膽木浸膏糖漿的HPLC指紋圖譜研究和9種成分的含量測定Δ

劉歡，于鑫淼，王月，王佳月，呂星，侯麗娟，林紫薇，孫立新#（.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧本溪7004；.本溪市高級(jí)中學(xué)07級(jí)，遼寧本溪 7000）

膽木又名烏檀、熊膽樹，為茜草科烏檀屬植物烏檀[Nauclea officinalis（Pierre ex Pitard）Merr.et Chun]的干燥枝干、根及樹皮[1]。該藥味苦、性寒，在《常用中草藥手冊》《全國中草藥匯編》等書籍均有收載，1977年版《中國藥典》（一部）也有收錄。海南黎族人將膽木作為民間常用草藥用于咽喉炎、感冒發(fā)熱、支氣管炎、急性扁桃體炎等疾病的治療[1-3]。膽木浸膏糖漿由膽木單味藥材開發(fā)研制而成，具有消腫止痛、清熱解毒等功效，臨床常用于治療小兒感冒發(fā)熱[4]、小兒毛細(xì)支氣管炎[5]、小兒中耳炎[6]、咽喉炎[7]、急性扁桃體炎[8]等疾病。膽木主要含有生物堿類化合物，也是膽木浸膏糖漿發(fā)揮療效的主要藥效組分[9-12]。沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院孫立新教授課題組對(duì)膽木浸膏糖漿化學(xué)成分進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，除了分離鑒定出短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺和喜果苷等具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎活性的生物堿類成分外，還從中鑒定出了原兒茶酸、綠原酸、馬錢苷酸等酚酸類化合物和屬于環(huán)烯醚萜類化合物的獐牙菜苷[13]。酚酸類化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌等生物活性，獐牙菜苷具有抑菌、解熱作用[13-15]，這些酚酸類化合物和環(huán)烯醚萜類化合物很可能是膽木浸膏糖漿中除生物堿類成分外發(fā)揮臨床療效的重要成分。

目前有關(guān)膽木浸膏糖漿的藥理作用及其臨床應(yīng)用[4-8]的研究較多，但是對(duì)其質(zhì)量控制研究較少，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[16]在含量測定項(xiàng)下要求該制劑總黃酮以無水蘆丁計(jì)，不得少于2.2 mg/mL，尚不足以全面評(píng)價(jià)膽木浸膏糖漿的質(zhì)量。為此，本研究建立了膽木浸膏糖漿的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，并測定其中原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺和喜果苷共9種成分的含量，以期為膽木浸膏糖漿的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G7111A 1260 Quaternary Pump VL型四元泵、G7115A 1260 WR型二極管陣列檢測器（DAD）、G7129A 1260 Vialsampler型進(jìn)樣器（美國Agilent公司）；TG332A型微量分析天平（湘儀天平儀器設(shè)備有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；PB-10標(biāo)準(zhǔn)型pH計(jì)（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

膽木浸膏糖漿共20批（批號(hào)分別為20161201、20161202 、20161203、20161204、20170101、20170102、20170103、20170506、20170603、20171002、12171102、13171001、12180101、12180102、12180102、13180102、13180103、13171102、13170903、11180307，分別編號(hào)為S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10、S11、S12、S13、S14、S15、S16、S17、S18、S19、S20，規(guī)格：10 mL/支）均購自海南森祺制藥有限公司；原兒茶酸對(duì)照品（批號(hào)：Y-031-161227，純度：99.07%）、綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：L-007-171216，純度：99.69%）、馬錢苷酸對(duì)照品（批號(hào)：M-008-180102，純度：99.36%）、隱綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：Y-067-180425，純度：99.57%）、新綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：X-014-180410，純度：99.83%）均購自成都瑞芬思生物科技有限公司；獐牙菜苷對(duì)照品（批號(hào)：20151208，純度：98%）購自寶雞市辰光生物科技有限公司；短小蛇根草苷對(duì)照品（批號(hào)：20171025，純度：98.3%）、異長春花苷內(nèi)酰胺對(duì)照品（批號(hào)：20180710，純度：99.9%）、喜果苷對(duì)照品（批號(hào)：20180615，純度：98.6%）均由沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院藥物分析實(shí)驗(yàn)室自制；磷酸、乙腈、甲醇均為色譜純，二氯甲烷、正丁醇均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，6%A→9%A；10～25 min，9%A；25～30 min，9%A→14%A；30～40 min，14%A→22%A；40～45 min，22%A；45～50 min，22%A→34%A；50～60 min，34%A；60～65 min，34%A→6%A）；柱溫：30℃；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。在上述色譜條件下，取“2.2.1”“2.2.2”“2.2.3”項(xiàng)下溶液進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備液 取原兒茶酸對(duì)照品、新綠原酸對(duì)照品、馬錢苷酸對(duì)照品、綠原酸對(duì)照品、隱綠原酸對(duì)照品、獐牙菜苷對(duì)照品、短小蛇根草苷對(duì)照品、異長春花苷內(nèi)酰胺對(duì)照品、喜果苷對(duì)照品各適量，置于5 mL量瓶中，用10%甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度分別為 862.0、378.0、770.0、392.0、432.0、398.0、420.0、2 428.0、208.0 μg/mL的混合對(duì)照品貯備液，4℃保存，備用。

