GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性的研究

王濤 卜曉波 宋潔

【摘要】 目的：探討GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系及其臨床意義。方法：選取2016年4月-2017年8月在本院接受治療的84例肺癌患者為研究組，另選取100例健康人群作為對照組，采用多重PCR技術(shù)檢測研究對象的GSTT1基因缺陷情況。比較兩組GSTT1基因缺陷情況，比較兩組中吸煙與不吸煙者的GSTT1基因缺陷情況，比較鱗癌患者與對照組的GSTT1基因缺陷情況。結(jié)果：研究組GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組（P<0.05）;研究組吸煙者中GSTT1（-）情況多于對照組（P<0.05）;鱗癌患者中GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組（P<0.05）。結(jié)論：GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性息息相關(guān)，GSTT1（-）基因型有增加患肺癌的可能性，且與吸煙患者存在交互作用，進(jìn)一步的研究將更好地理解目標(biāo)基因如何影響肺癌風(fēng)險(xiǎn)，對于肺癌的預(yù)防和治療有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 GSTT1基因缺失; 多態(tài)性; 肺癌易感性; 臨床意義

【Abstract】 Objective：To explore the relationship between GSTT1 gene deletion，polymorphism and lung cancer susceptibility and its clinical significance.Method：A total of 84 lung cancer patients treated in our hospital from April 2016 to August 2017 were selected as the study group，and another 100 healthy people were selected as the control group.The GSTT1 gene defect was detected by multiplex PCR.The GSTT1 gene defect was compared in two groups，the GSTT1 gene defects in smokers and non-smokers between two groups were compared，and the GSTT1 gene defect between squamous cell carcinoma patients and control group was compared.Result：The deletion of GSTT1（-）genotype in study group was more than that of control group（P<0.05）.The deletion of GSTT1（-）genotype of smokers in study group was higher than that of control group（P<0.05）.The deletion of GSTT1（-）genotype in squamous cell carcinoma patients was more than that of control group（P<0.05）.Conclusion：GSTT1 gene deletion and polymorphism are closely related to the susceptibility of lung cancer，GSTT1（-）genotype increases the possibility of lung cancer and has interaction with smokers，further research will better understand how target genes affect the risk of lung cancer，which is of great significance for the prevention and treatment of lung cancer.

【Key words】 GSTT1 gene deletion; Polymorphism; Lung cancer susceptibility; Clinical significance

First-authors address：Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College，Mudanjiang 157000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.07.031

肺癌是發(fā)病率和死亡率增長速度最快、嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響到患者的生活質(zhì)量，已經(jīng)成為全國乃至全世界高度重視的社會問題。導(dǎo)致肺癌的發(fā)生因子有很多，目前認(rèn)為吸煙是肺癌最重要的高危因素，煙草中含有的多種化學(xué)物質(zhì)均有較強(qiáng)的致癌活性，激活癌基因，導(dǎo)致癌變[1]。此外，空氣污染、工業(yè)廢氣等環(huán)境因素也是引發(fā)肺癌的重要因素，與遺傳也息息相關(guān)，相關(guān)研究表明，不同的人群對環(huán)境致癌劑的易感性存在明顯差異，與腫瘤易感性存在緊密關(guān)系的有兩大類基因：即Ⅰ相與Ⅱ相代謝酶基因，其中，GSTT1是Ⅱ相代謝酶基因的家族成員，對于外源性化學(xué)物質(zhì)具有解毒的重要功能，GSTT1型基因缺失的患者會增加肺癌易感性的可能[2]。本文主要探討了GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月-2017年8月在本院接受治療的84例肺癌患者為研究組，另選取100例健康人群作為對照組（正常健康者均按照相應(yīng)的流程通過體檢，體檢正常）。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡29～80歲;②平均煙齡在7年以上;③患者均確診為肺癌，且臨床表現(xiàn)符合肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3];④患者未有其他腫瘤病變;⑤無傳染性疾病;⑥對照組中的健康人群均在本院體檢部進(jìn)行體檢，體檢結(jié)果正常。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期、哺乳期女性患者[4]。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，且研究對象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集 采集過程及具體要求如下：（1）分別取兩組外周血2 mL，放入加有EDTA的抗凝試劑管里，如果不立即進(jìn)行DNA提取，則必須于30 min內(nèi)置入-80 ℃的低溫冰箱里凍存以便備用，采用上海生工生物公司生產(chǎn)的UNIQ-10柱式基因組DNA抽提試劑盒提取[5]。冷凍標(biāo)本必須先解凍，新鮮標(biāo)本則可以直接進(jìn)行基因提取，對其實(shí)施電泳檢測，并應(yīng)用核酸蛋白分析儀測量其OD值，提取完成后放入-20 ℃中保存。

