、足細(xì)胞裂孔膜蛋白表達(dá)的影響

孟天宇 王顏剛

(1青島大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌與代謝病科，山東 青島 266000；2山東省成武縣人民醫(yī)院內(nèi)分泌科)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病患者常見的并發(fā)癥之一。對于老年2型糖尿病腎病(T2DN)，該病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，包括蛋白激酶激活、多元醇旁路功能增強(qiáng)、糖基化終末產(chǎn)物蓄積、腎小球血流動力學(xué)異常、血脂代謝紊亂、細(xì)胞因子產(chǎn)生增多等環(huán)節(jié)都與該病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)〔1～3〕。研究表明〔4～7〕，氧化應(yīng)激反應(yīng)與DN的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，可引起腎小球損傷，同時也是DN其他病理環(huán)節(jié)共同的上游改變。因此，選擇有效的藥物來改善氧化應(yīng)激反應(yīng)是治療DN理想的靶點。硫辛酸是一種抗氧化劑，具有較強(qiáng)的抗氧化作用。有報道〔8～10〕，硫辛酸可改善糖尿病腎病患者的臨床癥狀，但具體機(jī)制還有待研究。本文將進(jìn)一步研究硫辛酸對老年T2DN患者的作用及其可能的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年9月至2018年9月青島大學(xué)附屬醫(yī)院收治的96例老年T2DN患者臨床資料?；颊呔现腥A醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會微血管并發(fā)癥學(xué)組中DN防治專家共識(2014年版)診斷標(biāo)準(zhǔn)〔11〕。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除高血壓腎病、慢性腎小球腎炎、泌尿系感染等疾??；②合并其他重大疾病的患者，如癌癥、重度心律失常等;③合并精神疾病、心理疾病患者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為治療組與對照組，每組各48例。治療組，男26例，女22例；年齡61～85〔平均(70.23±10.32)〕歲。對照組男24例，女24例；年齡60～85〔平均(72.23±10.98)〕歲。兩組性別、年齡相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 治療方法 兩組給予降糖等常規(guī)治療，空腹血糖(FPG)控制在5.0～9.2 mmol/L、餐后2 h血糖(2 h PG)<10 mmol/L。治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用硫辛酸注射液治療，具體如下：亞寶藥業(yè)太原制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20055869，規(guī)格：6 ml∶0.15 g)，靜脈滴注，每天300～600 mg。用藥時間均為2 w。

1.3 觀察指標(biāo) 清晨，分別采集所有患者治療前和治療后4 ml空腹靜脈血，離心，取上層血清用于測定指標(biāo)。①測定血糖、血壓、血脂水平：FPG、2 h PG、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。②測定腎功能指標(biāo)水平：血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)，胱抑素(Cys)C、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)。③測定氧化應(yīng)激指標(biāo)水平：F2-異前列腺素類化合物(F2-aisoprostanes)，8-羥基脫氧鳥嘌呤核苷(8-OHdG)、硝基酪氨酸(NT)、丙二醛(MDA)。④測定血清和尿中足細(xì)胞標(biāo)志蛋白(PCX)、明膠酶相關(guān)載脂蛋白(NGAL)、足細(xì)胞裂孔膜蛋白(Nephrin)。上述所有指標(biāo)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 進(jìn)行測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，依據(jù)試劑盒說明書方法進(jìn)行測定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血糖、血脂、血壓比較 治療前，兩組FPG、2 h PG、SBP、DBP相比，無明顯差別(P>0.05)；治療后，兩組患者FPG、2 h PG、SBP、DBP水平均比治療前降低，且治療組FPG、2 h PG、SBP、DBP水平降低幅度比對照組大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩組治療前后TC、TG水平無明顯變化(P>0.05)。見表1。