2.2.2 供試品溶液 精密量取膽木糖漿劑1 mL，置于5mL量瓶中，以水稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按樣品的制備工藝和配方比例，制備缺膽木藥材的陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成缺膽木藥材的陰性對(duì)照溶液。

2.3 指紋圖譜的建立

2.3.1 參考峰的選擇 根據(jù)圖1B可以看出，24號(hào)峰在圖譜中所占的比例較大，與相鄰色譜峰的分離度良好，符合參考峰要求，因此選擇其為膽木浸膏糖漿HPLC指紋圖譜的參考峰。以24號(hào)峰為參考峰，分別計(jì)算其他峰相對(duì)于24號(hào)峰的相對(duì)保留時(shí)間（RRT）與相對(duì)峰面積（RPA），并以RRT與RPA為指標(biāo)進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液（編號(hào)：S5）1 mL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各共有峰的RRT和RPA。結(jié)果，各共有峰RRT的RSD均小于1.1%（n＝6），RPA的RSD均小于2.7%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（編號(hào)：S5）1 mL，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄各共有峰的RRT和RPA。結(jié)果，各共有峰RRT的RSD均小于1.2%（n＝6），RPA的RSD均小于2.9%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 量取膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）各1mL，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣分析，記錄各共有峰的RRT和RPA。結(jié)果，各共有峰RRT的RSD均小于0.76%（n＝6），RPA的RSD均小于2.8%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖Fig1 HPLC chromatograms

2.3.5 不同批次膽木浸膏糖漿的指紋圖譜測定與相似度分析 （1）HPLC指紋圖譜的生成。精密量取20批膽木浸膏糖漿樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版）對(duì)20批膽木浸膏糖漿的HPLC圖譜進(jìn)行分析，得HPLC指紋圖譜，詳見圖2、圖3。（2）共有峰的確定與歸屬。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版）建立共有模式，繪制對(duì)照指紋圖譜。通過與對(duì)照?qǐng)D譜比對(duì)，共標(biāo)定出26個(gè)共有峰。（3）相似度分析。將20批樣品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，得到各個(gè)指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度均大于0.98，詳見表1。

2.4 含量測定方法的建立

圖2 20批樣品的HPLC疊加指紋圖譜Fig 2 HPLC superimposed fingerprints of 20 batches of samples

圖3 對(duì)照指紋圖譜Fig 3 Referential fingerprint

2.4.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 根據(jù)圖1所示，供試品色譜峰與對(duì)照品各待測物色譜峰的保留時(shí)間基本一致，且指標(biāo)成分在各自對(duì)應(yīng)的位置無干擾，表明該方法專屬性良好。所有組分于60 min內(nèi)檢測完畢。在該色譜條件下，各個(gè)被測成分之間、被測成分與雜質(zhì)峰之間得到分離，9種成分的分離度均大于1.5，理論板數(shù)以異長春花苷內(nèi)酰胺峰計(jì)大于10 000。

2.4.2 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL，置于 5 mL 量瓶中，用10%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度的混合對(duì)照品溶液。分別取上述混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以待測物質(zhì)量濃度（x，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得各待測物的回歸方程。將對(duì)照品貯備液逐級(jí)稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算各物質(zhì)檢測限（信噪比為3∶1）及定量限（信噪比為10∶1），結(jié)果見表2。

表1 相似度分析結(jié)果Tab 1 Results of similarity analysis

2.4.3 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷峰面積的RSD分別為0.55%、1.2%、0.34%、0.44%、0.21%、0.23%、0.23%、0.22%、0.67%（n＝6），表明儀器精密度良好。

表2 9種待測成分的線性范圍及檢測限、定量限Tab 2 Linear and ranges，detection limits and quantification limits of 9 compounds

