CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中表達(dá)相關(guān)性與預(yù)后的影響

馬秀麗　劉偉昌　馮園終　劉虎　陳慶明　趙玉梅

[摘要] 目的 探討CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中表達(dá)相關(guān)性與預(yù)后的影響因素。 方法 該研究于2016年7月—2017年7月共方便選取胃癌患者116例，根據(jù)術(shù)后患者的復(fù)發(fā)情況，將其分為術(shù)后復(fù)發(fā)組（52例）和術(shù)后未復(fù)發(fā)組（64例）。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法測定CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)。 結(jié)果 與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)分別為61.5%、59.6%，顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.63、8.12，P<0.05）。與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)分別為65.4%、78.8%，顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.89、12.12，P<0.05）。復(fù)發(fā)組胃癌組織中出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、III～I(xiàn)V期、浸潤深度≥5 cm與沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅰ～Ⅱ期、浸潤深度≤5 cm，E-Cadherin及CD68的表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 胃癌組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤的機制及E-Cadherin的過表達(dá)可明顯延長胃癌患者的生存率。

[關(guān)鍵詞] CD68;E-Cadherin;胃癌;預(yù)后

[中圖分類號] R735.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2019）05（c）-0024-03

[Abstract] Objective To investigate the relationship between CD68 and E-Cadherin expression and prognosis in gastric cancer and adjacent tissues. Methods From July 2016 to July 2017， 116 patients with gastric cancer were convenient selected and enrolled. According to the recurrence of postoperative patients， they were divided into postoperative recurrence group （52 cases） and postoperative non-recurrence group （64 cases）. The expression of CD68 and E-Cadherin in gastric cancer and adjacent tissues was determined by SP immunohistochemistry. Results Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the recurrent gastric cancer tissues were 61.5% and 59.6%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.63， 8.12， P<0.05）. Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the paracancerous tissues of the recurrent group were 65.4% and 78.8%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.89， 12.12， P<0.05）. Lymph node metastasis occurred in the recurrent gastric cancer， stage III-IV， invasive depth ≥5 cm and no lymph node metastasis， stage I-II， invasive depth less ≤5 cm， E-Cadherin and CD68 expression increased significantly， statistically significant （P<0.05）. Conclusion The mechanism of tumor-associated macrophage infiltration and the overexpression of E-Cadherin in gastric cancer can prolong the survival rate of gastric cancer patients.

[Key words] CD68; E-Cadherin; Gastric cancer; Prognosis

胃癌是當(dāng)今世界范圍內(nèi)消化道最常見的惡性腫瘤之一，其預(yù)后較差，5年生存率較低[1]。影響胃癌預(yù)后的因素很多，但腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡率升高的主要因素[2]。E-Cadherin是一種細(xì)胞粘附蛋白，主要表達(dá)于上皮細(xì)胞連接部，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化，維持上皮結(jié)構(gòu)，并與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。目前研究表明粘附分子參與了胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程[4]。腫瘤組織內(nèi)及其周圍的巨噬細(xì)胞（TAM）參與腫瘤發(fā)展的多個環(huán)節(jié)，并在促進(jìn)血管和淋巴管生成過程中起重要作用[5]。胃癌組織中高密度浸潤的TAM能促進(jìn)腫瘤的復(fù)發(fā)，而高密度浸潤TAM是胃癌病人預(yù)后不良的重要因素。故該研究方便選取2016年7月—2017年7月該院收治的116例患者為研究對象，探討胃癌的發(fā)生發(fā)展機制對于拓展胃癌治療新思路和改善胃癌患者預(yù)后具有十分重要的意義。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

