SIPA1、HPV16/18E6在宮頸癌中的表達及其與臨床病理之間的關系

陳標衛(wèi)　葉錫銀

【摘要】 目的：探討信號誘導增殖相關蛋白1（SIPA1）和16、18型人乳頭瘤病毒E6蛋白（HPV16/18E6）在宮頸癌中的表達及其與臨床病理之間的關系。方法：選取本院宮頸癌患者120例為宮頸癌組，子宮肌瘤患者80例為正常宮頸組，均采用ELPS法檢測SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表達。比較兩組SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達情況，分析SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白在宮頸癌組織中的表達關系，以及宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達與臨床病理特征之間的關系。結果：正常宮頸組SIPA1陽性率高于宮頸癌組，HPV16/18E6陽性率顯著低于宮頸癌組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Spearman秩和檢驗顯示，宮頸癌組織中SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白呈負相關（P<0.05）;單因素分析顯示，宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達與盆腔淋巴結轉移有關（P<0.05），與年齡、臨床分期以及病理分級均無關（P>0.05）。結論：SIPA1蛋白低表達、HPV16/18E6蛋白高表達是宮頸癌組織學特征，且在宮頸癌盆腔淋巴結轉移中發(fā)揮重要作用。

【關鍵詞】 信號誘導增殖相關蛋白1; 16、18型人乳頭瘤病毒E6蛋白; 宮頸癌; 免疫組織化學

【Abstract】 Objective：To discuss the expression of signal induced proliferation associated protein 1（SIPA1）and human papillomavirus type 16 and 18 E6 protein（HPV16/18E6）in cervical carcinoma and their relationship with clinicopathology.Method：A total of 120 patients with cervical carcinoma were selected as cervical carcinoma group，and 80 patients with uterine leiomyoma were selected as normal cervical group，the expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein were detected by ELPS.The positive expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein between two groups was compared，the relationship between SIPA1 protein and HPV16/18E6 protein expression in cervical cancer tissues and the relationship between SIPA1 and HPV16/18E6 protein expression and clinicopathological characteristics were analyzed.Result：The positive rate of SIPA1 in normal cervical group was higher than that of cervical carcinoma group，and the positive rate of HPV16/18E6 was lower than that of cervical carcinoma group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Spearman rank sum test showed that SIPA1 protein was negatively correlated with HPV16/18E6 protein in cervical carcinoma（P<0.05）.Univariate analysis showed that the positive expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein in cervical carcinoma tissues was related to pelvic lymph node metastasis（P<0.05），but not related to age，clinical stage and pathological grade（P>0.05）.Conclusion：Low expression of SIPA1 protein and high expression of HPV16/18E6 protein are histological characteristics of cervical carcinoma，and play an important role in pelvic lymph node metastasis of cervical carcinoma.

【Key words】 Signal induced proliferation associated protein 1; Human papillomavirus type 16 and 18 E6 protein; Cervical carcinoma; Immunohistochemistry

First-authors address：Nancheng Hospital of Dongguan City，Dongguan 523071，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.03.031

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種小型的雙鏈脫氧核糖核酸病毒，HPV感染所致宿主宮頸癌發(fā)生已是臨床共識[1-3]。信號誘導增殖相關蛋白1（SIPA1）和16、18型人乳頭瘤病毒E6蛋白（HPV16/18E6）基因及其編碼蛋白在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展中似乎有著緊密的關系。有關SIPA1、HPV16/18E6蛋白在宮頸癌組織和正常宮頸組織中生物學行為關系的研究鮮有報道。為此，本院開展研究，試圖通過探討SIPA1、HPV16/18E6在宮頸癌中的表達及其與臨床病理之間的關系，為宮頸癌預測和臨床防治提供線索。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月-2017年6月于本院行廣泛子宮切除或聯(lián)合盆腔淋巴結切除的宮頸癌患者120例為宮頸癌組，另選取同期行子宮切除的子宮肌瘤患者80例為正常宮頸組，患者的宮頸組織均為在病理科存檔的石蠟組織切片。納入標準：經(jīng)組織病理學檢查，確診為宮頸癌，且具有完整的臨床資料;無放療禁忌證;既往無嚴重生物制劑過敏史;本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，且患者自愿參與并簽署知情同意書。排除標準：合并其他腫瘤者;肝腎功能不全和骨髓功能異常者;心腦血管疾病者;有放化療史或既往腫瘤病史者。

