尿微量白蛋白檢測試劑盒性能評價

胡 芳，尚小玲，馮 琴，戴海英，汪宏良

［鄂東醫(yī)療集團黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學院附屬醫(yī)院）醫(yī)學檢驗科，湖北 黃石435000］

尿微量白蛋白（microalbuminuria，mALB）是一種帶負電的小分子蛋白，分子量為69kD。正常狀態(tài)下很難通過腎小球基底膜，只有少量的白蛋白可以通過［1］。當腎小球出現(xiàn)損傷時，尿中mALB水平會升高。mALB是腎臟早期損害的一個非常敏感的指標，對高血壓糖尿病等腎病具有重要的臨床參考價值，在診斷早期或輕微腎臟損害方面具有重要的提示作用。本文旨在評價北京九強生物的尿微量白蛋白（mALB）免疫比濁法試劑盒各性能能否滿足臨床需求。

材料和方法

1 儀器與試劑

羅氏Cobas8000全自動生化分析儀，北京九強mALB試劑盒以及配套校準品和質(zhì)控品，羅氏mALB檢測試劑盒（169398-01）及其配套校準、質(zhì)控品。

2 檢測方法

按照儀器及試劑盒說明書，用配套校準品對北京九強及羅氏試劑盒進行定標，檢測各自質(zhì)控品，使結(jié)果處于靶值允許偏差范圍內(nèi)，以備進行后續(xù)實驗。

3 評價方案

3.1 精密度 參考NCCLSEP5-A2文件［2］，同一天內(nèi)連續(xù)測量高、低質(zhì)控品20次，分別計算均值、標準偏差（SD）和變異系數(shù)（CV）。準備高、低質(zhì)控品各1份，在同一天上下午將兩水平質(zhì)控品各測兩次，連續(xù)測定20 d，分別計算其均值、SD和CV。對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，評價日間不精密度。參考廠家說明書標準，判斷標準＜10%。

3.2 準確度 選取90例患者清晨潔凈中段尿樣本，在羅氏Cobas8000全自動生化分析儀上使用北京九強及羅氏mALB試劑盒檢測，統(tǒng)計數(shù)據(jù)做相關(guān)圖，計算線性回歸方程。

3.3 線性范圍 參考NCCLS EP6-A文件要求［3］，取高濃度樣本（接近線性最高點400 mg/L）、低濃度樣本各一份，按照10/10，9/10……1/10，1/20，1/40，1/80稀釋，重復測定3次，計算每點均值作為Y軸，以理論值為X軸，做散點圖并進行直線回歸分析。

3.4 最大稀釋倍數(shù) 取線性最高點附近400 mg/L樣本1例，用純化水稀釋2倍、5倍、10倍、20倍、40倍、80倍以及純化水。理論值與實測值進行相對偏倚計算。

3.5 前帶性能 稱取固體純品配制成高值樣本，作為前帶實驗最高點，按照不同比例稀釋得到不同濃度水平樣本，每個樣本測3遍。每個水平的理論值根據(jù)最低點實測值計算得到。

3.6 特異性 按照說明書標示的干擾物質(zhì)及濃度進行抗干擾實驗，每種干擾物質(zhì)最高濃度為：VC濃度4g/L，DB濃度250mg/L，GLU濃度40g/L，KCl濃度10g/L，NaCl濃度20g/L，UREA濃度40g/L。并取高濃度（100mg/L）、低濃度（40mg/L）尿液樣本各1份，將每個干擾物質(zhì)配制成最高濃度的10倍濃度的母液，將各母液與尿液樣本按照1：9比例進行混合，用水與樣本比例1：9作為空白對照，每個樣本測3次，計算回收率。

4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學分析。

結(jié) 果

1 精密度

檢測北京九強mALB試劑盒其配套高、低水平質(zhì)控品的日內(nèi)不精密度分別為0.61%和0.70%，日間不精密度為1.83%和2.95%，高、低水平質(zhì)控品的濃度分別為169.45mg/L和43.71mg/L（靶值允許偏差在20%內(nèi)）。

