GC測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量

程雅婷，王曉云，王學(xué)濤，王艷博，龐靜，劉凱娜，鄭斕

1.秦皇島市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 秦皇島 066004；2.正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310000

香砂養(yǎng)胃丸為納入我國(guó)基本醫(yī)療保險(xiǎn)目錄的甲類非處方藥，由木香、砂仁、白術(shù)、陳皮、茯苓、半夏(制)、醋香附、枳實(shí)(炒)、豆蔻(去殼)、姜厚樸、廣藿香、甘草、生姜、大棗十四味藥組成，具有溫中和胃的功效[1]。香砂養(yǎng)胃丸中砂仁醒脾開胃，與白術(shù)、木香共為君藥，起主要治療作用。砂仁為姜科植物陽春砂、綠殼砂或海南砂的干燥成熟果實(shí)[1]，主要活性成分為乙酸龍腦酯、樟腦、龍腦等揮發(fā)油，具有抗?jié)?、抗炎、?zhèn)痛、抗菌、止瀉等藥理作用[2-6]。豆蔻揮發(fā)油亦含少量乙酸龍腦酯[6-7]。香砂養(yǎng)胃丸的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部，其中并未收載砂仁的含量測(cè)定方法，現(xiàn)有的針對(duì)香砂養(yǎng)胃丸的研究也多為白術(shù)、厚樸、香附的質(zhì)量控制[8-10]。筆者采用氣相色譜[11](GC)測(cè)定香砂養(yǎng)胃丸中乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量[12]，對(duì)控制藥品的有效性有重要意義。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 7890A氣相色譜儀；METTLER TOLEDO AG-135電子天平。

1.2 試藥

乙酸龍腦酯對(duì)照品(批號(hào)：110759-201105，含量：99.6%)、龍腦對(duì)照品(批號(hào)：110881-201508，含量：96.8%)、樟腦對(duì)照品(批號(hào)：110747-201409，含量：98.7%)均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；無水乙醇、環(huán)己烷均為分析純(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司)。

香砂養(yǎng)胃丸15批，保定中藥制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為161206(S1)、161005(S2)；北京御生堂集團(tuán)石家莊制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為16014003(S3)、16114008(S4)；河南明善堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為161212(S5)；山西旺龍藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20151204(S6)；石藥集團(tuán)河北永豐藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為10516080514(S7)、10516110114(S8)、10517010214(S9)；藥都制藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為161201(S10)、170401(S11)；湖北瑞華制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為161220(S12)、170521(S13)；河北萬歲藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為161002(S14)；河南金鴻堂制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20160401(S15)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent 7890A氣相色譜儀，Agilent Technologies Inc.DB-1(30 m×0.320 mm，0.50 μm)色譜柱，進(jìn)樣口溫度：230 ℃；載氣為氮?dú)猓魉贋?.0 mL·min-1，氮?dú)?氫氣-空氣(1∶1∶10)，進(jìn)樣量為1 μL，進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比10∶1，氫火焰離子檢測(cè)器(FID)，檢測(cè)器溫度為280 ℃。柱溫采用程序升溫，條件見表1。

表1 程序升溫條件

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取樟腦對(duì)照品11.38 mg、龍腦對(duì)照品10.82 mg、乙酸龍腦酯對(duì)照品17.19 mg，加無水乙醇制成質(zhì)量濃度分別為45.06、21.49、34.24 μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約8 g，精密稱定，照揮發(fā)油測(cè)定法(《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版四部通則2204)提取，加環(huán)己烷3 mL，緩緩加熱至沸，并保持微沸約1 h，放置30 min后，取環(huán)己烷提取液轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，再取1 mL環(huán)己烷沖洗揮發(fā)油測(cè)定器，合并沖洗液至上述5 mL容量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性考察

