AU5821全自動(dòng)生化分析儀試劑間交叉污染對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響的探討

丁修冬，周園園，沙立娜，梅 雪，金兆佳，周南南，王汝微，雷 紅

（1.解放軍309醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100091；2.國(guó)防大學(xué)醫(yī)院，北京100091；3.兵器工業(yè)北京北方醫(yī)院，北京100089）

全自動(dòng)生化分析儀的優(yōu)點(diǎn)在于加樣微量、檢測(cè)快速、精密度和準(zhǔn)確度高及自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，但在實(shí)際工作中，偶爾會(huì)發(fā)生生化分析儀的加樣針、試劑針、比色杯及攪拌棒等易引起交叉污染的現(xiàn)象?，F(xiàn)將筆者實(shí)際工作中遇到的兩例即多個(gè)項(xiàng)目同時(shí)檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)的TBA、TG異常增高的現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)復(fù)查后結(jié)果正常，說(shuō)明有些測(cè)試項(xiàng)目對(duì)TBA及TG的檢測(cè)存在交叉污染，文獻(xiàn)資料也提示全自動(dòng)生化分析儀普遍存在交叉污染現(xiàn)象［1-2］，經(jīng)過(guò)分析認(rèn)為最有可能是IgE、GSP、CK、RBP的試劑對(duì)TBA以及CR、TBIL、Hcy、HDL的試劑對(duì)TG存在交叉污染。為了尋找問(wèn)題的原因，作者設(shè)計(jì)了一下試驗(yàn)并采取了措施防止問(wèn)題的再次發(fā)生。

材料與方法

1 儀器與試劑

儀器為貝克曼AU5821全自動(dòng)生化分析儀，試劑中甘油三酯、肌酸激酶、肌酐、總膽紅素、高密度脂蛋白膽固醇由貝克曼公司提供；同型半胱氨酸、總膽汁酸、糖化血清蛋白試劑由九強(qiáng)公司提供；視黃醇結(jié)合蛋白、免疫球蛋白E試劑由森美希格瑪公司提供。

2 混合血清

取當(dāng)天本院20份正常體檢者血清混合備用。

3 方法

3.1 參數(shù)設(shè)定 各檢測(cè)項(xiàng)目按試劑生產(chǎn)廠家提供的參數(shù)進(jìn)行設(shè)定。

3.2 對(duì)照組 連續(xù)檢測(cè)混合血清TBA及TG各20次，計(jì)算TBA及TG的均值作為參考值。

3.3 檢測(cè)順序

（1）按IgE→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、GSP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、CK→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA、RBP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA的順序檢測(cè)，每組項(xiàng)目重復(fù)檢測(cè)20次，進(jìn)行計(jì)算。

（2）按CR→TG→TG→TG→TG→TG、TBIL→TG→TG→TG→TG→TG、Hcy→TG→TG→TG→TG→TG、HDL→TG→TG→TG→TG→TG的順序檢測(cè)，每組項(xiàng)目重復(fù)檢測(cè)20次，進(jìn)行計(jì)算。

（3）改變TBA及TG檢測(cè)時(shí)使用的比色杯，即將

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

檢測(cè)結(jié)果用±s表示，應(yīng)用PEMS3.1統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)不同測(cè)量方法結(jié)果進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用t’檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 IgE、GSP、CK、RBP試劑對(duì)TBA直接干擾

分別檢測(cè)混合血清中IgE、GSP、CK、RBP后進(jìn)行5批次TBA的測(cè)定，每批重復(fù)檢測(cè)20次取其均值（表1、表2）。

表1 測(cè)混合血清中IgE、GSP、CK、RBP后進(jìn)行5批次TBA的測(cè)定

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.01

表2 測(cè)混合血清中RBP后第一批進(jìn)行20次TBA的測(cè)定

2 CR、TBIL、Hcy、HDL試劑對(duì)TG直接干擾

分別檢測(cè)混合血清中CR、TBIL、Hcy、HDL后進(jìn)行5批次TG的測(cè)定，每批重復(fù)檢測(cè)20次取其均值（表3）。

表3 檢測(cè)混合血清中CR、TBIL、Hcy、HDL后進(jìn)行5批次TG的測(cè)定

3 擾的檢測(cè)項(xiàng)目分在不同單元后再檢測(cè)混合血清5批次測(cè)定

將存在干擾的檢測(cè)項(xiàng)目分在不同單元后后再RBP→TBA→TBA→TBA→TBA→TBA檢測(cè)、Hcy→TG→TG→TG→TG→TG檢測(cè)，每批重復(fù)檢測(cè)20次取其均值（表4）。

