新型免疫佐劑CpG-DNA的性能和初步應(yīng)用分析

孫英慧

（北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 遼寧 沈陽 110016）

相關(guān)研究表明，DNA是一種較強的免疫反應(yīng)刺激物，不僅激活免疫細胞使其進行增殖分化，亦可以對免疫應(yīng)答進行調(diào)節(jié)[1]。隨著研究的進一步深入，現(xiàn)已證實CpG-DNA既能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞免疫，又能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫，其免疫應(yīng)答主要以Th1為主，亦有學(xué)者稱其為新型免疫佐劑[2]。近年來，CpG-DNA引起了廣泛關(guān)注，已有研究證明其具有甲基化CpG基序。本研究旨在探究新型免疫佐劑CpG-DNA對HBsAg的免疫作用。

1.資料與方法

1.1 一般資料

取BALB/c小鼠（SPF）30只為研究對象，其周齡為8～10，皆為雌性。按照隨機數(shù)字表法，分為兩組，分別為HBsAg組、HBsAg+CpG-DNA組，每組各15只。

1.2 方法

HBsAg+CpG-DNA組：CpG-DNA劑量取80μg，抗原取1μg，充分混合后，對小鼠進行皮下、背部注射，每只注射量皆為80μg。HBsAg組：只給予HBsAg，方法同HBsAg+CpG-DNA組。自第一次注射后，第4周及第12周時再次加強免疫。加強免疫后一周內(nèi)處死小鼠，取其脾臟，采用ELISPOT試劑盒測定細胞毒T淋巴細胞的功能。

1.3 觀察指標

對比各組細胞的細胞毒T淋巴細胞功能。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進行分析，其中計數(shù)資料（%）進行χ2檢驗，計量資料（）進行t檢驗，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結(jié)果

在第4周與第12周進行強化免疫后，HBsAg+CpG-DNA組分泌的CD8+CTL的數(shù)量較HBsAg組顯著升高（P＜0.05），見表。

表 兩組細胞免疫檢測結(jié)果比較

3.討論

以往研究認為，DNA的免疫原性較弱，難以引起機體較強的免疫反映[3]。人們對DNA免疫調(diào)節(jié)的重視追溯到20世紀80年代，科學(xué)家首次檢測出從牛分枝桿菌中提取出具有抗腫瘤活性的DNA。而隨著研究的進一步深入，有學(xué)者對編碼牛分枝桿菌蛋白的cDNA中進行了不同序列ODN的合成，經(jīng)檢測，部分ODN具有較強的免疫原性，可誘發(fā)機體強烈的免疫反映[4]。而這類ODN來說都具有一個或多個回文序列的特性。除此之外，另有科學(xué)家對ODN結(jié)構(gòu)進一步測定，結(jié)果顯示具有免疫刺激作用的CpG ODN通常為非甲基化，一旦經(jīng)甲基化修飾，或者GC或其它序列代替了CpG ODN則其免疫活性消失。基于此，有學(xué)者認為DNA具有免疫活性的前提為具有甲基化CG雙核苷為核心的特定核苷酸序列。而免疫系統(tǒng)對外源性DNA進行免疫應(yīng)答就是通過對這些特定序列進行特異性識別而實現(xiàn)的。無與此同時，亦有相關(guān)研究報道，CpG序列是否含有低甲基化或者非甲基化是決定CpG-DNA是否有免疫活性的主要問題。若CpG未發(fā)生甲基化或者呈低甲基化，則其免疫活性較佳；反之，若CpG缺失或呈高甲基化，則其活性明顯降低。經(jīng)進一步測定，現(xiàn)認為CpG-DNA的活性結(jié)構(gòu)為CpG兩側(cè)的2個5’嘌呤和2個3’嘧啶，且當5’端為GpA、3’端為TpC或TpT時活性最強[5]。本研究取BALB/c小鼠（SPF）30只為研究對象，于免疫強化后一周進行細胞毒T細胞功能檢測結(jié)果顯示，對小鼠第4周與第12周進行強化免疫后，HBsAg+CpGDNA組分泌的CD8+CTL的數(shù)量顯著升高（P＜0.05），這與相關(guān)研究結(jié)果不謀而合，表明了CPG-DNA對HBsAg具有較好的免疫佐劑作用，不僅能夠與鋁劑相互協(xié)同促進IgG的產(chǎn)生與分泌，亦能夠促進Th2類免疫反應(yīng)逆轉(zhuǎn)為Th1類免疫反應(yīng)，這一轉(zhuǎn)變是通過IFN-γ的分泌完成的。

綜上所述，CPG-DNA對HBsAg具有較強的免疫原性，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生較強的免疫作用，其為一種潛能較大的免疫佐劑。