冠心病并發(fā)幽門螺桿菌感染患者血清HP抗體譜特征與炎性因子水平相關(guān)性分析*

高建華，何穎輝

(杭州市西湖區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，杭州 310000)

隨著國內(nèi)經(jīng)濟的高速發(fā)展和人們生活物質(zhì)水平的不斷提高，冠心病(coronary heart disease，CHD)在我國的年發(fā)病率呈逐年上升的態(tài)勢[1-2]，已引起了國內(nèi)老年病學(xué)、心血管病學(xué)專家的廣泛關(guān)注。近年來，有報道顯示幽門螺桿菌(helicobacterpylori，HP)感染與冠心病的發(fā)生、發(fā)展存在著密切聯(lián)系，但有關(guān)機制尚不完全清楚，可能與HP感染引起的炎癥、免疫反應(yīng)、吸收功能障礙等因素相關(guān)[3-5]。另外，HP感染與胃腸道疾病發(fā)生密切相關(guān)[6-7]。有文獻報道HP的細胞毒素相關(guān)蛋白(CagA)是引起CHD的重要致病因子之一，其在CHD的發(fā)病中起到重要作用[8-9]。目前，在CHD并發(fā)HP感染者中，有關(guān)血清HP抗體譜和炎性因子特征的報道較少。因此本文旨在探討CHD并發(fā)HP感染者HP陽性率、炎性因子、血清HP抗體譜以及血清型分布特征，間接說明其與CHD發(fā)生的相關(guān)性。詳細的研究如下。

1材料與方法

1.1 研究對象 收集2016年12月～2017年12月，西湖區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的疑似CHD病人，采用選擇性冠狀動脈造影，選擇左主干、左前降支、左回旋支及右冠狀動脈中至少有一支狹窄程度≥50%者診斷為CHD[10]，共收集296例CHD患者(疾病組)血清樣本，其中男性158例，女性138例，平均年齡66.5±12.4歲。另收集同期體檢者228例非冠心病血清，其中男性128例，女性100例，平均年齡65.7±12.6歲。所有研究對象近期均未出現(xiàn)消化系統(tǒng)疾病、肝腎功能不全及抗HP治療等。

1.2 試劑和儀器 血清幽門螺桿菌抗體檢測試劑盒(杭州艾康生物有限公司)，幽門螺桿菌免疫印跡試驗(WB)試劑盒(深圳市伯勞特生物制品有限公司)，血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和同型半胱氨酸(Hcy)(北京利德曼生化股份有限公司)，于雅培C16000全自動生化分析儀上檢測。采用西門子公司生產(chǎn)的IMMULITE 1000全自動化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑測定血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)。

1.3 方法

1.3.1 標本收集：患者清晨空腹采樣，常規(guī)無菌采集靜脈血，分離血清3 ml，-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血清HP抗體及炎性因子檢測：采集與分離受檢者血清標本，嚴格按照試劑盒說明書操作和判斷結(jié)果。血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)，全部操作嚴格按照儀器操作規(guī)程和試劑說明書執(zhí)行。

1.3.3 血清抗體譜檢測(WB)和血清分型：若研究對象血清HP抗體檢測結(jié)果為陽性，則進行HP血清抗體譜(WB)分析，嚴格按照試劑盒說明書進行操作；區(qū)帶結(jié)果有：當(dāng)尿素酶亞單位(UreA-66KD，UreB-30KD)、空泡毒素(VacA-95KD，VacA-91KD)和細胞毒素相關(guān)蛋白(CagA-116KD)，并進行分型結(jié)果判斷：依據(jù)說明書進行分型，若CagA，VacA區(qū)帶抗體中有任一個區(qū)帶抗體陽性，結(jié)果判為血清型I型；三者都陰性而UreA，UreB陽性則為II型。

2結(jié)果

2.1 疾病組與對照組間HP抗體陽性率及炎性因子比較 見表1。

表1 兩組hs-CRP，IL-6，TNF-α和Hcy含量比較

對疾病組和對照組進行HP抗體和炎性因子檢測可知，在兩組人群中疾病組的HP抗體陽性率(52.03%，154/296)高于對照組(35.09%，80/228)，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.95，P<0.05)。疾病組各炎性因子(hs-CRP，IL-6，TNF-α和Hcy)含量均高于對照組，兩組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-33.34～19.96，均P<0.05)。

2.2 疾病組與對照組間HP抗體譜、血清型特征分析 見表2。

表2 疾病組與對照組間血清抗體譜與血清型差異性比較[n(%)]

經(jīng)比較對照組與疾病組并發(fā)HP感染的抗體譜分析：VacA-95KD，VacA-91KD，UreA-66KD和UreB-30KD抗體，在兩組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.22～3.49，均P>0.05)，而疾病組并發(fā)HP感染患者血清CagA-116KD抗體陽性率(76.62%，118/154)高于對照組中HP感染者(62.5%， 50/80)，且兩組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.19，P<0.05)，疾病組中并發(fā)HP感染者血清I型陽性率(76.62%，118/154)高于對照組并發(fā)HP感染者(62.5%，50/80)，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.19，P<0.05)。