2 準確度

北京九強與羅氏mALB試劑盒90例樣本結(jié)果對比：相關(guān)性方程為Y＝1.0169X+5.7251，相關(guān)系數(shù)r＝0.9987，兩試劑檢測值結(jié)果的偏倚為1.051mg/L。結(jié)果表明，樣本檢測值無明顯偏差，兩試劑盒相關(guān)性良好。

3 線性范圍

從線性結(jié)果來看，理論值與實測值相關(guān)性良好，在樣本濃度0～400 mg/L范圍內(nèi)，回歸方程為Y＝423.79X+1.0808，相關(guān)系數(shù)r＝0.9998，結(jié)果呈線性。

4 最大稀釋倍數(shù)

按照稀釋方法稀釋后得到的結(jié)果如表1所示，在進行40倍稀釋時，回收率在90%～110%范圍內(nèi)，符合判定標準，臨床可報告范圍上限為16000mg/L。

表1 最大稀釋倍數(shù)實驗結(jié)果

5 前帶性能

在樣本濃度小于550mg/L時，實測濃度和理論濃度基本一致。隨著樣本濃度升高，并在2178.1mg/L處出現(xiàn)拐點，表明開始出現(xiàn)前帶反應(yīng)。但是當樣本濃度升高至43000mg/L時，檢測結(jié)果仍在線性范圍（400mg/L）以外。具體結(jié)果見表2。本實驗結(jié)果，說明在臨床中能夠避免高值樣本出現(xiàn)假陰結(jié)果的情況。在臨床應(yīng)用中，檢測結(jié)果大于線性上限時建議對樣本進行稀釋復測，確定樣本的真實濃度。

表2 前帶性能結(jié)果

6 特異性

抗干擾實驗結(jié)果表明，說明書中6個干擾物的添加濃度均未對檢測結(jié)果出現(xiàn)干擾，各點回收率均在90%～110%標準范圍內(nèi)。

表3 特異性實驗結(jié)果

討 論

尿微量白蛋白的檢測是臨床的一個重要指標，病理性增高見于糖尿病、高血壓、早期妊高癥。檢測尿中早期出現(xiàn)的mALB有利于早期發(fā)現(xiàn)腎臟損傷并進行干預，在腎臟損害尚處在可逆轉(zhuǎn)的時期及時進行治療［4-5］；對妊娠婦女的尿微量白蛋白和血清白蛋白檢測，能夠及早發(fā)現(xiàn)妊高癥［6］。有研究表明，mALB檢測對高血壓和糖尿病腎病的早期發(fā)現(xiàn)與治療有重要意義，尿微量白蛋白在單純高血壓/單純糖尿病和高血壓合并糖尿病時，已有明顯升高；當發(fā)展到糖尿病腎病時，尿mALB即已遠遠高于健康對照組，其檢測靈敏度高于尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）［7］。

目前測定mALB的方法有：放射免疫法、免疫比濁法、ELISA法、化學發(fā)光法等。其中，放射免疫法應(yīng)用最早，是公認的mALB檢測的金標準；但是此方法使用的儀器較貴且存在放射性污染等問題，在臨床應(yīng)用中具有很大的局限性［8］。ELISA方法成本低，但是操作繁瑣、影響結(jié)果的因素較多、結(jié)果重現(xiàn)性差等問題也制約著在臨床中的應(yīng)用?；瘜W發(fā)光法是近年來使用較多的方法，其優(yōu)點是靈敏度和準確度較好，但缺點是成本較貴。免疫透射比濁法具有操作簡單、檢測速度快、結(jié)果重現(xiàn)性好等優(yōu)勢，在臨床應(yīng)用中有明顯優(yōu)勢。北京九強mALB檢測試劑盒性能的評價結(jié)果顯示，該試劑盒精密度好、準確度高、線性范圍寬、前帶性能好，在全自動生化上能滿足臨床檢測的需求。