氣相色譜法同時測定復方丹參片中樟腦殘留量及冰片含量

劉 斌，李祥蘭，王曉曉，尹亞玲

（四川省德陽市食品藥品安全檢驗檢測中心，四川 德陽 618000）

復方丹參片組方中，冰片為佐使藥，有開竅醒神、清熱止痛功效，可引諸藥入心經(jīng)[1]。由于其具有揮發(fā)性，在加工與存儲過程中含量易下降[2]，且市售冰片與樟腦氣味相似，功效不同，價格差異較大，易被冒用。而藥典該品種項下只有冰片的鑒別而無含量測定項；原國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品檢驗項下補充檢驗方法和檢驗項目批準件（復方丹參片批準件編號為2008010，以下簡稱“批準件”），對樟腦殘留量進行了檢測；文獻[3]報道了毛細管氣相色譜法測定復方丹參片中冰片的含量。本研究中參考文獻[4-9]建立了同時測定上述兩指標的方法。由于冰片的主要成分是龍腦和異龍腦[10]，故以2種成分含量之和來判斷冰片的含量[11]?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀、7693型進樣器、氫火焰離子化檢測器（FID)(美國安捷倫公司）；SPH-300A型氫氣發(fā)生器、SPB-3全自動空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；XS205型電子天平（梅特勒-托利多儀器<上海>有限公司）；KQ-700DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

樟腦對照品（批號為 110747-201409，含量為98.7%）、龍腦對照品（批號為110881-201709，含量為99.6%）、異龍腦對照品（批號為111512-201603，含量為96.7%），均購于中國食品藥品檢定研究院；水為純化水，無水乙醇和乙醇均為分析純（成都市科隆化學品有限公司）；復方丹參片樣品均來自2018年四川省食品藥品監(jiān)督管理局藥品評價性抽樣，詳見表1。

表1 復方丹參片樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent 17903-113I聚乙二醇-20 m毛細管色譜柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；溫度：進樣口為220℃，氣化室為250℃，F(xiàn)ID為 250℃；流速：載氣高純度氮氣為3 mL/min，氫氣為40 mL/min，空氣為400 mL/min，尾吹為 35 mL/min；柱溫：程序升溫，初始溫度為100℃，保持5 min，以10℃ /min的速率升溫至110℃，保持5 min，再以相同速率升溫至160℃，保持 4 min；分流比為 5∶1。

2.2 溶液制備

對照品溶液：稱取樟腦、龍腦、異龍腦對照品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解，制成每1 mL含樟腦0.1 mg、龍腦0.3mg、異龍腦0.2mg的混合對照品溶液。

供試品溶液：取樣品10片，包衣片除去包衣，研細，取約60 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加入無水乙醇 8 mL，超聲（40 kHz，320 W）處理 30 min，放冷，加無水乙醇定容，搖勻，濾過，濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照溶液：按復方丹參片處方比例，配制缺冰片的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備，即得[12]。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2.2項下3種溶液各1 μL，按擬訂色譜條件分別進樣檢測，色譜圖見圖1。結(jié)果樟腦、龍腦和異龍腦對照品的理論板數(shù)分別為23 147，35 822，35 380，遠大于“批準件”規(guī)定的 5 000。供試品溶液色譜圖中，未檢出與樟腦對照品溶液保留時間相同的色譜峰，陰性對照品溶液色譜圖中在與龍腦和異龍腦相同保留時間處無干擾峰，表明該方法專屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密量取樟腦對照品溶液，龍腦、異龍腦混合對照品溶液各適量，分別置10 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋定容，搖勻。分別取1 μL注入氣相色譜儀，以待測成分質(zhì)量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程分別為Y1=3.045X1+0.997(r=0.9998，n=5）；Y2=2.930X2+0.633(r=0.9997，n=5）；Y3=3.188X3+0.723(r=0.999 6，n=5）。質(zhì)量濃度線性范圍分別為4.513～56.407 μg/mL，13.932～174.151 μg/mL，9.098 ～ 113.719 μg/mL。

精密度試驗：精密吸取2.2項下對照品溶液及混合對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件重復進樣6次，測定峰面積。結(jié)果樟腦、龍腦與異龍腦峰面積的RSD分別為0.87%，0.63%，0.30%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液（批號為161005），室溫下分別放置 0，4，8，12，16，20，24 h 時按擬訂色譜條件進樣，記錄峰面積。結(jié)果均未檢出樟腦，龍腦與異龍腦峰面積的RSD分別為1.85%和1.05%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置24 h穩(wěn)定。

重復性試驗：精密稱取同一批（批號為161005）樣品6份，按擬訂色譜條件測定，結(jié)果均未檢出樟腦，龍腦和異龍腦平均含量的RSD分別為1.40%和1.10%（n=6），表明該方法的重復性良好。

樟腦檢出限及定量限：取2.2項下對照品溶液和混合對照品溶液倍比稀釋，進行測定。當信噪比(S/N)為3∶1時，樟腦檢出限為0.187 6 mg/kg，當S/N為10∶1時，其定量限為0.746 6 mg/kg。

圖1 氣相色譜圖

回收率試驗：稱取已知樟腦、龍腦、異龍腦含量的樣品6份，精密稱定，分別精密加入樟腦、龍腦、異龍腦對照品適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結(jié)果見表2和表3。

表2 樟腦回收率試驗（n=6）

表3 龍腦、異龍腦加樣回收試驗（n=6）

2.4 樣品含量測定

取20批復方丹參片樣品粉末，各2份，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣，測定樣品含量[12]。結(jié)果見表4。

表4 復方丹參片中樟腦殘留量與冰片含量測定結(jié)果（mg/片）

3 討論

陳玉誼等[13]已對復方丹參片中冰片的2種提取方法——超聲提取法和回流提取法進行了比較[13]，但未對浸漬方法進行說明，為了更有效地提取制劑中的冰片，故采用超聲提取30 min和浸漬過夜方法進行比較，溶劑仍采用易溶解冰片的無水乙醇，結(jié)果顯示，2種提取方法樣品含量無顯著差異。為方便起見，采用超聲提取30 min的方法。

各廠家生產(chǎn)的復方丹參片內(nèi)在質(zhì)量參差不齊，參考楊建龍等[14]的方法測定復方丹參片中異龍腦和龍腦的含量。由于其法定標準中只規(guī)定了丹參的丹參酮ⅡA、丹酚酸B及三七的含量限度，未規(guī)定冰片的含量限度，導致不同廠家經(jīng)不同工藝生產(chǎn)出的產(chǎn)品中冰片含量差異較大，最低含量甚至不到理論含量的1/4，而按規(guī)定標準檢驗均符合規(guī)定。故若能控制冰片含量，則既能充分發(fā)揮其芳香走竄特性，又能減少寒涼特性對胃腸道的刺激[15]。建議對冰片的含量進行控制，嚴格監(jiān)管藥品生產(chǎn)企業(yè)關(guān)于冰片的投料和生產(chǎn)工藝，并采用氣相色譜法同時測定多家復方丹參片并進行比較，以保證其臨床用藥的有效性。