分別配制乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦系列濃度對(duì)照品溶液，以對(duì)照品進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：乙酸龍腦酯Y=0.856 0X+1.494 3，r=0.999 8，進(jìn)樣量在0.807 3～322.903 2 ng與峰面積呈良好的線性關(guān)系；龍腦Y=0.959 9X+1.381 1，r=0.999 8，進(jìn)樣量在0.647 6～259.036 8 ng與峰面積呈良好的線性關(guān)系；樟腦Y=0.977 8X+2.055 7，r=0.999 8，進(jìn)樣量在1.014 1～405.657 0 ng與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別吸取同一供試品溶液(S2)，分別在0、4、12、24 h進(jìn)樣，記錄峰面積，不同時(shí)間供試品溶液乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦峰面積RSD分別為1.29%、1.42%、1.45%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品(S2)，按擬定含量測(cè)定方法制備6份供試品溶液，測(cè)定3種成分含量，供試品溶液乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦含量測(cè)定結(jié)果RSD分別為3.16%、2.39%、2.15%。本方法有較好重復(fù)性。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液1 μL，按擬定色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄3種成分峰面積積分值。結(jié)果乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦峰面積RSD分別為0.69%、0.32%、0.63%。表明本方法有較好精密度。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品(S2，乙酸龍腦酯0.017 mg·g-1、龍腦0.011 mg·g-1、樟腦0.039 mg·g-1)6份，每份約4 g，置具塞錐形瓶中，分別精密加入一定濃度的混合對(duì)照品溶液，按上述供試品溶液的制備方法制備回收率試驗(yàn)用供試品溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，本方法回收較好。回收率試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 香砂養(yǎng)胃丸中3種成分的加樣回收率結(jié)果(n=6)

2.9 專屬性試驗(yàn)

按工藝要求制備砂仁及豆蔻陰性對(duì)照樣品，并依次精密吸取對(duì)照品溶液、樣品溶液及陰性樣品溶液各1 μL，按2.1色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明，香砂養(yǎng)胃丸中其他成分不影響乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的檢出，本方法專屬性強(qiáng)。見圖1。

注：A.對(duì)照品；B.樣品；C.陰性；1.樟腦；2.龍腦；3.乙酸龍腦酯。圖1 對(duì)照品、樣品、陰性樣品氣相色譜圖

2.10 檢驗(yàn)結(jié)果

取全部15批香砂養(yǎng)胃丸，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按2.1色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 提取時(shí)間考察

分別考察了提取供試品0.5、1、1.5 h的含量測(cè)定結(jié)果，確定提取時(shí)間為1 h。

3.2 色譜條件優(yōu)化

試驗(yàn)中分別考察了不同流速、不同程序升溫條件對(duì)分離結(jié)果的影響，同時(shí)考察了不同進(jìn)樣口、檢測(cè)器溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，表明在2.1項(xiàng)下的氣相色譜條件效果最佳。

3.3 測(cè)定結(jié)果討論

本方法測(cè)定的3種成分是香砂養(yǎng)胃丸中君藥砂仁的主要成分，測(cè)定結(jié)果能直觀反映君藥砂仁的質(zhì)量及香砂養(yǎng)胃丸的有效性。經(jīng)測(cè)定，15批香砂養(yǎng)胃丸樣品中，乙酸龍腦酯的含量均較低，且僅有2批乙酸龍腦酯的含量高于樟腦。根據(jù)文獻(xiàn)記載，《中華人民共和國(guó)藥典》收載的砂仁——陽春砂、綠殼砂及海南砂中，乙酸龍腦酯的含量遠(yuǎn)高于樟腦，而《中華人民共和國(guó)藥典》未收錄的紅砂仁中，樟腦含量高于乙酸龍腦酯[6，13-14]。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)砂仁質(zhì)量問題嚴(yán)峻，以近緣品種冒充砂仁的情況較為突出[15-17]，相關(guān)廠家投料的砂仁品種是否為正品有待進(jìn)一步考察。本方法的建立對(duì)考察香砂養(yǎng)胃丸的質(zhì)量，確保藥品的有效性有重大意義。

表3 乙酸龍腦酯、龍腦及樟腦的含量測(cè)定結(jié)果 mg·g-1