百合麥冬飲對血管內(nèi)皮細(xì)胞的代謝作用研究

摘 ?要：目的 百合麥冬飲配伍的對血清藥物在血管內(nèi)皮細(xì)胞代謝水平的作用研究。方法 采用脂多糖（LPS）作用內(nèi)皮細(xì)胞，分析百合麥冬飲藥物血清對內(nèi)皮素的代謝水平的影響。結(jié)果 百合麥冬飲血清可降低LPS導(dǎo)致的NO與ET-1的升高。結(jié)論 百合麥冬飲配伍可以平衡血管內(nèi)皮的滲透作用調(diào)節(jié)，對于預(yù)防和控制不良環(huán)境因素和職業(yè)因素引起的慢性阻塞性肺病的氣虛痰阻癥具有積極的作用。

關(guān)鍵詞：百合麥冬飲 ?藥物血清 ?血管內(nèi)皮細(xì)胞 ?一氧化氮 ?內(nèi)皮素

中圖分類號：R285 ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? ? ? ? 文章編號：1672-3791（2019）05（a）-0209-02

傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為氣虛傷陰可造成瘀血的產(chǎn)生，傷陰導(dǎo)致血脈枯涸，氣虛導(dǎo)致血行無力，因而引起瘀血。不良環(huán)境因素和職業(yè)因素引起的慢性阻塞性肺病符合中醫(yī)的氣虛血瘀痰阻證的特點(diǎn)，百合和麥冬是很好的養(yǎng)陰清益氣藥物，中醫(yī)臨床上多以養(yǎng)陰生津和益氣藥物來治療氣虛瘀血癥[1]。該實(shí)驗(yàn)觀察百合麥冬飲的藥物血清，對脂多糖（ LPS）造模損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）代謝參數(shù)（NO、 ET-1）的影響調(diào)節(jié)作用，探討治療氣虛瘀血所致的慢性阻塞性肺病的干預(yù)機(jī)制。

1 ?材料與方法

1.1 試劑與儀器

RPMI-1640培養(yǎng)基（GIBCO，USA）;胰蛋白酶（MERCK，USA）;一氧化氮（NO）檢測試劑（南京聚力生物）;內(nèi)皮素（ET）檢測試劑（ELISA北京福瑞生物）; 酶標(biāo)儀（BIO-RAD公司580型，USA）[1]。

1.2 藥物及血清的制備

百合、麥冬購自西安市醫(yī)藥公司，新西蘭種家兔，基礎(chǔ)直腸體溫38.8℃～39.5℃，體重2.2～2.6kg;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，實(shí)驗(yàn)動物合格證號：醫(yī)動字第08-018。

實(shí)驗(yàn)分組為全藥組（百合15g+麥冬15g）、百合組（百合 15g）、麥冬組（麥冬15g），同時設(shè)正常對照組和造模組。

水煎劑制備方法： 以參考文獻(xiàn)方法，稱取各組藥物量，加入蒸餾水回流提取2次濾液，濃縮使煎劑最終濃度含生藥0.14g/mL。

藥物血清制備：以參考文獻(xiàn)的方法[2]，新西蘭家兔16只，其中全藥組、百合組、麥冬組和正常對照組各4只。各藥物組用水煎劑（4.2g/kg）每天灌胃;正常對照組用生理鹽水，各組共灌胃3d后家兔采血，離心后，分離血清，過濾除菌凍存。各組的藥物血清1.5mL加入8.5mLDMEM培養(yǎng)液，得到15%藥物血清培養(yǎng)液?？瞻捉M血清以同樣方法制備。

造模：用25μg/mL的脂多糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）刺激造模。

1.3 血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）代謝參數(shù)測定

ET的測定：各組用藥物作用12h，取上清液1.5mL加入25μL10%的EDTANa2和40μL（400U）的抑肽酶，混勻后3000r/min離心10min，取上清，-80℃保存?zhèn)溆谩?yīng)用放射免疫法測定ET含量。

