參苓全營養(yǎng)制劑改善荷瘤小鼠化療后營養(yǎng)狀況的實驗研究

陳勇軍，李武國，程翔燕，成金樂

1.中山市中智藥業(yè)集團有限公司，國家中醫(yī)藥管理局中藥破壁飲片技術(shù)和應用重點研究室，廣東 中山 528437；2.中山大學附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510080

參苓全營養(yǎng)制劑為依據(jù)GB 29922開發(fā)的腫瘤特定全營養(yǎng)配方食品。其在常規(guī)營養(yǎng)素搭配的基礎(chǔ)上，根據(jù)中醫(yī)藥傳統(tǒng)的養(yǎng)生、藥膳等理論，特別添加了具有扶正固本、免疫調(diào)節(jié)功能的藥食同源物質(zhì)?；熥鳛閻盒阅[瘤患者綜合治療中的一個重要手段，常會引起惡心、嘔吐、造血系統(tǒng)受抑、免疫力低下等毒性反應，不但加重了患者營養(yǎng)狀況的惡化，同時腫瘤患者的營養(yǎng)不良又會導致患者對化療等抗腫瘤治療的耐受力下降[1]。因此合理有效提供營養(yǎng)支持治療對于腫瘤化療患者而言非常重要。本研究旨在通過實驗初步評價參苓全營養(yǎng)制劑對腫瘤化療后營養(yǎng)狀況的改善作用以及輔助治療效果。

1 材料與方法

1.1 樣品

參苓全營養(yǎng)制劑（規(guī)格：250 g/袋，批號：20160812）由中山市中智藥業(yè)集團有限公司提供。臨用時加滅菌注射用水配制成濃度為0.3 g·mL-1的均勻混懸液，作為供試品。

速愈素（規(guī)格：74 g/袋，批號：6039428200）為雀巢保健營養(yǎng)公司產(chǎn)品。臨用時加滅菌注射用水配制成濃度為0.6 g·mL-1的均勻混懸液，作為對照品。

順鉑注射液（規(guī)格：6 mL∶30 mg（5 mg·mL-1），批號：160802）為江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。臨用時加生理鹽水配制成2.5 mg·mL-1的順鉑溶液，作為治療用藥[2]。

1.2 主要儀器與試劑

Thermo Multiskan FC型酶標儀；日立7020型全自動生化分析儀；滅菌注射用水（批號：1607183202，石家莊四藥）；氯化鈉注射液（批號：S1610077，上海百特醫(yī)療）；胎牛血清（批號：42G5550K）、DMEM培養(yǎng)基（批號：8116293）、0.25%Trypsin-EDTA（批號：1676922）均為gibco公司產(chǎn)品；PBS溶液（批號：AB10136405）為hyclone公司產(chǎn)品；多聚賴氨酸（貨號：P1399）為sigma公司產(chǎn)品。小鼠前白蛋白（PA）ELISA試劑盒（批號：02/2017，上海酶聯(lián)生物）。小鼠TNF-α ELISA試劑盒（批號：AK0017FEB07020，伊萊瑞特生物）。

1.3 實驗動物

SPF級C57BL/6小鼠，雌性，體重為18～22 g，購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證編號為SCXK（京）2012-0001，實驗動物質(zhì)量合格證編號為11400700199614。

1.4 瘤株

Lewis肺癌細胞（LLC）購自于中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。LLC細胞用含20%FBS的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，37℃，5%CO2，2～3天傳代一次。

1.5 方法

1.5.1 模型的建立 在每只雌性C57BL/6小鼠的背部右側(cè)皮下注射含2×107個·mL-1的細胞懸液100 μL，培養(yǎng)11天后，選擇精神狀態(tài)良好、瘤體生長良好的荷瘤小鼠為實驗動物。

1.5.2 分組及給藥 將荷瘤小鼠隨機分為4組，每組20只，分別設(shè)為模型組、參苓組、速愈素組、順鉑組。參苓組全營養(yǎng)制劑均勻混懸液每天灌胃兩次，兩次灌胃之間間隔5小時，其余三組每天灌胃一次，連續(xù)10天，各組灌胃劑量均為20 mL·kg-1BW。各組腹腔注射給予相應的溶液，注射劑量均為2.4 mL·kg-1BW，10天內(nèi)注射3次，分別于開始灌胃后第1、5、8天分別注射一次。

1.5.3 觀察指標與測定方法 ①小鼠一般情況觀察：實驗過程中定期觀察小鼠的精神狀態(tài)、飲食、毛發(fā)、自主活動、肌力、糞便性狀及對外界刺激反應等情況。各組于灌胃前、后每天稱重并記錄體重。②腫瘤測量：于給藥前、給藥后第4、8、11天測量腫瘤的長和寬，通過公式計算腫瘤的大?。[瘤體積=長×寬2/2）。③血清生化指標和細胞因子的檢測：實驗最后一天取小鼠眼眥靜脈血，放置1 h左右，5 000 r·min-1離心10 min，取上清液，即得小鼠血清標本，全自動生化儀檢測TP、ALB的含量；ELISA試劑盒檢測血清中PA、TNF-α的含量。④抑瘤率測定：解剖小鼠取瘤體，稱重，計算腫瘤生長抑制率：腫瘤生長抑制率=（1-給藥組平均瘤重/模型組平均瘤重）×100%。

1.6 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析及組間t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般情況觀察

模型組表現(xiàn)正常，其余三組化療后均不同程度出現(xiàn)體重下降、精神欠佳、多尿等毒副反應（表1、表2）。

與模型組比較，化療后小鼠均有不同程度的體重下降（P＜0.001）；與順鉑組比較，參苓組、速愈素組的小鼠體重減輕程度相對偏?。≒＜0.01），而參苓組和速愈素組間差異無統(tǒng)計學意義（表2）。

