晚期結(jié)直腸癌患者TNF-α及FoxM1水平與臨床病理特征的關(guān)系分析

范曉慧　眭文妍　陳麗紅　趙文麗　鐘鳴　彭曉峰

【摘要】 目的：分析晚期結(jié)直腸癌患者腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及叉頭框M1基因（FoxM1）水平和臨床病理特征的關(guān)系。方法：回顧性分析60例資料完整、病理診斷明確的晚期結(jié)直腸癌患者的臨床資料，經(jīng)手術(shù)獲取癌灶組織與癌旁健康組織。使用免疫組化方式對(duì)癌灶組織與癌旁健康組織TNF-α及FoxM1陽性率進(jìn)行檢測。結(jié)果：結(jié)直腸癌灶組織中TNF-α及FoxM1陽性率均高于癌旁健康組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;晚期結(jié)直腸癌分化程度低、突破漿膜層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TNF-α及FoxM1陽性率高于分化程度高+中、未突破漿膜層、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在60例晚期結(jié)直腸癌灶組織中，TNF-α和FoxM1陽性表達(dá)率呈正相關(guān)（r=0.416，P<0.01）。結(jié)論：在晚期結(jié)直腸癌灶組織中，TNF-α及FoxM1表達(dá)水平高，兩者呈正相關(guān)。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程可能對(duì)兩者具有促進(jìn)作用，兩者聯(lián)合檢測可為結(jié)直腸癌病變性質(zhì)的判斷提供參考，為晚期結(jié)直腸癌的靶向治療提供理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)直腸癌; 叉頭框M1基因; 腫瘤壞死因子-α

【Abstract】 Objective：To analyze the relationship between tumor necrosis factor α（TNF-α）and fork frame M1（FoxM1）levels and clinical and pathological features in patients with advanced colorectal cancer.Method：The clinical data of 60 patients with advanced colorectal cancer with complete clinical data and definite pathological diagnosis were retrospectively analyzed.Cancer focus and adjacent healthy tissues were obtained by operation.The positive rates of TNF-α and FoxM1 in cancer tissue and adjacent healthy tissue were detected by immunohistochemistry.Result：The positive rates of TNF-α and FoxM1 in colorectal cancer tissues were higher than those in adjacent healthy tissues，there were statistical significance（P<0.05）.The positive rates of TNF-α and FoxM1 in advanced colorectal cancer tissues with low differentiation，serosa breakthrough and lymph node metastasis were higher than those in patients with high + middle differentiation，no serosa breakthrough and no lymph node metastasis，there were statistical significance（P<0.05）.The positive expression rates of TNF-α and FoxM1 were positively correlated（r=0.416，P<0.01）.Conclusion：TNF-α and FoxM1 are highly expressed in advanced colorectal cancer tissues，and they are positively correlated.The occurrence and development of colorectal cancer may play a role in promoting the two.The combined detection of the two can provide a reference for judging the nature of colorectal cancer lesions and provide a theoretical basis for targeting treatment of advanced colorectal cancer.

【Key words】 Colorectal cancer; Fork-head frame M1 gene; Tumor necrosis factor α

First-authors address：Huizhou First Peoples Hospital，Huizhou 516003，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.09.007

結(jié)直腸癌為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，治愈率低、死亡率高，五年生存率僅為55%，特別是晚期直腸癌患者通常存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移問題，預(yù)后效果極差[1]。當(dāng)前在結(jié)直腸癌的治療中外科手術(shù)方式應(yīng)用范圍廣泛，采用根治性切除病灶的方式阻滯疾病進(jìn)程。但相關(guān)報(bào)道顯示，僅70%的結(jié)直腸癌患者符合手術(shù)指征，且預(yù)后效果和腫瘤病理特征關(guān)系密切[2-3]。

已有研究證實(shí)結(jié)直腸癌屬于免疫源性腫瘤，基因靶向治療也逐漸受到臨床人員的關(guān)注[4-5]。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是由單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)分泌的重要細(xì)胞因子，是腫瘤基因靶向治療的新靶點(diǎn)之一[6]。另有研究表明叉頭框M1基因（FoxM1）在多種惡性腫瘤組織中異常高表達(dá)[7]。但關(guān)于兩者在結(jié)直腸癌中表達(dá)情況的相關(guān)性，目前尚未見明確報(bào)道。本研究將探究TNF-α及FoxM1在晚期結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)情況以及與臨床、病理特征的關(guān)系，為晚期結(jié)直腸癌的靶向治療提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道