該研究方便選取胃癌患者116例，根據(jù)術(shù)后患者的復(fù)發(fā)情況，將其分為術(shù)后復(fù)發(fā)組（52例）和術(shù)后未復(fù)發(fā)組（64例）。入組標(biāo)準(zhǔn)：①年齡20～80歲，性別不限;②行胃癌根治術(shù)后，術(shù)式包括全胃切除術(shù)，胃大部切除術(shù)，R0（切緣陰性），切緣均未見癌組織浸潤，進(jìn)行淋巴結(jié)清掃D1-D0;③所有患者均未行術(shù)前新輔助放療化療，TNM分期為T1-T2N0期患者術(shù)后未進(jìn)行輔助化療或免疫治療者，余分期者不限（參考2013年第2版NCCN胃癌治療指南）;④隨訪3年以上（包括術(shù)后3年內(nèi)死亡病例），資料完整者[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①胃癌分期較晚者行姑息性手術(shù)者或已有周圍臟器侵犯行聯(lián)合臟器切除者;②TNM分期為T1-T2N0期患者術(shù)前、術(shù)后已行輔助放化療或免疫治療者;③隨訪不足3年;④資料不完整者[7]，所選病例均通過倫理委員會的批準(zhǔn)，患者及家屬均知情同意。

1.2? 研究方法

1.2.1? 組織芯片制備? 收集武威市人民醫(yī)院符合該研究的胃癌病例及相關(guān)組織蠟塊，分別挑選出胃癌組織及其癌旁組織蠟塊，將組織芯片設(shè)計成2組，一組為癌周圍正常組織芯片組，另一組為癌組織芯片，副主任醫(yī)師閱片標(biāo)記靶點來制作組織芯片，將構(gòu)建好的組織芯片蠟塊，快速4 μm厚連續(xù)切片，并拷片，免疫組織化學(xué)染色步驟采用SP法，組織芯片切片經(jīng)脫蠟、梯度精水化后進(jìn)行抗原修復(fù)，具體為pH 6.0枸櫞酸鈉緩沖液抗原修復(fù)，微波爐加熱?？乖迯?fù)盒內(nèi)液體溫度保持在95℃左右并持續(xù)20 min，試劑A阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，試劑B封閉血清，一抗4℃過夜，試劑C信號放大，DAB染色及封片。所選抗體CD68和E-Cadherin均購自福州邁新生物技術(shù)公司，均為工作液。

1.2.2? 結(jié)果判定? 所有標(biāo)本參照2010年WHO最新分類進(jìn)行分型。免疫組化結(jié)果根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)目比例及著色強度判斷，<5%為0 分，5%～25%為1 分，26%～50%為2分，>50%為3 分。未著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。以二者得分相乘，0 分記為陰性（-），1～3 分為弱陽性（1+），4 分為中度陽性（2+），6分和9分為強陽性（3+）[8]。

1.2.3? 觀察指標(biāo)? 應(yīng)用胃癌組織及其癌周正常組織制作組織芯片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色及其結(jié)果判讀。主要觀察指標(biāo)：E-Cadherin及CD68的異常表達(dá)可以預(yù)測胃癌患者術(shù)后的復(fù)發(fā)率。次要觀察指標(biāo)：觀察E-Cadherin及CD68對胃癌組織的浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移數(shù)量和TNM分期的影響。

1.3? 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析。對計量資料進(jìn)行單樣本K-S正態(tài)性檢驗，正態(tài)分布數(shù)據(jù)以（x±s）表示，比較采用獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料以“率”描述，比較采用χ2檢驗/Fisher分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 胃癌組織E-Cadherin及CD68的表達(dá)情況

與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)顯著增加（P<0.05）。見表1。

2.2? 胃癌旁組織E-Cadherin及CD68的表達(dá)情況

與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)顯著增加（P<0.05）。見表2。

2.3? 復(fù)發(fā)組胃癌組織E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)

復(fù)發(fā)組胃癌組織中出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，E-Cadherin及CD68的表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。III～I(xiàn)V期與Ⅰ～Ⅱ期相比，胃癌組織E-Cadherin及CD68表達(dá)顯著增加，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與胃癌組織的浸潤深度≤5 cm相比，浸潤深度≥5 cm顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3? 討論