2.2 腫瘤體積變化以及抑瘤率

開始灌胃后，模型組小鼠腫瘤仍然持續(xù)增長，其余三組小鼠腫瘤的生長都受到一定的抑制，順鉑組小鼠在給藥第8天后甚至出現(xiàn)了腫瘤體積縮小的現(xiàn)象（表3）。

表1 小鼠一般情況

表2 各組小鼠體重變化情況（±s，n=20）

表2 各組小鼠體重變化情況（±s，n=20）

與順鉑組比較，①P＜0.01。

組別小鼠體重（單位：g）順鉑組19.48±0.59 18.77±0.60 18.52±0.77 18.37±0.87 18.22±1.03 17.24±1.04 16.87±1.03 16.46±1.36 15.21±1.17 14.85±1.18 14.55±1.09第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天模型組19.58±0.84 19.39±0.91 19.43±0.92 19.60±0.87 19.73±0.88 19.73±0.99 19.72±0.89 19.40±0.89 19.65±0.89 20.03±0.93 20.17±0.83參苓組19.23±0.74 18.57±0.72 18.45±0.56 18.58±0.43 18.66±0.51 17.78±0.58 17.26±0.68 16.88±0.66 16.11±0.82 15.79±0.9 15.41±0.92①速愈素組19.64±0.55 19.05±0.57 18.92±0.64 18.95±0.64 19.15±0.66 18.41±0.68 17.98±0.75 17.82±0.75 17.03±1.00 16.64±1.08 16.48±1.05①

2.3 小鼠血清TP、ALB、PA、TNF-α的含量

相對于模型組，其余化療三組的TP、ALB值均有不同程度下降，但TNF-α值均較模型組更高（表5）。

表3 各組小鼠腫瘤體積變化情況（±s，n=20）

表3 各組小鼠腫瘤體積變化情況（±s，n=20）

與順鉑組比較，①P＜0.01；與模型組比較，②P＜0.01。

組別模型組參苓組速愈素組順鉑組平均腫瘤體積（mm3）第11天280.11±171.48 119.54± 68.62①②151.10± 124.84①②72.89±48.79②第1天58.76±36.02 50.82±22.07 39.79±25.30 46.19±23.21第4天89.83±75.10 76.86±39.09 62.55±39.47 68.54±37.05第8天202.98±171.15 114.01±59.56 122.62±91.56 83.03±50.17

表4 對小鼠Lewis肺癌抑瘤率的影響 （±s，n=20）

表4 對小鼠Lewis肺癌抑瘤率的影響 （±s，n=20）

與模型組比較，①P＜0.01；與順鉑組比較，②P＜0.01。

組別模型組參苓組速愈素組順鉑組抑瘤率（%）0 72.1 58.0 82.3瘤重（g）0.29±0.19 0.08±0.05①0.12± 0.09①②0.05±0.04①

3 討論

3.1 從模型組小鼠體重增長正常、精神良好，外觀、行為、飲食等正?？梢钥闯?，該階段尚處于腫瘤早期階段，該階段機體尚未產(chǎn)生明顯不適表現(xiàn)，但機體的內(nèi)在生化指標已經(jīng)出現(xiàn)了一些異常，同時該階段瘤體生長迅速。即使是在身體條件較好的早期階段即開始的化療治療，化療在顯著抑制腫瘤生長甚至使瘤體萎縮的同時，也使小鼠產(chǎn)生了消瘦、精神欠佳、多尿等嚴重不良反應。

3.2 從試驗結(jié)果可以看出，化療過程中，在腫瘤早期、身體素質(zhì)尚好時開始營養(yǎng)支持治療，不但有利于改善化療的體重、精神等生存狀態(tài)，減輕化療的副作用，而且對化療腫瘤抑殺效果沒有太大影響，其收益大于風險。對腫瘤的治療，實施營養(yǎng)干預的時機是越早越好[3]。

表5 各組小鼠血清中TP、ALB、PA的含量檢測結(jié)果 （±s，n=20）

表5 各組小鼠血清中TP、ALB、PA的含量檢測結(jié)果 （±s，n=20）

與模型組比較，①P＜0.05；與順鉑組比較，②P＜0.05（注：大多數(shù)樣品TNF-α含量低于試劑盒最小檢測限，因此TNF-α含量檢測無結(jié)果。）

組別模型組參苓組速愈素組順鉑組含量（mg/L）TP 56.53±2.19 56.03±2.64②55.01±1.76②50.74±5.50①ALB 27.23±1.16 26.25± 1.26①②25.73±1.02①24.18±2.82①TNF-α 221.80±38.92 277.52± 49.56①②288.33±47.33①317.60±69.14①

3.3 參苓全營養(yǎng)制劑特別在常規(guī)營養(yǎng)素[4]之外，以破壁粉體形式添加了具有免疫調(diào)節(jié)功能的人參、茯苓和山藥。破壁粉體的粒徑分布控制在D90小于30 μm以下，粉體均勻細膩[5]，不但有利于改善粉體沖調(diào)時的可沖調(diào)性[6]，使粉體易于溶解和滑膩，而且也有利于提高吸收利用率[7]。試驗結(jié)果表明參苓全營養(yǎng)制劑能減輕順鉑造成的小鼠體重下降程度，提高順鉑導致小鼠下降的總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）的含量，能減輕順鉑對Lewis肺癌荷瘤小鼠產(chǎn)生的副作用，在某些方面效果好于速愈素，扶正固本、免疫調(diào)節(jié)類藥食同源物質(zhì)的添加有其合理性和必要性[8]。