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（編號(hào)：S5），分別于室溫下放置0、2、4、6、8、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷峰面積RSD分別為0.81%、1.70%、1.20%、0.60%、0.63%、0.85%、1.30%、0.88%、0.99%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）6份，每份1 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷的平均含量分別為479.9、312.8、291.6、258.1、174.1、114.7、125.5、1 768.9、58.4 μg/mL，RSD 分別為0.35%、1.10%、1.70%、0.84%、1.50%、1.50%、1.70%、1.40%、1.30%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）6份，每份0.5 mL。分別加入一定質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液（約相當(dāng)于膽木浸膏糖漿中各成分原有質(zhì)量的100%），按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷的平均加樣回收率分別為99.6%、106.3%、100.1% 、102.0% 、98.4% 、100.0% 、99.3% 、100.6% 、101.2%，RSD分別為1.20%、0.24%、0.59%、1.00%、0.73%、1.30%、1.10%、1.80%、1.90%（n＝6）。

2.4.7 耐用性試驗(yàn) （1）色譜柱的考察。精密量取膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）3份，每份1 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別采用Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Diamonsil C18（1）（200 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱進(jìn)樣分析，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷的平均含量分別為476.8、309.6、291.0、257.0、177.5、115.5、126.1、1 765.5、57.9 μg/mL，RSD 分別為0.91%、1.08%、0.97%、0.98%、1.09%、1.28%、0.92%、0.27%、1.29%（n＝3）。（2）流動(dòng)相中磷酸加入比例的考察。精密量取膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）3份，每份1 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別以乙腈-0.08%磷酸水溶液、乙腈-0.10%磷酸水溶液、乙腈-0.12%磷酸水溶液為流動(dòng)相，按“2.1”項(xiàng)下梯度洗脫程序進(jìn)樣分析，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷的平均含量分別為 477.1、308.9、290.1、258.0、176.1、115.1、124.5、1 763.4、57.9 μg/mL，RSD分別為0.62%、0.94%、0.76%、0.65%、1.40%、1.18%、1.60%、0.40%、1.68%（n＝3）。（3）柱溫的考察。精密量取膽木浸膏糖漿（編號(hào)：S5）3份，每份1mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別將柱溫設(shè)置為28℃、30℃、32℃，再按“2.1”項(xiàng)下其余色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷的平均含量分別為 476.6、312.6、288.2、257.9、176.8、114.7、125.0、1 766.0、58.3 μg/mL，RSD 分別為 0.74%、0.78%、0.98%、0.70%、0.97%、0.67%、0.76%、0.25%、1.60%（n＝3）。

2.4.8 樣品含量測定 取20批次膽木浸膏糖漿樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下平行制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺、喜果苷含量，結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 波長的選擇 文獻(xiàn)[17-19]報(bào)道，膽木及其制劑中生物堿類化學(xué)成分多在222、227 nm波長處檢測。本試驗(yàn)通過DAD優(yōu)選檢測波長，主要考察了在226、240、250nm波長處膽木浸膏糖漿各待測物的色譜行為。結(jié)果顯示在240 nm波長處，色譜圖中色譜峰數(shù)較多、峰形較好，故本研究測定波長選擇240 nm。

3.1.2 流動(dòng)相的選擇 筆者前期分別對(duì)乙腈-水、甲醇-水、乙腈-三乙胺磷酸水溶液、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液等體系進(jìn)行了梯度洗脫試驗(yàn)。結(jié)果表明，以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，所得色譜圖基線更平穩(wěn)，各色譜峰的分離效果最好，故本研究流動(dòng)相選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液。

3.1.3 柱溫的選擇 筆者前期分別對(duì)28、30、32、35℃等4種不同的柱溫進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，30℃時(shí)峰形最佳且分離度良好，故本研究柱溫選擇30℃。

3.2 供試品制備方法的考察

筆者前期分別考察了乙醇加熱回流法、乙醇超聲提取法、甲醇超聲提取法和水飽和正丁醇超聲萃取法和水直接溶解法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用水溶解，不損失糖漿劑中的各種成分，且專屬性良好，因此本研究選擇水溶解法作為樣品前處理方法。

表3 9種化合物含量測定結(jié)果（±s，n＝3，μg/mL）Tab 3 Results of content determination of 9 kinds of compounds（±s，n＝3，μg/mL）

表3 9種化合物含量測定結(jié)果（±s，n＝3，μg/mL）Tab 3 Results of content determination of 9 kinds of compounds（±s，n＝3，μg/mL）