如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年6月-2018年6月在本院接受治療的60例晚期結(jié)直腸癌患者的臨床資料，經(jīng)手術(shù)獲取癌灶組織與癌旁健康組織。60例患者中，男38例，女22例，年齡46～78歲，平均（61.3±6.9）歲，直腸癌24例、結(jié)腸癌36例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，國際抗癌聯(lián)盟（TNM）分期Ⅲb期或Ⅳ期，臨床資料完整、病理診斷明確，均經(jīng)放化療或免疫治療[8]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者，生命體征控制不穩(wěn)定者，主要器官嚴(yán)重功能異常者，合并基因遺傳性疾病者，存在其他可能影響研究結(jié)果的因素者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 免疫組化，試劑：兔抗人FoxM1單克隆抗體，TNF-α兔抗人單克隆抗體，超敏試劑盒，DAB顯色試劑盒，Envision廣譜二抗，均購自上海麥倉生物科技有限公司。使用10%中性福爾馬林固定全部組織標(biāo)本，在常規(guī)方式下脫水，石蠟包埋，在4 μm厚度下連續(xù)切片，65 ℃下烘烤，二甲苯與乙醇脫蠟，3%過氧化氫孵育10 min，高壓鍋煮沸2 min抗原修復(fù)，滴加一抗37 ℃、2 h，滴加二抗37 ℃、30 min。每個(gè)步驟后均用PBS緩沖液充分洗滌。滴加DAB顯色劑，顯微鏡下觀察顯色效果，終止DAB顯色，蘇木素復(fù)染，透明，干燥，中性樹脂封片。本研究由同一批參與人員負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作，盡量減少誤差，確保研究結(jié)果準(zhǔn)確可信。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)直腸癌灶組織、癌旁健康組織中TNF-α及FoxM1表達(dá)情況，晚期結(jié)直腸癌不同臨床、病理特征中TNF-α及FoxM1表達(dá)情況，TNF-α及FoxM1相關(guān)性。由4位病理科主治以上醫(yī)師閱片，根據(jù)切片中陽性腫瘤細(xì)胞數(shù)占所有腫瘤細(xì)胞的百分比和陽性腫瘤細(xì)胞的著色強(qiáng)度來判斷評(píng)分。（1）按陽性細(xì)胞百分比評(píng)分：

①無陽性細(xì)胞為0分;②陽性細(xì)胞數(shù)<25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。（2）按染色強(qiáng)度評(píng)分：腫瘤細(xì)胞無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘，0～3分為（-），4～5分為（+），6～7分為（++），≥8分為（+++）。陽性細(xì)胞百分比評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分>3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 25.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析使用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌灶組織、癌旁健康組織中TNF-α及FoxM1表達(dá)情況 結(jié)直腸癌灶組織中TNF-α陽性率高于癌旁健康組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=50.827，P=0.000）。結(jié)直腸癌灶組織中FoxM1陽性率高于癌旁健康組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=48.133，P=0.000）。見表1。

2.2 晚期結(jié)直腸癌不同臨床、病理特征中TNF-α及FoxM1表達(dá)情況 晚期結(jié)直腸癌分化程度低、突破漿膜層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TNF-α及FoxM1陽性率均高于分化程度高+中、未突破漿膜層、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 TNF-α和FoxM1相關(guān)性 在60例結(jié)直腸癌灶組織中，經(jīng)Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，TNF-α及FoxM1陽性表達(dá)率呈正相關(guān)（r=0.416，P<0.01）。

3 討論

在結(jié)直腸癌的發(fā)生與發(fā)展過程中，原癌基因的激活與抑癌基因的失活均有參與，為基因靶向治療提供了新的可能。2011年，文獻(xiàn)[9]指出使用靶向方式治療腫瘤的時(shí)代已經(jīng)來臨。該治療方式通過特定的基因靶點(diǎn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行抑制，在前列腺癌、晚期黑瘤、非小細(xì)胞肺癌等的治療中已獲取滿意效果[10-11]。單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)分泌的重要細(xì)胞因子TNF-α也成為腫瘤靶向治療的新靶點(diǎn)。FoxM1廣泛表達(dá)于增殖細(xì)胞中，并在多種惡性腫瘤中表達(dá)量明顯上調(diào)，例如胃癌、肺癌、胰腺癌、宮頸癌以及卵巢癌中[12]。研究晚期結(jié)直腸癌患者TNF-α及FoxM1水平對(duì)于腫瘤靶向治療方案的確定意義重大。