1.2 方法 采用ELPS法檢測兩組SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表達。SIPA1小鼠抗人類多克隆抗體試劑盒購自賽默飛世爾公司，HPV16 E6、HPV18 E6新西蘭兔抗人類多克隆抗體試劑盒購希施生物科技（上海）有限公司。4 mm常規(guī)石蠟切片，采用正常肝臟組織作為SIPA1陰性對照，采用已知陽性的宮頸癌組織作為HPV16/18E6陽性對照，采用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為空白對照，具體染色步驟按照試劑盒說明書進行。結果判定：通過雙盲法由兩位病理醫(yī)生獨立進行評估。每張切片顯微鏡下隨機抽取10個400倍視野，觀察500個細胞，SIPA1的細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒標志陽性，HPV16/18E6的細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒標志陽性，不著色細胞視為陰性表達，計算陽性細胞的百分率，陽性細胞數(shù)≥5%判定為陽性[4-5]。

1.3 觀察指標 比較兩組SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達情況，分析SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白在宮頸癌組織中的表達關系，以及宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達與臨床病理特征之間的關系。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗;相關關系采用Spearman秩和檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較 宮頸癌組年齡23～69周歲，平均（38.49±6.31）周歲;臨床分期：ⅠA 期38例，ⅠB期 45例，ⅡA期 37例;病理分級：G1級48例，G2級53例，G3級19例;盆腔淋巴結轉移：有39例，無81例。正常宮頸組年齡22～67周歲，平均（36.18±7.20）周歲。兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表達情況比較 正常宮頸組SIPA1陽性率高于宮頸癌組，HPV16/18E6陽性率顯著低于宮頸癌組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白在宮頸癌組織中的表達關系分析 Spearman秩和檢驗顯示，宮頸癌組織中SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白呈負相關（r=-0.540，P<0.05）。

2.4 宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表達與臨床病理特征的關系分析 單因素分析顯示，宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達與盆腔淋巴結轉移有關（P<0.05），與年齡、臨床分期以及病理分級均無關（P>0.05），見表2。

3 討論

HPV16/18型均存在E6基因，E6蛋白是HPV E6基因編碼蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，E6蛋白的表達貫穿于宮頸癌發(fā)生與發(fā)展，從分子生物學機制上觀察到，E6蛋白除了在泛素化連接酶介導下與p53蛋白結合并發(fā)生多聚泛素化和抑制p53蛋白對細胞周期調(diào)控作用之外，還通過降解E6TP1蛋白的途徑來活化Rap1通路促進宮頸癌的發(fā)生發(fā)展[6-10]。Smith等[11]指出，Rap1在活化形式中介導細胞連接和黏附，非活化形式Rap1抑制黏附連接形成，甚至使已形成的黏附連接破壞，由此可見Rap1通路存在細胞黏附機制，參與宮頸癌細胞浸潤和轉移。一直以來SIPA1都被認為是抑癌基因，一項動物試驗指出，SIPA1基因丟失的小鼠將會發(fā)生慢性髓性白血病，科室該項研究未能解析其中的內(nèi)在機制[12]。另有研究指出，SIPA1是一種Rap1的GTP酶活化蛋白[13-14]，SIPA1蛋白催化Rap1從活性形式到非活性形式[15-18]。

本研究結果顯示，正常宮頸組SIPA1陽性率高于宮頸癌組，HPV16/18E6陽性率顯著低于宮頸癌組，比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Spearman秩和檢驗顯示，宮頸癌組織中SIPA1蛋白與HPV16/18E6蛋白呈負相關（P<0.05）。提示，SIPA1、HPV16/18E6基因共同參與Rap1通路調(diào)控，二者相互之間存在制約的內(nèi)在機制，使得SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表達截然相反。本研究結果顯示，宮頸癌組織中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的陽性表達與盆腔淋巴結轉移有關（P<0.05），與年齡、臨床分期以及病理分級均無關（P>0.05）。提示，SIPA1、HPV16/18E6基因在宮頸癌浸潤和轉移中發(fā)揮重要作用，HPV16/18E6蛋白的高表達促進宮頸癌細胞浸潤和轉移，SIPA1蛋白的高表達抑制宮頸癌細胞浸潤和轉移。這可能因為宮頸癌浸潤和轉移定植必須經(jīng)歷細胞連接和黏附這一過程[19-20]，SIPA1蛋白相對量降低的情況下，不能更多地催化Rap1從活性形式到非活性形式，使得Rap1在活化形式中介導細胞連接和黏附，促進宮頸癌細胞浸潤和轉移。

綜上所述，SIPA1蛋白低表達、HPV16/18E6蛋白高表達是宮頸癌組織學特征，且在宮頸癌盆腔淋巴結轉移中發(fā)揮重要作用。

參考文獻

[1]吳盈盈，吳思，王爽，等.人乳頭瘤病毒感染與STAT通路關系的研究進展[J].微生物與感染，2018，13（1）：37-42.