表4 干擾的檢測(cè)項(xiàng)目分在不同單元后再檢測(cè)混合血清5批次測(cè)定

討 論

隨著當(dāng)今世界科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，自動(dòng)生化分析儀給我們工作帶來(lái)方便同時(shí)也產(chǎn)生了交叉污染的新問(wèn)題，主要是由于樣本針、試劑針、攪拌棒等的交叉污染。我們實(shí)驗(yàn)室新引進(jìn)了兩臺(tái)AU5821全自動(dòng)生化分析儀部分全自動(dòng)生化分析儀在檢測(cè)過(guò)程中吸取不同樣本與試劑后，樣本針和試劑針僅用去離子水進(jìn)行沖洗，很難完全清洗干凈，如果前一樣本某項(xiàng)待檢測(cè)物含量較高，或前一檢測(cè)項(xiàng)目試劑中含有后一檢測(cè)項(xiàng)目的成分，或含有對(duì)后一檢測(cè)項(xiàng)目有干擾的物質(zhì)時(shí)，就會(huì)不可避免地會(huì)產(chǎn)生攜帶污染的問(wèn)題［3］。由于我科剛剛搬入新實(shí)驗(yàn)室并且購(gòu)置了貝克曼的生化免疫流水線，常規(guī)項(xiàng)目選用貝克曼配套試劑，不常用的項(xiàng)目選用非配套試劑。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)將有可能發(fā)生交叉污染的試劑分配到不同單元，或者是在同一單元使用不同圈的比色杯進(jìn)行檢測(cè)。AU5821生化分析儀分為1、2兩個(gè)單元，每個(gè)單元的比色杯又分為內(nèi)外兩圈，而攪拌棒分為三組，根據(jù)這個(gè)構(gòu)造分析一旦發(fā)生交叉污染事件，最有可能的是發(fā)生污染項(xiàng)目之前的、與其相鄰的并且使用同一圈比色杯的檢測(cè)項(xiàng)目的試劑。根據(jù)上述分析影響TBA檢測(cè)結(jié)果最有可能為IgE、GSP、CK、RBP的試劑，影響TG檢測(cè)結(jié)果最有可能為CR、TBIL、Hcy、HDL的試劑。TG及TBA均為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)的室內(nèi)質(zhì)控二者均是在控的，而檢測(cè)個(gè)別病人樣本時(shí)會(huì)出現(xiàn)異常增高的現(xiàn)象。高TG的標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果會(huì)在15.0 mmol/L以上，正常情況下這種標(biāo)本會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的渾濁或者乳糜的情況，但這些標(biāo)本均為清亮透明。高TBA的患者檢測(cè)結(jié)果會(huì)在45.0μmol/L以上，并且均未有相關(guān)的臨床癥狀且其他輔助診斷均正常。單獨(dú)對(duì)這兩個(gè)項(xiàng)進(jìn)行復(fù)查時(shí)結(jié)果均正常，所以高度懷疑檢測(cè)受到了干擾。本文之所以進(jìn)行20次重復(fù)檢測(cè)主要為了屏蔽掉隨機(jī)誤差的干擾，以及通過(guò)均值加減標(biāo)準(zhǔn)差的統(tǒng)計(jì)學(xué)的方式來(lái)說(shuō)明在干擾項(xiàng)目檢測(cè)后第一回檢測(cè)被干擾項(xiàng)目，經(jīng)一次清洗后第二回檢測(cè)被干擾項(xiàng)目，經(jīng)二次清洗后第三回檢測(cè)被干擾項(xiàng)目，直到第四回檢測(cè)被干擾項(xiàng)目間各回結(jié)果之間的差異。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析說(shuō)明了每一輪清洗都會(huì)去除一部分干擾，直到第四回的檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組間是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的。

本研究通過(guò)工作中發(fā)現(xiàn)個(gè)別標(biāo)本的TG及TBA出現(xiàn)異常升高的現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)部分試劑中可能存在TG及TBA或者干擾TG及TBA檢測(cè)的成分。Hcy引起TG升高的機(jī)理是試劑中添加了甘油脂的成分所致；RBP引起TBA檢測(cè)結(jié)果升高的原因，可能是RBP試劑中含有活性較高的氧化性物質(zhì)，影響了TBA氧化還原反應(yīng)所致。但RBP試劑說(shuō)明書(shū)未發(fā)現(xiàn)其含有TBA的成分。這兩組實(shí)驗(yàn)通過(guò)連續(xù)檢測(cè)5次后基本上不存在明顯的干擾。

對(duì)上述攜帶污染造成的干擾的應(yīng)對(duì)方法如下，一方面為加強(qiáng)對(duì)儀器的維護(hù)和日常保養(yǎng)力度，同時(shí)加強(qiáng)對(duì)儀器的清洗，不光用堿洗還應(yīng)使用酸洗；另一方面如果通過(guò)維護(hù)保養(yǎng)以及特殊清洗無(wú)法解決時(shí)需合理改變?cè)噭┑捻樞蚧蛘呤褂貌煌K以及不同圈的比色杯進(jìn)行檢測(cè)。并重視對(duì)分析方法有針對(duì)性的科學(xué)選擇的重要性，因同一項(xiàng)目分析方法可有多種，存在不同的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，可能又具有較好的分析性能，但有嚴(yán)重的交叉污染的現(xiàn)象，故需對(duì)交叉污染的情況和方法的性能進(jìn)行綜合分析，來(lái)制定和選擇適宜的方法［4-6］。也要加強(qiáng)與臨床的溝通，當(dāng)臨床對(duì)我們發(fā)出的檢驗(yàn)報(bào)告產(chǎn)生異議時(shí)需要高度重視，不應(yīng)盲目的相信自己的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，這兩個(gè)例子均是臨床對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生懷疑時(shí)，我們通過(guò)有效的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)才發(fā)現(xiàn)問(wèn)題的。