2.3 疾病組中不同HP感染血清型及非HP感染患者的炎性因子水平調(diào)查 見表3。疾病組按照HP感染血清型間及與非感染患者血清因子間比較，I型血清型hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy的含量高于II型血清型，且II型血清型hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy的含量高于非HP感染患者，各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。

表3 疾病組中不同HP感染血清型及非HP感染患者的炎性因子含量情況

3討論在我國，隨著經(jīng)濟穩(wěn)步發(fā)展和人們物質(zhì)生活水平的提高，CHD的發(fā)病率也在逐年增加，而且發(fā)病年齡明顯年輕化，青壯年的發(fā)病率逐年增加[1-2]，這引起了我國衛(wèi)生領(lǐng)域?qū)＜?、學(xué)者的廣泛關(guān)注。最早于1994年由MENDALLN等[11]首次報道了HP感染可能與CHD發(fā)生、發(fā)展存在關(guān)聯(lián)性，由此越來越多的國內(nèi)外學(xué)者對HP感染在CHD發(fā)生、發(fā)展中的作用展開了相關(guān)研究。慢性HP感染是否為CHD獨立危險因素，目前尚無明確結(jié)論，并且其致病機制仍存在爭議[12]。HP為全球范圍內(nèi)流行的病原菌，HP具有感染性強的特點，有調(diào)查顯示在我國正常體檢人群HP的流行率在40%～46%，并且隨著年齡的增長，HP感染率也隨之升高[13]。

截至目前醫(yī)學(xué)界有關(guān)HP感染與CHD發(fā)生、發(fā)展的可能性機制推測有[12，14-15]：①炎性反應(yīng)：HP感染可激活炎癥細胞分泌TNF-α，IL-6在內(nèi)的細胞因子，引起局部炎癥、內(nèi)皮細胞損傷或功能障礙，導(dǎo)致平滑肌細胞增殖。②HP感染可引起脂代謝紊亂，促進動脈粥樣斑塊形成。③營養(yǎng)吸收障礙：HP感染可引起胃腸功能異常，致使維生素B12，B6和葉酸吸收不良，進而引起維生素B12，B6和葉酸缺乏，導(dǎo)致Hcy水平升高，加劇CHD的發(fā)生。④免疫反應(yīng)：CagA抗體與內(nèi)皮細胞表面抗原、平滑肌細胞發(fā)生交叉反應(yīng)，促使動脈粥樣硬化的發(fā)生。以上機制看似相互獨立，但彼此之間卻存在著內(nèi)在的密切聯(lián)系，本研究就其部分機制間的關(guān)聯(lián)性進行了研究。

本文研究顯示在CHD患者中HP感染的陽性率要高于非CHD組(見表1)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與國內(nèi)外文獻報道一致，間接提示HP感染與CHD的發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)性。另外本文比較了CHD組與非CHD組炎性因子(hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy)的含量，發(fā)現(xiàn)CHD組炎性因子hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy的含量要高于對照組，同樣證實了文獻報道的hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy這些因子與CHD的發(fā)生、發(fā)展存在著直接聯(lián)系。然而，各炎性因子與HP感染及不同血清型別間是否存在聯(lián)系？我們對疾病組與對照組間并發(fā)HP感染的血清型別和抗體譜進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)(見表2)，疾病組中并發(fā)HP感染的患者血清型以I型為主(CagA抗體為主要分型依據(jù))，且陽性率高于對照組，兩組間的差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明了HP感染CagA抗體陽性或血清型I型較HP感染CagA抗體陰性或血清型II型，對CHD的發(fā)生、發(fā)展起到了關(guān)鍵作用。另外我們將疾病組依據(jù)HP感染的血清型別及是否HP感染進行再分組(血清型I，血清型II，非HP感染) (見表3)，發(fā)現(xiàn)這三個亞組中，I型血清型hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy 的含量高于II型血清型，II型血清型hs-CRP，TNF-α，IL-6和Hcy的含量高于非HP感染CHD患者，各組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，進一步說明了HP感染引起CHD發(fā)生的各機制間相互交織在一起，HP感染血清型I型(CagA抗體陽性)較血清型II型可能會更大程度的引起血管發(fā)生免疫反應(yīng)，同時嚴重的免疫反應(yīng)又加劇了炎性反應(yīng)的發(fā)生，但詳細的發(fā)生過程有待于進一步的研究證實。

綜上所述，HP感染作為CHD發(fā)生的一個重要因素，其機制尚不完全清楚，本文研究積累了CHD并發(fā)HP感染的流行病學(xué)資料以及血清特征性抗體譜資料，發(fā)現(xiàn)了CHD并發(fā)HP感染患者中各致病機制間存在著內(nèi)在的關(guān)聯(lián)性，為進一步研究CHD的發(fā)生、發(fā)展以及治療奠定了科學(xué)依據(jù)。