胃癌患者的癌組織及癌周圍正常組織上皮細(xì)胞均有E-Cadherin的表達(dá)，在胃癌術(shù)后未復(fù)發(fā)組和復(fù)發(fā)組之中E-Cadherin的異常表達(dá)存在明顯差異，并且在胃癌術(shù)后未復(fù)發(fā)和復(fù)發(fā)的患者中，對比不同的癌組織浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移數(shù)量和TNM分期，隨著浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量的增加以及胃癌的不斷進(jìn)展，E-Cadherin的異常表達(dá)的也呈逐漸增加趨勢。同時發(fā)現(xiàn)胃癌患者TNM分期越晚其癌組織內(nèi)浸潤的巨噬細(xì)胞遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于癌周圍正常組織，這種對胃癌細(xì)胞喪失吞噬、殺傷功能的免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)了胃癌組織的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致胃癌患者術(shù)后的復(fù)發(fā)率增高。

目前胃癌的發(fā)病率逐年提升，該研究通過對胃癌患者癌組織中及癌旁正常組織中E-Cadherin及CD68的異常表達(dá)來，對患者胃癌術(shù)后的復(fù)發(fā)率的影響及對胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和TNM分期的影響的研究對延長胃癌患者的生存率和減少復(fù)發(fā)率有重要意義，也將為胃癌患者的免疫治療提供一個新的途徑，由以上結(jié)果可知，與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組胃癌組織的E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)分別為61.5%、59.6%，顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組的胃癌旁組織E-Cadherin及CD68陽性表達(dá)分別為65.4%、78.8%，顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），這與董海峰等人[9]在相關(guān)研究中得出有關(guān)胃癌組織以及胃癌旁組織的E-Cadherin及CD68陽性率的結(jié)果相近，具有臨床意義。

該研究存在一定局限性，包括作為回顧性研究，樣本量較小。因此，有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步加大對患者進(jìn)行長期隨訪的工作。

綜上所述，胃癌組織中腫瘤E-Cadherin的過表達(dá)可明顯延長胃癌患者的生存率。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Wu H， Cai Z， Lu G， et al. Impact of c-erbB-2 protein on 5-year survival rate of gastric cancer patients after surgery： a cohort study and meta-analysis[J].Tumori，2017，103（3）： 249-254.

[2]? Yao Y， Liu Z， Guo H， et al. Elevated TRIM23 expression predicts poor prognosis in Chinese gastric cancer[J].Pathol Res Pract，2018，214（12）： 2062-2068.

[3]? Wanga XZ， Gu JL， Gao M， et al. Peperomin E Induces Promoter Hypomethylation of Metastatic-Suppressor Genes and Attenuates Metastasis in Poorly Differentiated Gastric Cancer[J]. Cell Physiol Biochem，2018，50（6）： 2341-2364.

[4]? Zhao K， He J， Wang YF， et al. EZH2-mediated epigenetic suppression of EphB3 inhibits gastric cancer proliferation and metastasis by affecting E-cadherin and vimentin expression[J]. Gene，2018，686：118-124.

[5]? Wang HC， Chen CW， Yang CL， et al. Tumor-Associated Macrophages Promote Epigenetic Silencing of Gelsolin through DNA Methyltransferase 1 in Gastric Cancer Cells[J]. Cancer Immunol Res，2017，5（10）：885-897.

[6]? Liu H，Lin C，Shen Z， et al.Decreased expression of granul ocyte-macrophage colony-stimulating factor is associated with adverse clinical outcome in patients with gastric cancer undergoing gastrectomy[J].Oncol Lett，2017，14（4）：4701-4707.

[7]? Wang F， Li B， Wei Y， et al. Tumor-derived exosomes induce PD1+ macrophage population in human gastric cancer that promotes disease progression[J].Oncogenesis，2018，7（5）：41.

[8]? 李軍，牟林軍，孫玉寶.胃癌組織中 HIF-1α，CD68 及 Sema4D 蛋白的表達(dá)及臨床[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，38（6）：454-457.

[9]? 董海峰，鄭英斌，龐志剛.E-鈣黏蛋白與波形蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義[J].中華實用診斷與治療雜志，2018，32（6）：580-582.

（收稿日期：2019-02-27）