不同條件保存24小時(shí)尿液對生化檢測的影響

蔡宇雨，鄒良強(qiáng)，劉 娜

（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科北京大學(xué)第九臨床醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科尿液細(xì)胞分子診斷北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100038）

尿液生化檢測作為一項(xiàng)無創(chuàng)的檢查，對于尿路結(jié)石、腎臟疾病早期的診斷及治療有著至關(guān)重要的作用。尿液生化檢測方便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，是腎病變早期發(fā)現(xiàn)、初步定位評估和病情監(jiān)測的良好選擇，且多項(xiàng)尿液生化聯(lián)合檢查，對腎病變部位及程度的評估更為全面［1］。但實(shí)踐中受到留取條件的限制，許多患者對正確留取24 h尿液的方法依從性較差，如沒有專用的冷藏保存箱、尿液生化聯(lián)合檢查時(shí)要根據(jù)不同項(xiàng)目的保存條件多次留尿送檢，以及患者難以嚴(yán)格按照規(guī)定添加防腐劑等。如果不能按照正確方式留取尿液，則會(huì)對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，干擾臨床醫(yī)生對病情的正確判斷，所以既要確保送檢尿液符合要求又要減少患者留尿時(shí)的不便則成了一個(gè)亟需解決的問題。目前臨床上主要根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版》以及《尿液標(biāo)本的收集劑處理指南》推薦的留取方式對24 h尿液進(jìn)行保存，首選方法為冷藏保存，無冷藏條件則可以添加防腐劑（硼酸、濃鹽酸）保存［2-3］。既往研究表明，24 h尿液在常溫條件下保存對總蛋白、肌酐等項(xiàng)目結(jié)果無顯著影響，但研究項(xiàng)目和保存方式較為局限［4-6］。本研究旨在研究尿液分別在常溫、添加濃鹽酸以及硼酸保存條件下與冷藏保存相比，檢測結(jié)果是否存在差異，探尋一種不影響尿液生化檢測結(jié)果且留取安全簡便的保存方式。

材料和方法

1 儀器和試劑

使用貝克曼庫爾特AU5800系列全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測。

2 方法

在同一時(shí)間收集來自志愿者的隨機(jī)尿20份，每份尿液10mL，混勻后取0.5mL進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，將剩余尿液分成四份，每份2mL。四份尿液分別進(jìn)行下列處理：①放置在2～8℃冷藏不添加防腐劑；②常溫不添加防腐劑；③常溫添加濃鹽酸20μL；④常溫添加分析純級(jí)別硼酸0.02g。處理后的樣本保存24 h后進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)以及生化項(xiàng)目的檢測，包含：總蛋白（total protein，TP）、鉀（potassium，K+）、鈉（sodium，Na+）、氯（chloride，Cl-）、鈣（calcium，Ca）、磷（inorganic phosphorus，IP）、尿素（Urea）、尿酸（uric acid，UA）及肌酐（creatinine，Cr）。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。所有變量均按Shapiro-W ilk進(jìn)行正態(tài)驗(yàn)證，正態(tài)變量以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)變量用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）［M（X75%-X25%）］表示，正態(tài)資料兩組間差異比較采用單因素方差分析，非正態(tài)資料組間比較采用W ilcoxon檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

將冷藏保存作為標(biāo)準(zhǔn)，常溫保存、濃鹽酸保存以及硼酸保存分別與之進(jìn)行比較。常溫保存與冷藏保存相比各項(xiàng)生化檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；使用濃鹽酸保存與冷藏保存相比，Cr、UA、K+、Cl-、Urea及TP結(jié)果差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Na+、Ca和IP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；使用硼酸保存與冷藏保相比，Cr、UA、K+及Urea結(jié)果差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），TP、Na+、Cl-、Ca及IP差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同方式保存尿液后檢測結(jié)果見表1、表2和表3。

表1 常溫與冷藏保存各生化項(xiàng)目檢測結(jié)果比較

表2 添加濃鹽酸與冷藏保存各生化項(xiàng)目檢測結(jié)果比較

討 論

24 h尿液生化的檢測在臨床上應(yīng)用較廣泛，對于尿路結(jié)石、鈣磷代謝、甲狀旁腺功能以及腎臟疾病的早期診斷、治療效果、預(yù)后判斷等起著非常重要的作用。24 h尿液正確留取與及時(shí)送檢是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的前提，不能及時(shí)送檢時(shí)應(yīng)根據(jù)不同項(xiàng)目要求合理保存。尿液的保存方法一般有冷藏法和化學(xué)防腐劑法［7］。然而不論使用哪種方法保存，對尿液留取方式或防腐劑的添加量均有嚴(yán)格限制，患者很難掌握規(guī)范的操作方式，導(dǎo)致留取樣本的依從性較差。當(dāng)多個(gè)尿液生化項(xiàng)目聯(lián)合檢測時(shí)，不同項(xiàng)目需按照各自推薦的方式保存，并需要多次留尿，給患者造成諸多不便。另外，使用防腐劑時(shí)還要注意其毒性、腐蝕性等安全隱患。因此目前迫切需要找出一種既不影響檢測結(jié)果又安全簡便的尿液保存方法。

