Graves病初發(fā)患者血清白細(xì)胞介素-4測(cè)定分析

崔雄鷹，趙晉華

（上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，上海201620）

Graves病是以甲狀腺功能亢進(jìn)為主要臨床表現(xiàn)的器官特異性的自身免疫病，由于自身免疫的病理基礎(chǔ)，其病理生理過(guò)程有淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子的參與［1］，有研究報(bào)道GD患者血清IL-6顯著增高，可作為評(píng)價(jià)免疫功能紊亂的指標(biāo)［2］，IL-4作為一種重要的細(xì)胞因子也在體液免疫和細(xì)胞免疫過(guò)程中起著重要的作用［3］?。本文主要探討GD初發(fā)患者與健康體檢人群血清IL-4濃度差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以及FT4輕度增高組和重度增高組間IL-4濃度相比有無(wú)明顯差異，并研究GD初發(fā)患者IL-4濃度是否與甲狀腺相關(guān)自身抗體Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO有線性相關(guān)關(guān)系，為研究細(xì)胞因子在GD病理生理過(guò)程中的作用提供方向。

材料和方法

1 研究對(duì)象

2013年12月至2014年9月至上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院南院就診的56例21～60歲GD初發(fā)患者，由臨床表現(xiàn)、血清甲狀腺激素測(cè)定和甲狀腺彩超共同確診。其中男性27例（48%），女性29例（52%），年齡36.9±10.5歲，患者血清FT3、FT4均明顯增高，TSH 明顯降低。對(duì)照組選取50例22～60歲2014年8月至上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院南院進(jìn)行健康體檢且甲狀腺功能正常的人群，男性25例，女性25例，年齡36.2±8.4歲，性別和年齡均與患者匹配。患者組和對(duì)照組均無(wú)近期感染，免疫功能低下及過(guò)敏性疾病等人群。

2 試劑和儀器

人血清IL-4的濃度測(cè)定采用放射免疫分析試劑盒，購(gòu)自天津協(xié)和醫(yī)藥有限公司。FT3、FT4和TSH的測(cè)定采用法國(guó)CISBIO公司放射免疫分析試劑盒。Anti-TSHR、Anti-TG 和 Anti-TPO 測(cè) 定 采 用 瑞 士Roche公司電化學(xué)發(fā)光試劑盒。γ計(jì)數(shù)器采用安徽中科中佳GC1500儀器。電化學(xué)發(fā)光儀為Roche E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀。

3 人血清IL-4、FT3、FT4、TSH、Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO測(cè)定

GD初發(fā)患者和健康體檢者空腹采血時(shí)間均為上午9：00，采血前囑安靜1h。收集患者和體檢者全血各5 mL，靜置兩小時(shí)后3500rpm離心5min分離出血清并于-20℃凍存，兩個(gè)月后單次復(fù)溶所有血清并統(tǒng)一檢測(cè)患者各份血清IL-4、FT3、FT4、TSH、Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO濃度以及體檢者IL-4濃度。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用EXCEL表對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，人血清IL-4濃度值為符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，各計(jì)量資料以±s表示，兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并對(duì)GD初發(fā)患者血清IL-4與Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO進(jìn)行pearson線性相關(guān)分析，以P＜0.05為顯著線性相關(guān)。

結(jié) 果

1 GD初發(fā)患者血清各指標(biāo)和健康體檢人群血清IL-4統(tǒng)計(jì)

整理GD初發(fā)患者血清各指標(biāo)和健康體檢人群血清IL-4數(shù)據(jù)，各計(jì)量資料以±s表示，如表1所示，GD初發(fā)患者血清FT3、FT4均明顯增高，TSH 明顯降低，據(jù)患者血清FT4增高的程度將患者組分為輕度增高組（23 Pmol/L＜FT4＜60 Pmol/L）和重度增高組（FT4≥60 Pmol/L）。

表1 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組血清各指標(biāo)統(tǒng)計(jì)（±s）

表1 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組血清各指標(biāo)統(tǒng)計(jì)（±s）

分組 例數(shù) FT3（pmol/L）FT4（pmol/L）IL-4（ng/mL）GD初發(fā)患者 56 22.95±10.90 72.16±23.14 0.04±0.05 18.21±13.64 393.48±72.7 248.23±201 1.80±0.58輕度組 20 14.15±3.99 48.87±7.29 0.05±0.04 18.59±12.67 497.27±69.7 273.26±191 1.74±0.65重度組 36 27.84±10.45 85.11±18.18 0.04±0.05 17.43±16.13 221.86±89.7 232.60±221 1.83±0.54健康體檢者TSH（μIU/mL）Anti-TSHR（IU/mL）Anti-TG（IU/mL）Anti-TPO（IU/mL）50 0.76±0.42

2 GD初發(fā)患者與健康體檢人群血清IL-4濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析56名GD初發(fā)患者和50名健康體檢人群血清IL-4濃度，結(jié)果如圖1所示，經(jīng)t檢驗(yàn)分析，GD初發(fā)患者血清IL-4濃度（1.80±0.58 ng/mL）與健康體檢者（0.76±0.42 ng/mL）相比P＝0.03（＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，GD初發(fā)患者體內(nèi)血清IL-4濃度明顯高于健康體檢者。

圖1 GD初發(fā)患者與健康體檢人群血清IL-4濃度統(tǒng)計(jì)圖

3 不同嚴(yán)重程度的GD初發(fā)患者血清IL-4濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

