GC法檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留量

1.云南省紅河州食品藥品檢驗所，云南 蒙自 661199； 2.云南省紅河州第一人民醫(yī)院， 云南 蒙自 661199

中藥作為傳統(tǒng)藥物，在中國有著上千年的使用歷史。隨著中藥產(chǎn)品的影響力越來越大，中藥材更是受到國際高度關注。近年來受到國際貿(mào)易中綠色、技術等貿(mào)易壁壘的影響，中藥產(chǎn)品的出口貿(mào)易現(xiàn)狀不容樂觀。其中，農(nóng)藥殘留是影響中藥材質(zhì)量安全的主要因素，同時也是嚴重制約我國中藥產(chǎn)品走向國際市場的重要原因，直接影響了中藥在國際市場上的競爭力[1]。

黃芪具有補氣升陽，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌的功效。不管是用于治病還是用于保健，都越來越受到廣大人民的喜愛，保證其質(zhì)量安全，至關重要。我國中藥走向國際市場，受到農(nóng)藥殘留問題嚴重阻礙作用，規(guī)范中藥材種植和管理關鍵措施，建立有效的農(nóng)藥殘留量測定方法，以此來規(guī)范中藥種植源頭的農(nóng)藥殘留。目前,用于測定食品和中藥材中有機氯農(nóng)藥的方法主要為氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[2-3]。研究采用氣相色譜法分析檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留, 通過方法學考察, 本方法在實際檢測中穩(wěn)定、可靠、簡單、快速。

1 儀器與材料

1.1 儀器 7890A氣相色譜儀(美國Agilent公司)；KQ-300DE數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SC-3610低速離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司)；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海安亭電子儀器廠)；N-EVAP-112氮吹儀(美國Organomation公司)。

1.2 材料 黃芪飲片選自醫(yī)院。滴滴涕(op-DDT，PP′-DDT，PP′-DDE，PP′-DDD)及六六六(γ-BHC，δ-BHC，α-BHC，β-BHC)(混合對照品溶液批號：SB05-068-2018)，濃度：100μg/ml；五氯硝基苯(PCNB)(批號：GB05-1845-2018)等對照品都來自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所研制。剩下試劑均是色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 進樣口：250 ℃；檢測器ECD溫度：300 ℃；程序升溫：初始溫度60 ℃，保持0.5 min，以每分鐘60 ℃升到170 ℃，再每分鐘以10 ℃升到220 ℃，保持5 min，再每分鐘以1 ℃升到240 ℃，再每分鐘以15 ℃升到280 ℃；載氣流速是1.5 mL/min，高純氮氣(>99.999%)，恒壓模式，尾吹流量是58.5 mL/min，進樣量是1 μL，不分流。

2.2 制備混合對照品溶液 取上述混合對照品溶液和五氯硝基苯，用石油醚稀釋制成分別為10.0 μg·mL-1的溶液，作為混合對照品儲備液。取適量混合對照品儲備液，用石油醚分別稀釋成0.0、0.2、0.4、0.6、、0.8、1.0 μg/mL的系列混合對照品溶液，用于線性回歸方程。

2.3 制備供試品溶液 取適量黃芪飲片，用中藥粉碎機粉碎，過三號篩，置于100 mL燒杯中，稱取約2.0 g，加水浸泡過夜，加6 g氯化鈉，40 mL丙酮，稱重后超聲處理30 min，之后將30 mL二氯甲烷加入其中，超聲處理15 min，加入適量無水硫酸鈉，過濾，將有機相置于100 mL燒杯中，靜置4 h，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，低溫旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，用5 mL石油醚溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，緩緩加入1 mL硫酸，渦旋離心10 min[4]。取上清液，用0.22 μm的微孔濾膜進行過濾，取濾液，即得；同時制備空白溶液，按2.1色譜條件進樣。

2.4 專屬性試驗 分別吸取上述2.2項下的混合對照溶液、2.3項下的供試品溶液及空白溶液，按2.1色譜條件進行檢測分析，經(jīng)分析后顯示，供試品溶液色譜圖與混合對照溶液色譜圖在相對應位置存在部分相同保留時間的色譜峰，及部分六六六類和五氯硝基苯(PCNB)有殘留，滴滴涕(op-DDT，PP′-DDT，PP′-DDE，PP′-DDD)未檢出，此外可以看出，空白溶液色譜圖無干擾峰。其各成分的出峰順序如圖1所示。

1.α-BHC；2.五氯硝基苯；3.γ-BHC；4.β-BHC；5.δ-BHC；6.PP′-DDE；7.op′-DDT；8.PP′-DDD；9.PP′-DDT圖1 樣品色譜圖

2.5 線性范圍 精密吸取1 μL系列混合對照品溶液，進入氣相色譜儀，每一濃度均進行5次平行測定，以平均峰面積為縱坐標，以濃度為橫坐標，計算出線性回歸方程及相關系數(shù)。見表1，其表明混合對照品溶液線性關系良好。