24 h尿蛋白的檢測結(jié)果可反映每天排泄的尿蛋白量，有助于診斷腎臟病變，評估治療及預(yù)后效果。既往對24 h尿蛋白的保存方式研究較多，可以冷藏保存，也可以常溫或添加二甲苯等防腐劑保存，不同保存方式對結(jié)果無明顯影響［5-6］。本研究中，常溫和硼酸與冷藏保存相比，TP結(jié)果無明顯差異，但使用濃鹽酸保存防腐會(huì)影響TP的檢測結(jié)果，這與指南推薦的方式相符［3］。因此，檢測TP時(shí)可以在常溫和硼酸保存方式下留取尿液，而不建議使用濃鹽酸進(jìn)行防腐。

尿Cr排出量晝夜相對恒定，受干擾的因素較少，是校正尿量不同及個(gè)體差異的重要方法，在臨床上應(yīng)用非常廣泛［8］。本研究中常溫與冷藏保存相比，Cr結(jié)果無明顯差異，但使用濃鹽酸或硼酸防腐會(huì)影響Cr檢測結(jié)果，與指南推薦的方式不符［3］?？赡茉?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)室Cr檢測方法為肌氨酸氧化酶法，該項(xiàng)目在檢測過程中濃鹽酸或硼酸消耗了反應(yīng)中產(chǎn)生的過氧化氫，減少了進(jìn)一步生成藍(lán)色色素的反應(yīng)，使檢測結(jié)果偏低。因此，檢測Cr時(shí)可以在常溫條件下保存尿液，而不推薦使用濃鹽酸和硼酸進(jìn)行防腐。

尿K+、Na+、Ca、IP及UA在結(jié)石形成中起重要作用，可用于尿路結(jié)石病人的實(shí)驗(yàn)室檢查［9］。本研究結(jié)果提示常溫保存尿液對以上生化檢測結(jié)果無明顯差異。使用濃鹽酸和硼酸保存尿液對K+和UA的檢測結(jié)果有影響，可能原因?yàn)樗嵝晕镔|(zhì)對電極造成干擾導(dǎo)致K+結(jié)果發(fā)生變化，使用濃鹽酸和硼酸保存尿液后，UA結(jié)果較冷藏保存結(jié)果偏低，考慮原因?yàn)閁A在酸性條件下不穩(wěn)定而導(dǎo)致結(jié)果偏低［10］。指南上不推薦使用硼酸保存的尿液檢測Ca和IP，但研究結(jié)果顯示硼酸保存的尿液對Ca和IP檢測無明顯影響，與指南中有差異［3］，但《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版》中并未明確指出Ca和IP不能使用硼酸保存［2］，可能因?yàn)樘砑优鹚岜４娴哪蛞涸跈z測Ca和IP時(shí)并不是最佳保存方式，尿液檢測Ca和IP時(shí)也可使用硼酸保存。所以，檢測K+、Na+、Ca、IP及UA時(shí)可用在常溫條件下保存尿液，而檢測K+和UA的尿液不推薦使用濃鹽酸或硼酸進(jìn)行保存。

本研究中還對不同方式保存的尿液進(jìn)行了細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示常溫和添加濃鹽酸與冷藏保存在細(xì)菌數(shù)量上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。常溫保存較冷藏保存細(xì)菌數(shù)量上明顯升高，但對于各項(xiàng)尿液生化結(jié)果并未產(chǎn)生影響，這可能是細(xì)菌增長的數(shù)量不足以影響生化項(xiàng)目檢測。使用濃鹽酸進(jìn)行尿液防腐有明顯的抑菌作用，細(xì)菌生長被抑制，但由于濃鹽酸酸性較強(qiáng)，會(huì)對Cr、UA、Na+、K+、Cl-、Urea及TP檢測產(chǎn)生影響。以上結(jié)果提示，細(xì)菌增長不是影響尿液生化檢測結(jié)果的決定性因素。

總之，本研究提示24 h尿液在常溫條件下保存對生化項(xiàng)目檢測無明顯影響，而添加濃鹽酸、硼酸進(jìn)行防腐會(huì)對某些項(xiàng)目造成不同程度的影響。因此在實(shí)際臨床工作中，如患者沒有冷藏保存條件，可將24h尿液常溫保存。