本研究中，結(jié)直腸癌灶組織中TNF-α及FoxM1陽性率高于癌旁健康組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示在晚期結(jié)直腸癌灶組織中，TNF-α及FoxM1處于高水平表達(dá)狀態(tài);晚期結(jié)直腸癌分化程度低、突破漿膜層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TNF-α及FoxM1陽性率均高于分化程度高+中、未突破漿膜層、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明TNF-α及FoxM1在不同臨床、病理特征中表達(dá)水平也存在差異。在良性腫瘤向惡性腫瘤轉(zhuǎn)變的過程中，存在細(xì)胞增生以及周期功能紊亂、永生化、逃逸凋亡，DNA過度復(fù)制等過程。相應(yīng)的分子機(jī)制為癌基因激活以及抑癌基因失活、修復(fù)基因功能缺失、凋亡機(jī)制缺失，人們也逐漸加強(qiáng)了對(duì)細(xì)胞凋亡的重視程度[13]。凋亡的實(shí)質(zhì)為程序性死亡，當(dāng)細(xì)胞被某種信號(hào)觸發(fā)后將依照凋亡程序死亡。有研究認(rèn)為，過度抑制凋亡可能是腫瘤形成的原因，抑癌基因突變、抗凋亡基因過度表達(dá)對(duì)于腫瘤的形成通常具有預(yù)測作用[14-15]。叉頭框（FOX）蛋白廣泛存在于真菌至人體中，具有高度保守的叉頭DNA結(jié)構(gòu)域，包含眾多家族成員與廣泛的生物學(xué)功能，其表達(dá)異常和腫瘤的發(fā)生以及代謝性疾病關(guān)系密切[16]。FoxM1隸屬于FOX轉(zhuǎn)錄因子家族，為細(xì)胞周期調(diào)控基因，在G2期基因表達(dá)的調(diào)控與染色體穩(wěn)定性的維持上扮演著重要角色。FoxM1可在G1/S期過程中對(duì)周期調(diào)節(jié)蛋白p21與p27的降解具有誘導(dǎo)作用，促使細(xì)胞進(jìn)入持續(xù)的循環(huán)周期中，激活Ras-MEK-MAPK信號(hào)通路，顯著增強(qiáng)癌細(xì)胞增殖能力[17-18]。另外，F(xiàn)oxM1在PI3K/Akt以及Notch等信號(hào)通路的激活中也發(fā)揮著一定作用，促使腫瘤生成。TNF-α可結(jié)合細(xì)胞膜上對(duì)應(yīng)的受體引發(fā)免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)與炎癥反應(yīng)，在特定的情況下對(duì)于腫瘤細(xì)胞的凋亡具有直接的誘導(dǎo)作用，激活caspase-8以及caspase-3信號(hào)通路，加快腫瘤上皮細(xì)胞死亡[19]。并且，TNF-α在修復(fù)組織損傷時(shí)也具有重要作用，誘導(dǎo)表達(dá)血管生長因子，含量較高時(shí)可對(duì)腫瘤細(xì)胞血管結(jié)構(gòu)進(jìn)行選擇性破壞，起到抗腫瘤效果。隨著病情嚴(yán)重程度的加深，TNF-α水平呈反饋性上升。陸明等[20]研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量越多、腫瘤浸潤程度越深、TNM分期越晚，F(xiàn)oxM1陽性率也越高（P<0.05）。本次研究結(jié)果與其具有一致性。另外，本研究還顯示，在60例結(jié)直腸癌灶組織中，TNF-α和FoxM1陽性表達(dá)率呈正相關(guān)（r=0.416，P<0.01）。TNF-α可激活ROS/HIF-1α途徑，

HIF-1α可直接結(jié)合FoxM1缺氧反應(yīng)原件HRE部位，促進(jìn)FoxM1過表達(dá)[10]。在結(jié)直腸癌的基因靶向治療中，可針對(duì)性抑制FoxM1表達(dá)，降低TNF-α水平，抑制癌細(xì)胞侵襲、遷移能力，促進(jìn)臨床預(yù)后效果的改善。