FT4輕度增高組（23 Pmol/L＜FT4＜60 Pmol/L）有男性8例（40%），女性12例（60%），年齡34.80±11.90歲，重度增高組（FT4≥60 Pmol/L）有男性19例（53%），女性17例（47%），年齡38.08±11.80歲。輕度增高組與重度增高組兩組性別比例經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，P＝0.36（＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩組間年齡經(jīng)t檢驗(yàn)分析，P＝0.92（＞0.05），也無(wú)差異。兩組間IL-4濃度比較結(jié)果如圖2所示，經(jīng)t檢驗(yàn)分析，輕度增高組患者血清IL-4濃度（1.74±0.65 ng/mL）與重度增高組（1.83±0.54 ng/mL）相比P＝0.57（＞0.05）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 不同嚴(yán)重程度的GD初發(fā)患者血清IL-4濃度統(tǒng)計(jì)圖

4 GD初發(fā)患者血清IL-4濃度與甲狀腺相關(guān)自身免疫抗體線性相關(guān)性統(tǒng)計(jì)

對(duì)GD初發(fā)患者血清IL-4與Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO進(jìn)行pearson線性相關(guān)分析，P值分別為0.50、0.43、0.90，均無(wú)線性相關(guān)關(guān)系。

圖3 GD初發(fā)患者血清IL-4濃度與甲狀腺自身免疫抗體相關(guān)性統(tǒng)計(jì)

討 論

GD是一種伴隨甲狀腺功能亢進(jìn)的自身免疫性甲狀腺病，是甲狀腺功能亢進(jìn)中最常見(jiàn)的類型，其在人群中的發(fā)病率約為0.5%～1%，女性＞男性，病因與發(fā)病機(jī)理未明，目前認(rèn)識(shí)到的致病因素包括：免疫功能異常、遺傳、感染及精神因素［1］。IL-4是具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，主要由活化的T細(xì)胞、單核細(xì)胞分泌，IL-4在調(diào)節(jié)T、B淋巴細(xì)胞的分化、活化，在促進(jìn)以Th2細(xì)胞為特征的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，IL-4具有強(qiáng)大而廣泛的生物學(xué)活性，有研究報(bào)道，其對(duì)白血病、腫瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病有治療作用［4］。謝建平等報(bào)道抗甲狀腺藥物治療會(huì)影響GD患者體內(nèi)多種細(xì)胞因子的水平［5］。本研究的主要目的即討論GD初發(fā)患者與健康體檢人群血清IL-4濃度差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以及IL-4與血清FT4增高程度有無(wú)相關(guān)性，與血清甲狀腺相關(guān)自身免疫抗體有無(wú)相關(guān)性，初步明確IL-4與疾病嚴(yán)重程度和自身體液免疫狀態(tài)是否相關(guān)。

本研究表明GD患者血清IL-4濃度明顯高于對(duì)照組，IL-4有可能在GD的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。YABIKU K等發(fā)現(xiàn)GD 患者淋巴細(xì)胞中通過(guò)IL-4Rα-Stat6介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)使體液免疫中IgE增高［6］，可以推測(cè)IL-4作為共刺激因子在GD患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。郭成等認(rèn)為T(mén)h17細(xì)胞數(shù)量及分泌的細(xì)胞因子會(huì)影響GD的發(fā)展，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)［7］。本研究結(jié)果顯示FT4不同程度增高的GD患者血清IL-4濃度無(wú)差異，可能血清IL-4濃度與GD的嚴(yán)重程度并不相關(guān)，有可能IL-4濃度與病程相關(guān)［5］，而本研究并未搜集患者發(fā)病時(shí)間資料且病例數(shù)較少，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果有偏差，接下來(lái)還會(huì)擴(kuò)大樣本量并對(duì)臨床資料作進(jìn)一步搜集以探究。GD初發(fā)患者血清IL-4濃度與甲狀腺自身免疫抗體間無(wú)線性相關(guān)關(guān)系，但并不能表明GD患者血清IL-4與體液免疫無(wú)關(guān)，有可能是因?yàn)閺?fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中其它細(xì)胞因子的作用使整個(gè)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)保持平衡所致［8］。

當(dāng)然本研究還有不足之處，實(shí)驗(yàn)組樣本量較少，只有56例，且對(duì)照組健康體檢者無(wú)甲狀腺激素和自身抗體數(shù)據(jù)。在接下來(lái)的工作中，我們還將檢測(cè)GD初發(fā)患者血清其它與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞因子，如Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ、IL-2、IL-12，Th2細(xì)胞分泌的IL-5、IL-6、IL-10等［3］。由于GD初發(fā)患者血清IL-4明顯增高，我們還將深入進(jìn)行機(jī)制研究，在細(xì)胞水平設(shè)計(jì)IL-4R拮抗劑，使之能與IL-4R高度結(jié)合而不能進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從而阻滯IL-4發(fā)揮作用。

綜上所述，本研究顯示GD初發(fā)患者血清IL-4濃度明顯高于健康體檢者，F(xiàn)T4輕度增高組和重度增高組間IL-4濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-4與Anti-TSHR、Anti-TG和Anti-TPO均無(wú)線性相關(guān)關(guān)系。本研究為探討細(xì)胞因子在GD初發(fā)患者中的病理生理意義提供了方向。