[2]楊惠霞，郝增平.人乳頭瘤病毒與宮頸病變關系的研究進展[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志，2017，16（3）：310-312.

[3]薛劍俠，王玉蘭，李曉旭，等.人乳頭瘤病毒在宮頸癌發(fā)病機制中的研究進展[J].中國藥物與臨床，2017，17（4）：542-543.

[4]王敏，虞繼紅.介紹一種改良的免疫組化EnVision法操作流程[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，32（1）：102-103.

[5]李銳，金玉蘭，楊冬梅.兩種鹽酸脫鈣液對骨髓HE及免疫組化染色的影響[J].中國醫(yī)刊，2017，52（8）：86-89.

[6] Zumbach K，Kisseljov F，Sacharova O，et al.Antibodies against oncoproteins E6 and E7 of human papillomavirus types 16 and 18 in cervical-carcinoma patients from Russia[J].Int J Cancer，2000，85（3）：313-318.

[7] Chaloob M K，Hussein A G，Qasim B J.Correlation of P16（Ink4a）and CK17 to HPV（16E6+18E6）in Premalignant and Malignant Lesions of Uterine Cervix：A Clinicopathologic Study[J].Iran J Pathol，2016，11（4）：377-390.

[8]張春華，張寧，康凌，等.HPV16 E6及E7蛋白在宮頸癌組織中的表達與病理特征的相關性研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2016，26（17）：4044-4046.

[9]許育絢，崔永勝，耿建祥，等.968例宮頸細胞中人乳頭瘤病毒E6/E7mRNA基因分析[J].中國婦幼保健，2015，30（4）：617-619.

[10]殷復粉，王寧，于嘯，等.宮頸癌細胞系中HPV16E6、E7及E6/E7基因?qū)TK31基因甲基化狀態(tài)及表達的影響[J].中國癌癥雜志，2015，25（9）：641-651.

[11] Smith Y E，Vellanki S H，Hopkins A M.Dynamic interplay between adhesion surfaces in carcinomas：Cell-cell and cell-matrix crosstalk[J].World J Biol Chem，2016，7（1）：64-77.

[12] Xu Y，Ikeda S，Sumida K，et al.Sipa1 deficiency unleashes a host-immune mechanism eradicating chronic myelogenous leukemia-initiating cells[J].Nat Commun，2018，9（1）：914.

[13]劉丹，鄭立紅，李興媚.卡鉑通過抑制ERK1/2通路誘導人卵巢癌細胞S和G1期阻滯[J].中國生物化學與分子生物學報，2014，30（8）：815-823.

[14]李珊珊，郭曉汐，安輸，等.小G蛋白Rap的信號通路與生物學功能[J].生理科學進展，2016，47（1）：14-20.

[15]王川紅.信號誘導增殖相關蛋白1與16、18型人乳頭瘤病毒E6蛋白在宮頸癌中的表達和應用價值[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2014，11（24）：162-163.

[16]李鳳霞，張三元，李美蓉.SIPA1在腫瘤中研究進展[J].中國臨床研究，2016，29（3）：427-429.

[17]劉芳，吳巖.Sipa1基因在惡性腫瘤侵襲轉移中的作用[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學學報，2009，31（3）：239-243.

[18] Xie C，Yang L，Yang X，et al.Sipa1 promoter polymorphism predicts risk and metastasis of lung cancer in Chinese[J].Mol Carcinog，2013，52（Suppl 1）：E110-117.

[19] Roberts M R，Hong C C，Edge S B，et al.Case-only analyses of the associations between polymorphisms in the metastasis-modifying genes BRMS1 and SIPA1 and breast tumor characteristics，lymph node metastasis，and survival[J].Breast Cancer Res Treat，2013，139（3）：873-885.

[20] Yang F，Yu Y.Tumor microenvironment--the critical element of tumor metastasis[J].Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2015，18（1）：48-54.

（收稿日期：2018-06-22） （本文編輯：董悅）