綜上所述，在晚期結(jié)直腸癌灶組織中，TNF-α和FoxM1表達(dá)水平高，兩者呈正相關(guān)。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展過程可能對(duì)兩者具有促進(jìn)作用，兩者聯(lián)合檢測可為結(jié)直腸癌病變性質(zhì)的判斷提供參考，為晚期結(jié)直腸癌的靶向治療提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]李志芳，黃慧瑤，石菊芳，等.結(jié)直腸癌疾病自然史模型研究的系統(tǒng)綜述：體系分類、參數(shù)分析及推薦構(gòu)建我國人群特異性模型[J].中華流行病學(xué)雜志，2017，38（2）：253-260.

[2] Valverde A，Pe?arando J，Ca?as A，et al.The addition of celecoxib improves the antitumor effect of cetuximab in colorectal cancer：role of EGFR-RAS-FOXM1-β-catenin signaling axis[J].Oncotarget，2017，8（13）：21754-21769.

[3]連歡，胡靜，嚴(yán)文躍，等.結(jié)直腸癌HER-2表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25（11）：68-72.

[4]鄒永平，李龍鶴.結(jié)直腸癌灶組織及細(xì)胞中人叉頭框蛋白C2的水平變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2017，57（29）：33-35.

[5]黃雪，鄭媛媛，李富榮.免疫細(xì)胞靶向治療結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞[J].中國免疫學(xué)雜志，2017，33（1）：96-98.

[6]于欣，于美玲，張德凱，等.寧夏地區(qū)高血壓腎損害患者腫瘤壞死因子-α-308基因多態(tài)性及其與貝那普利治療反應(yīng)的相關(guān)性研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2018，47（1）：23-25.

[7]張海鴿，羅曉勇.叉頭框蛋白M1過表達(dá)在結(jié)直腸癌中的作用[J].臨床與病理雜志，2017，37（3）：25-27.

[8]顧晉，汪建平.中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范（2017年版）[J/OL].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2018，36（1）：130-146.

[9] Mellman I，Coukos G，Dranoff G.Cancer immunotherapycomes of age[J].Nature，2011，480（7378）：480-489.

[10]胡文壇，王婷婷，張世杰，等.以PRDM1基因啟動(dòng)子為靶點(diǎn)的藥物篩選模型的建立研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（11）：11-15.

[11]劉春濤，姜大磊，張政，等.叉頭蛋白M1在食管鱗狀上皮異型增生至癌變過程中的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（17）：1668-1672.

[12]楊娜，劉祿，魏容.超音刺猬蛋白轉(zhuǎn)錄因子叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1及神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因同源物1在宮頸癌中的表達(dá)與臨床意義[J].安徽醫(yī)學(xué)，2016，38（11）：1417-1420.

[13]賀小威，徐玲.細(xì)胞周期相關(guān)基因CDKN2A、TP53、RB1和BRCA2在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2018，26（1）：8587.

[14]王一博，孫賓，王丹丹，等.納米材料誘導(dǎo)的自噬與凋亡在抑制腫瘤生長和治療中的作用及研究進(jìn)展[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2017，33（11）：101-104.

[15] Vishnubalaji R，Hamam R，Yue S，et al.MicroRNA-320 suppresses colorectal cancer by targeting SOX4，F(xiàn)OXM1，and FOXQ1[J].Oncotarget，2016，7（24）：35789-35802.

[16]鐘惠鈴.人非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中叉頭框蛋白Q1的表達(dá)水平[J].臨床肺科雜志，2017，22（3）：523-525.

[17]孟繁超，馮鷺，邵廣瑞.人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中FOXM1調(diào)控SYK轉(zhuǎn)錄[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2017，62（3）：25-30.

[18]周龍翔，張曙，饒雷平.青藤堿通過TNF-α、IL-23及β-catenin抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖[J].西南國防醫(yī)藥，2017，27（12）：1256-1259.

[19]徐偉，江鴻，郭燕菊，等.血清腫瘤壞死因子α和血管內(nèi)皮生長因子與結(jié)直腸癌的相關(guān)性分析[J].中國臨床保健雜志，2017，15（6）：679-681.

[20]陸明，胡孔旺，王宜文，等.叉頭框M1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017，33（8）：847-852.

（收稿日期：2018-12-28） （本文編輯：程旭然）