2.2 兩組腎功能指標(biāo)比較 治療前，兩組Scr、BUN、CysC、RBP相比無明顯差別(P>0.05)；治療后，兩組Scr、BUN、CysC、RBP水平均比治療前顯著降低，且治療組Scr、BUN、CysC、RBP水平降低幅度比對照組大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3 兩組氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較 治療前，兩組F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平相比，無明顯差別(P>0.05)；治療后，兩組F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平均比治療前顯著降低，且治療組F2-aisoprostanes 、8-OHdG、NT、MDA水平降低幅度顯著大于對照組(P<0.05)。見表2。

表1 兩組血糖、血脂、血壓比較

與對照組比較:1)P<0.05；與本組治療前比較:2)P<0.05，下表同

表2 兩組腎功能、氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

2.4 兩組足細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)的血清PCX、Nephrin、NGAL水平比較 治療前，兩組血清PCX、Nephrin、NGAL水平相比，無明顯差別(P>0.05)；治療后，兩組PCX、Nephrin水平均比治療前升高，且治療組PCX、Nephrin水平升高幅度比對照組大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療后，兩組患者NGAL水平均比治療前降低，且治療組NGAL水平降低幅度顯著比對照組大(P<0.05)，見表3。

表3 兩組血清PCX、NGAL、Nephrin水平比較

3 討 論

氧化應(yīng)激反應(yīng)與DN的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，選擇有效的藥物來改善氧化應(yīng)激反應(yīng)是治療DN理想的靶點。硫辛酸是一種強(qiáng)效抗氧化劑，具有水溶性和脂溶性，硫辛酸口服后可經(jīng)胃腸道吸收進(jìn)入體液循環(huán)，到達(dá)多種細(xì)胞和組織部位，從而發(fā)揮作用〔12，13〕。

RBP和CysC是經(jīng)由腎小球代謝的兩種小分子蛋白，當(dāng)DN患者的腎功能發(fā)生損傷時，RBP和CysC經(jīng)腎排泄發(fā)生障礙，故血清中RBP和CysC含量上升〔13～15〕。而Scr、BUN是反映腎功能的兩個重要指標(biāo)〔16～18〕。本研究發(fā)現(xiàn)，硫辛酸有助于改善老年T2DN患者的腎功能。

F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA是氧自由基攻擊生物膜、細(xì)胞器等生成的產(chǎn)物，故氧化應(yīng)激反應(yīng)的程度可由F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA含量水平來反映〔19～21〕。本研究結(jié)果說明硫辛酸有助于緩解糖尿病腎病患者的氧化應(yīng)激反應(yīng)。

足細(xì)胞是一種高分化細(xì)胞，位于腎小球基底膜外側(cè)，由足突、主突、細(xì)胞體三部分構(gòu)成，是腎小球濾過屏障的最后一環(huán)〔22〕。足細(xì)胞的足突結(jié)構(gòu)參與腎小球濾過這一環(huán)節(jié)。足突結(jié)構(gòu)由腎小球基底膜、裂孔隔膜、頂膜區(qū)相連構(gòu)成。研究表明，足突間PCX、Nephrin等多種蛋白質(zhì)之間相互連接，共同構(gòu)成裂孔隔膜蛋白復(fù)合體，從而維持足細(xì)胞骨架重塑、正常的形態(tài)及功能，對于保證腎小球濾過屏障功能的完整性具有非常重要的意義〔23，24〕。當(dāng)氧自由基損傷足細(xì)胞時，足細(xì)胞的足突結(jié)構(gòu)中PCX、Nephrin等多種蛋白質(zhì)被破壞，破壞腎小球濾過膜完整性，腎功能障礙加重〔25〕。NGAL是一種分泌性蛋白。當(dāng)發(fā)生腎損傷時，腎小管上皮細(xì)胞受到損傷性刺激，導(dǎo)致大量分泌NGAL，體內(nèi)NGAL含量急劇升高，NGAL可可減輕足細(xì)胞損傷，同時引起腎小管間質(zhì)中浸潤的中性粒細(xì)胞發(fā)生凋亡〔26〕。本研究結(jié)果提示，硫辛酸治療有助于增加足突結(jié)構(gòu)中連接蛋白的含量，保護(hù)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)，改善腎小球的屏障功能。