1.2.2 PCR擴(kuò)增 根據(jù)480BP片段是否存在判斷GSTT1基因是否缺失，GSTT1基因PCR反應(yīng)體系含100～500 ng模板DNA、0.5 pmol/L引物、200 pmol/L?dNTP、2.0 mmol/L MgCl2、0.5 U TaqDNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液[6]?？偡磻?yīng)體積為30 μL。反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min;94 ℃ 1 min、59 ℃ 1 min、72 ℃?1 min，35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。反應(yīng)產(chǎn)物在1.7%瓊脂糖凝膠（含0.5 pg/mL溴化乙啶）中電泳約40 min（120 V）后，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并拍照。對所有取得的結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并通過對所得數(shù)據(jù)整理入檔案。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)兩組GSTT1基因缺陷情況;比較兩組中吸煙者的GSTT1基因缺陷情況;比較鱗癌患者與對照組的GSTT1基因缺陷情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 對照組男48例，女52例;年齡為31～76歲，平均（53.1±0.4）歲;煙齡3～12年，平均（7.1±0.4）年;吸煙者36例，不吸煙者64例。研究組男51例，女33例;年齡29～80歲，平均（54.2±0.3）歲;病程3～12年，平均（5.2±2.3）年;煙齡5～12年，平均（8.2±0.3）年;吸煙者59例，不吸煙者25例;鱗癌51例，腺癌19例，其他類型的肺癌患者14例。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組GSTT1基因缺陷情況比較 研究組GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=15.01，P<0.05），見表1。

2.3 兩組吸煙者的GSTT1基因缺陷情況比較 吸煙者中，對照組GSTT1（+）28例（77.78%）、GSTT1（-）8例（22.22%），研究組GSTT1（+）31例（52.54%）、GSTT1（-）28例（47.46%），研究組吸煙者中GSTT1（-）情況多于對照組（字2=6.05，P<0.05）。

2.4 鱗癌患者與對照組的GSTT1基因缺陷情況比較 鱗癌患者中GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=18.01，P<0.05），見表2。

3 討論

肺癌是現(xiàn)階段發(fā)病率最高的腫瘤，早期患者會出現(xiàn)胸悶、胸痛、氣短、發(fā)熱、咳嗽以及咳血的癥狀，致使患者呼吸困難，如果沒有得到及時(shí)的治療，病情將會在短時(shí)間內(nèi)持續(xù)惡化，最終導(dǎo)致癌細(xì)胞擴(kuò)散，造成患者死亡[7]。臨床對于肺癌的診斷并不難，通過支氣管檢查、X線檢查以及細(xì)胞學(xué)檢查等方式即可確診。經(jīng)調(diào)查研究顯示，肺癌患者的死亡率位居所有癌癥的首位，且其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升的趨勢[8]。關(guān)于肺癌的致病因素有很多，至今尚未完全查明，但經(jīng)過診治肺癌的國內(nèi)外專家的不斷研究，發(fā)現(xiàn)其與遺傳、環(huán)境污染、大氣污染以及結(jié)核病、吸煙、家族史等密切相關(guān)，尤其是吸煙，有較長煙齡的患者比不吸煙者患肺癌率要高。如果不及時(shí)控制肺癌的惡化，會導(dǎo)致肺癌的播散和轉(zhuǎn)移，主要有直接擴(kuò)散、血行轉(zhuǎn)移、淋巴道轉(zhuǎn)移等三種途徑，一經(jīng)轉(zhuǎn)移，將很難進(jìn)行治療[9]。臨床主要是通過手術(shù)治療、化療以及放射治療的方式殺死癌變細(xì)胞，并沒有較好的藥物對肺癌進(jìn)行控制。此外，對于因肺癌而引發(fā)的并發(fā)癥也需要進(jìn)行積極的治療，淋巴腫瘤、肺結(jié)核、肺部感染等都必須引起重視，在對患者進(jìn)行肺癌的常規(guī)檢查時(shí)，要仔細(xì)檢查患者有無身體其他部位的病變，一旦發(fā)現(xiàn)，必須進(jìn)行治療，防止癌細(xì)胞浸潤其他器官，降低死亡率[10]。