表1 有機氯農(nóng)藥標準品有關系數(shù)及回歸方程

2.6 精密度試驗 取同一批次供試品(批號：180523)，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果六六六類和五氯硝基苯峰面積的RSD為0.2%～1.0%，表明儀器精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗 取同一批次供試品(批號：181016)，按2.3項下的方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 h時按2.1色譜條件連續(xù)進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果六六六類和五氯硝基苯峰面積的RSD為0.8%～1.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取同一批次供試品(批號：181110)，按2.3項下的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按2.1色譜條件進樣測定，結(jié)果六六六類和五氯硝基苯平均含量為0.01～0.05 mg/kg,其RSD為0.5%～1.2%，表明重復性良好。

2.9 回收率試驗 精密稱取9份供試品(批號：181110)，加入三種混合對照品溶液(濃度分別為0.2、0.4、0.8 μg/mL)，每一濃度加三份，各5 mL；按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件平行進樣各5次測定。計算回收率。結(jié)果表明回收率為94.5%～104.4%，其RSD(n=6)為0.8%～1.5%。

2.10 供試品含量測定 取5個批次的黃芪飲片，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件進樣測定，計算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品中有機氯農(nóng)藥的含量

3 討論

3.1 檢出限的確定 根據(jù)測定有機氯農(nóng)藥時的稱樣量、定容體積、標準物質(zhì)的響應值、ECD的靈敏度、空白試樣的噪聲水平等因素來確定每個農(nóng)藥成分的檢出限[5]。本方法采用的試劑為色譜純，減少雜質(zhì)的干擾，提高靈敏度；采用低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，防止有效成分被破壞或損失。配制一系列的低濃度樣品與空白樣品進行信號比較，以信噪比為3:1的量計算出能被可靠地檢測出的被測物最低濃度來確定其檢出限。

3.2 色譜分離條件的優(yōu)化 有文章報道，流速為恒流模式 (1 mL/min)；程序升溫: 初始溫度70 ℃, 保持 1.0 min, 以80 ℃/min升溫至 170 ℃, 以3 ℃/min升溫至190 ℃, 以0.7 ℃/min 升溫至 210 ℃, 以 5 ℃/min升溫至220 ℃并保持10 min[6]。此色譜條件用于美國安捷倫公司30 m×0.32 mm，0.25 μm的 HP-5色譜柱上，效果很差，部分色譜峰難以分離，分離度小于1.5。本實驗對9種有機氯類農(nóng)藥色譜條件進一步優(yōu)化，選取三個主要因素(程序升溫、色譜柱、流速)，進行色譜優(yōu)化試驗，經(jīng)過多種的程序升溫、流速的變化和多個型號的色譜柱(Cpsil8CB、DB-1、DB-50、DB-1701、HP-5)進行分離，綜合色譜圖分離效果，選擇最終色譜條件。本方法建立的色譜條件優(yōu)點在于：第一，采用恒壓模式，峰形平穩(wěn)；第二，出峰相對多的地方升溫速率慢，可以很好的分離各色譜峰，出峰相對少的地方，采用快速升溫，確?？傮w的保留時間較短，同時也能很好的分離色譜峰；第三，末尾采用高溫280 ℃，可以較好地分離出樣品中殘留的其他雜質(zhì)；本方法可以用于20多種農(nóng)藥殘留的分析，且分離效果很好。

3.3 結(jié)果分析 在采集5組樣品中，經(jīng)測定的結(jié)果顯示，均符合《中國藥典》對黃芪藥材規(guī)定(≤0.2 mg/kg)，以及《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》對飲片、提取物及制劑、植物原料的規(guī)定(≤0.1 mg/kg)，有機氯農(nóng)藥殘留量均很低。同時在黃芪飲片中，六六六存在3種異構(gòu)體和五氯硝基苯有殘留，而相較于最低檢出限，其它含量均較低并未被檢出。然而針對于有機氯農(nóng)藥殘留量來說，不同批號的黃芪藥材存在的差異較大，可能和黃芪的種植過程有關，才造成此種現(xiàn)象的出現(xiàn)，另外也可能和氣候等環(huán)境因素有關，造成農(nóng)藥殘留的積集及轉(zhuǎn)化機制均需進一步研究，并積極的提供一定安全理論依據(jù)用于控制農(nóng)藥殘留，保證其質(zhì)量極其關鍵。

綜上，實驗建立黃芪飲片中9種有機氯類農(nóng)藥殘留的毛細管氣相色譜測定法，該方法分析時間短,各農(nóng)藥成分分離度良好(R>1.5)，從方法的精密度和回收率來看，均能滿足實際分析的需要，并制定了快速，簡便的樣品前處理方法，這對其它中藥材有機氯類農(nóng)藥殘留測定的研究具有一定的參考價值。從樣品的測定結(jié)果看，黃芪藥材中仍有少量的農(nóng)藥殘留，雖然我國早已禁止生產(chǎn)和使用該類農(nóng)藥20多年，這可能與該類農(nóng)藥在環(huán)境中穩(wěn)定性好、半衰期長，不易分解等有關[7]。有機氯農(nóng)藥會造成慢性中毒，殘效期長，易積蓄，使用歷史長，用量大，對人體危害極大。此次研究檢測結(jié)果均符合要求，且有機氯農(nóng)藥的殘留在大多數(shù)黃芪飲片中均處于國家標準范圍中。