編號(hào)S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20原兒茶酸373.2±4.2 533.2±0.3 673.1±1.0 317.5±4.0 477.6±0.8 407.5±0.2 516.3±1.4 410.3±0.5 256.6±0.8 250.7±0.9 437.8±1.0 373.3±1.1 133.8±0.6 253.3±2.3 349.4±1.4 293.7±3.8 519.2±9.0 222.4±2.0 636.5±2.5 333.7±0.3新綠原酸356.2±4.3 433.3±0.8 313.4±1.1 273.7±1.8 310.6±1.0 264.9±0.2 247.8±0.3 216.4±1.0 158.8±0.3 95.0±0.1 276.1±0.8 46.2±0.4 222.0±1.6 240.9±2.1 297.5±0.7 282.6±1.9 247.7±0.4 42.2±0.2 145.1±0.4 256.7±1.1馬錢苷酸376.0±1.0 432.3±0.4 373.9±2.9 212.5±2.0 289.6±3.2 258.6±2.0 217.9±1.0 224.5±0.3 199.0±0.2 111.3±0.3 341.9±0.5 99.3±0.5 148.6±0.6 217.1±1.0 169.6±2.2 245.9±3.4 181.0±2.5 126.6±1.6 120.3±0.3 402.5±0.5綠原酸294.9±2.6 362.5±0.4 266.3±0 227.7±0.2 258.5±0.8 221.0±0.2 206.4±1.3 185.7±0.3 142.5±0.9 91.7±0.1 230.7±1.0 43.4±0.5 186.1±0.9 204.4±2.5 252.6±1.0 245.7±1.6 214.7±1.9 46.9±0.4 115.8±0.9 225.8±1.5隱綠原酸200.6±0.7 241.3±1.1 178.4±3.0 152.2±0.1 177.3±1.2 147.4±0.8 137.0±1.1 119.6±0.5 88.0±1.1 50.1±0.3 160.7±0.4 45.9±0.3 119.6±1.5 134.3±1.1 163.5±0.7 154.2±2.3 134.1±1.8 37.6±0.2 76.9±0.4 141.8±0.3獐牙菜苷55.2±0.3 63.6±0.8 108.8±0.5 103.8±0.7 114.3±1.7 122.7±1.2 132.5±1.8 85.0±1.3 99.0±0.8 74.8±0.5 115.2±1.1 42.6±0.5 134.3±1.4 130.0±0.6 88.2±0.2 100.2±0.5 128.8±0.2 55.4±0.9 98.9±0.1 125.6±1.1短小蛇根草苷113.3±1.2 128.3±0.6 177.3±1.8 179.4±2.1 125.5±1.9 127.2±0.2 130.2±0.6 160.5±2.2 164.3±0.8 180.0±0.4 172.1±0.6 220.4±3.5 162.0±1.1 183.0±2.3 160.4±2.2 166.2±0.7 170.2±2.5 253.3±2.0 210.0±2.2 145.0±0.4異長春花苷內(nèi)酰胺1 830.6±33.5 2 037.8±6.8 2 483.7±6.3 2 194.5±4.3 1 766.4±20.9 1 909.3±0.7 1 920.9±0.7 2 408.1±3.9 2 229.8±6.9 2 202.6±2.4 2 655.8±5.0 2 095.7±4.0 1 991.9±4.5 2 235.9±11.4 2 210.3±2.2 2 340.8±14.2 1 992.3±5.1 2 102.0±1.9 1 875.5±2.1 1 532.5±3.0喜果苷52.2±0.1 68.8±0.8 73.1±1.1 64.1±0.4 58.7±1.0 68.2±0.6 63.8±0.7 72.8±0.7 87.3±0.9 59.0±0.3 65.0±0.6 70.1±0.1 54.9±0.3 62.9±0.3 53.7±0.2 61.0±0.6 58.3±0.3 63.9±0.5 69.6±0.4 68.7±0.3

3.3 指紋圖譜與含量測定結(jié)果分析

本研究在指紋圖譜分析中發(fā)現(xiàn)26個(gè)共有峰，通過與混合對(duì)照品比對(duì)，共指認(rèn)出其中9個(gè)化合物，分別為原兒茶酸、新綠原酸、馬錢苷酸、綠原酸、隱綠原酸、獐牙菜苷、短小蛇根草苷、異長春花苷內(nèi)酰胺和喜果苷。為考察膽木浸膏糖漿質(zhì)量，本研究建立了這9種成分含量測定方法，并對(duì)20批膽木浸膏糖漿進(jìn)行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本試驗(yàn)建立的HPLC指紋圖譜和含量測定法，方法準(zhǔn)確、專屬、靈敏。

綜上所述，本研究所建立的膽木浸膏糖漿HPLC指紋圖譜和定量測定方法分析準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、靈敏度高，可以為膽木浸膏糖漿的質(zhì)量控制提供可靠方法。