基因突變是生物進(jìn)化的重要因素之一，經(jīng)研究表明，在相同環(huán)境中生存的人群，其發(fā)病的危險(xiǎn)性因個(gè)體的差異而有所不同，其發(fā)病的易感性與耐受性也不同，而經(jīng)過不斷地研究發(fā)現(xiàn)，該種差異是由遺傳因素決定的，即基因的多態(tài)性。GSTT在機(jī)體中對于保護(hù)細(xì)胞免受急性毒性化學(xué)物質(zhì)的攻擊起到重要作用，其通過與DNA大分子共價(jià)結(jié)合能激發(fā)某些腫瘤的形成，使其具有抑制細(xì)胞癌變、保護(hù)生物大分子不受侵襲的功能，目前對于GSTT基因的研究成為一個(gè)熱點(diǎn)[11]。外源性致癌物在體內(nèi)的代謝有兩種途徑，一條途徑可經(jīng)Ⅰ相代謝酶，與大分子結(jié)合啟動致癌過程;另一條則是由Ⅱ相代謝酶，與親電子物質(zhì)結(jié)合，將之轉(zhuǎn)化為親水性物質(zhì)，經(jīng)尿液或膽汁排出體外，這一過程為解毒反應(yīng)。致癌物能否引起靶細(xì)胞癌變很大程度上取決于這兩類酶的活性及彼此的平衡關(guān)系。經(jīng)過相關(guān)研究表明，不同個(gè)體其GSTT1基因缺陷型的頻率處在不停波動的范圍內(nèi)，并不是一個(gè)定值，GSTT1基因能有效調(diào)節(jié)遺傳毒性物質(zhì)的生物學(xué)效應(yīng)，其多態(tài)性也可能成為影響人類患癌的重要因素之一[12]。在本文的研究中，研究組GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組（P<0.05），說明肺癌患者中，GSTT1基因缺失的有著較高的頻率，肺癌與GSTT1型基因的缺失有著一定程度上的關(guān)聯(lián)，GSTT1型基因可能是肺癌的一個(gè)重要危險(xiǎn)因子，由于該解毒酶基因的缺失導(dǎo)致不能合成相應(yīng)的酶，當(dāng)機(jī)體受到來自化學(xué)致癌物的攻擊時(shí)，其保護(hù)能力有所下降，使DNA損傷更加嚴(yán)重，當(dāng)DNA損傷到一定程度時(shí)，會影響到癌基因或抑制癌基因的表達(dá)，但有些研究結(jié)果表明GSTT1型基因缺失與肺癌并無太大的關(guān)系，所以該結(jié)果尚無一致性[13-14]。

本研究結(jié)果顯示，研究組吸煙者中GSTT1（-）情況多于對照組（P<0.05），該結(jié)果已經(jīng)完全能夠證實(shí)吸煙與肺癌的相關(guān)性?！拔鼰熡泻】怠睂τ诿恳粋€(gè)人來說并不陌生，煙草中有上千種化學(xué)物質(zhì)，尤其是多鏈芳香烴類化合物和亞硝胺等，均有很強(qiáng)的致癌活性，長時(shí)間的吸煙可通過多種機(jī)制導(dǎo)致支氣管上皮細(xì)胞DNA損傷，使得癌基因（如Ras基因）激活和抑癌基因（如p53，F(xiàn)HIT基因等）失活，進(jìn)而引起細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致癌變[15]。吸煙被認(rèn)為是肺癌最重要的危險(xiǎn)因素，并在一定程度上可增加患癌率。此外，不同病理類型的肺癌其GSTT1基因缺失的頻率也不同，本研究結(jié)果顯示，鱗癌患者中GSTT1（-）型基因缺失情況多于對照組（P<0.05），由此證明基因的缺失是患肺鱗癌的危險(xiǎn)因素[16]。

肺癌是一個(gè)多因素共同作用的疾病，研究認(rèn)為GSTT基因的多態(tài)性與肺癌的發(fā)生有著密切聯(lián)系，臨床上除了對肺癌患者進(jìn)行手術(shù)、化療的方式進(jìn)行治療，也有一定的預(yù)防和控制措施[17]。相關(guān)研究表明，通過對環(huán)境的保護(hù)與吸煙的控制，肺癌的發(fā)病率有所下降，首先要從一級防護(hù)開始做起：嚴(yán)格控制每天的吸煙量，或禁止吸煙，越早戒煙，肺癌的發(fā)病率就越低，其病情發(fā)展速度就越慢，由此看來，戒煙是預(yù)防肺癌最有效也是最基礎(chǔ)的手段和途徑[18]。除此之外，大氣污染、沉降指數(shù)、煙霧指數(shù)等暴露劑量與肺癌的發(fā)生率成正相關(guān)性，保護(hù)環(huán)境、減少大氣污染是降低肺癌發(fā)病率的重要措施。多吃蔬菜、水果，不挑食，養(yǎng)成良好的飲食習(xí)慣也有利于預(yù)防肺癌的發(fā)病。多運(yùn)動鍛煉，增強(qiáng)自身免疫力，以積極的心態(tài)與肺癌做斗爭[19]。對于GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性的相關(guān)性研究，仍需要醫(yī)學(xué)技術(shù)人員的不斷努力，從細(xì)胞學(xué)、動物試驗(yàn)等多個(gè)方面研究GSTT與肺癌致癌因子的關(guān)系[20]。

綜上所述，GSTT1基因缺失、多態(tài)性與肺癌易感性息息相關(guān)，GSTT1（-）基因型有增加患肺癌的可能性，且與吸煙患者存在交互作用，進(jìn)一步的研究將更好地理解目標(biāo)基因如何影響肺癌風(fēng)險(xiǎn)，對于肺癌的預(yù)防和治療有重要意義。

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（收稿日期：2018-07-30） （本文編輯：董悅）