NO測定：各組藥物作用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）培養(yǎng)12h后取上清液，按試劑盒說明進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用PASS軟件分析數(shù)據(jù)。采用t檢驗(yàn)分析顯著性差異。

2 ?結(jié)果

2.1 藥物血清對NO活性的影響

如表1所示，各用藥組培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）12h后，測定結(jié)果顯示，與對照組相比，LPS可使VEC上清液中NO指標(biāo)升高（P<0.01）;與造模組相比，百合麥冬各藥物血清組對LPS所致NO水平的升高有不同程度的下調(diào)（P<0.05）。

2.2 藥物血清對ET-1的分泌的影響

如表2所示，各用藥組培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞12h后，結(jié)果顯示，LPS可使HUVEC上清液中ET指標(biāo)升高（P<0.01），百合麥冬各組藥物血清干預(yù)后，與造模組相比各組細(xì)胞對LPS作用后的ET指標(biāo)均有下調(diào)（P<0.05）。其中百合組有非常顯著性差異。

3 ?討論

3.1 血清藥物與中藥直接作用的效果分析

該實(shí)驗(yàn)引入血清藥理學(xué)方法，體外研究百合麥冬飲對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響作用。血清藥理學(xué)方法用于中藥干預(yù)治療氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病有如下優(yōu)點(diǎn)：采用含有中藥湯劑的動物血清培養(yǎng)細(xì)胞可以直接觀察中藥的藥物學(xué)效應(yīng);便于觀察和追蹤藥物的代謝和吸收情況，去除體外實(shí)驗(yàn)各種干擾因素的影響;為建立中藥復(fù)方的藥動—藥效結(jié)合模型提供了客觀依據(jù)[1]。而中藥直接使用的缺點(diǎn)在于：直接加入體外培養(yǎng)細(xì)胞系，往往由于中藥復(fù)方中較多的雜質(zhì)成分、酸堿度、滲透壓等影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果[2]。因此，藥物血清法相對可靠性，能較為客觀真實(shí)地闡明中藥的藥效計量和作用機(jī)制，可以從一定角度揭示中藥和復(fù)方在胃腸內(nèi)代謝過程中活性成分的轉(zhuǎn)化和改變。

3.2 中藥養(yǎng)陰益氣類藥物對氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病干預(yù)分析

血瘀癥是諸多疾病中的一個重要癥候，其病理變化是血脈中血液的正常循環(huán)流動狀態(tài)發(fā)生改變[3]，血管內(nèi)皮細(xì)胞可因多種因素作用而受到損傷，如我們造模采用的脂多糖LPS等。通常機(jī)體的內(nèi)分泌細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞自分泌或旁分泌作用產(chǎn)生的高效縮血管因子ET-1與舒血管因子 NO之間保持著一定的動態(tài)平衡，與其他因子一起在維持血管張力、調(diào)節(jié)內(nèi)皮通透性，建立了內(nèi)環(huán)境的氣血平衡體系。一旦失衡，各種細(xì)胞釋放趨化因子、生長因子、粘附因子，導(dǎo)致血瘀癥的形成，也是造成氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病的原因之一。

綜上，百合麥冬飲在抑制NO和ET-1升高的同時，維持VEC的正常生理功能和動態(tài)平衡，在血瘀癥的治療和緩解氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病的進(jìn)程中起到積極的干預(yù)作用，可以有效應(yīng)對與控制血瘀癥的形成與發(fā)生，對于預(yù)防和治療因環(huán)境因素導(dǎo)致的氣虛瘀血性慢性阻塞性肺病具有積極的作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 仲浩，吳德芹，周晶，等.養(yǎng)陰益氣活血方藥對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J].藥學(xué)與臨床研究，2013，21（3）：244-246.

[2] 張旭，李國春，許冬青，等.養(yǎng)陰益氣活血方藥抗VEC凋亡的研究[A].2006國際傳統(tǒng)醫(yī)藥創(chuàng)新與發(fā)展態(tài)勢論壇[C].2006：131-133.

[3] Fung YC，Liu SQ.Elementary mechanics of the endothelium of blood vessels[J].Biomech Eng，1993，115（1）：1-12.