臨沂市銀雀花組織培養(yǎng)技術(shù)研究

樊青峰

摘要? ? 以銀雀花的莖段為外植體，通過對不同基本培養(yǎng)基、不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度的篩選，建立銀雀花的組織培養(yǎng)再生體系，為銀雀花的組織快繁提供技術(shù)指導(dǎo)。結(jié)果表明，初代培養(yǎng)宜選用培養(yǎng)基MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA;最佳增殖培養(yǎng)基為MS中添加0.4 mg/L TDZ，誘導(dǎo)形成 4～5個叢生芽，將嫩莖接種在添加0.75 mg/L NAA的1/2 MS培養(yǎng)基中，生根率為83.0%。

關(guān)鍵詞? ? 銀雀花;組織培養(yǎng);再生體系;山東臨沂

中圖分類號? ? S688? ? ? ? 文獻標(biāo)識碼? ? A? ? ? ? 文章編號? ?1007-5739（2019）12-0103-01

金雀花、銀雀花是臨沂市兩大地方性花卉，也是與金雀山和銀雀山地名相匹配的名優(yōu)特色花卉，與臨沂歷史文化緊密相連。金雀花、銀雀花在臨沂市種植歷史悠久[1]，但是由于種種原因已瀕臨滅絕。由于近年來綠色食品和食花文化的興起，對金雀花、銀雀花及其種苗的需求與日俱增，因人為采摘花朵及環(huán)境影響等導(dǎo)致其結(jié)實率低，而分株和扦插繁殖系數(shù)也低，無法滿足市場需求。目前，僅對金雀花食用價值、藥物成分、栽培管理和組織培養(yǎng)開展了研究[2-5]，但對于銀雀花組織培養(yǎng)的報道極少。因此，本文研究不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度誘導(dǎo)叢生芽，建立銀雀花組織培養(yǎng)再生體系，以期實現(xiàn)種苗快速繁育，滿足臨沂地方花卉產(chǎn)業(yè)種苗需求。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

分別于2016年4月和5月在臨沂市農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗基地多年生的銀雀花上采取半木質(zhì)化枝條作為試材。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 材料滅菌。剪取銀雀花生長健壯的枝條，流水沖洗30 min，然后在超凈工作臺上用75%乙醇處理10 s，再用0.5%次氯酸鈉滅菌15 min，無菌水沖洗3～4次。將材料切成帶腋芽的長1.0 cm莖段，每個莖段帶1個腋芽，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.2.2? ? 初代培養(yǎng)。試驗采用3因素3水平正交設(shè)計，研究基本培養(yǎng)基和植物生長調(diào)節(jié)劑對初代培養(yǎng)的影響。基本培養(yǎng)基為 MS、WPM和LP;植物生長調(diào)節(jié)劑為6-BA 0.4、0.8、1.2 mg/L;NAA 0.05、0.10、0.15 mg/L。每個處理接種外植體10 個，3次重復(fù)，30 d時統(tǒng)計成活率。成活率（%）=（成活外植體/接種總數(shù)）×100。

1.2.3? ? 無菌苗增殖培養(yǎng)?；九囵B(yǎng)基為MS，在培養(yǎng)基中分別添加TDZ 0、0.2、0.4、0.8、1.0 mg/L，然后均添加0.15 mg/L NAA，研究不同濃度的TDZ對增殖的影響。外植體10個，重復(fù)3 次，30 d時統(tǒng)計增殖系數(shù)。增殖系數(shù)=增殖后的總芽數(shù)/接種芽數(shù)。

1.2.4? ? 生根培養(yǎng)。在1/2 MS培養(yǎng)基中分別添加0、0.25、0.50、0.75、1.00 mg/L NAA，研究不同質(zhì)量濃度的NAA對生根的影響。每個處理接種外植體10個，先暗培養(yǎng)7 d后再轉(zhuǎn)入光下培養(yǎng)。3次重復(fù)，30 d時統(tǒng)計生根率。生根率（%）=（生根芽數(shù)/接種芽數(shù)）×100。

培養(yǎng)條件：除生根培養(yǎng)基添加20.0 g/L蔗糖外，其余添加30.0 g/L蔗糖;均添加6.0 g/L瓊脂，pH值5.6～5.8。光照時間為12 h/d，光照強度為2 000 lx，培養(yǎng)溫度為（25±1）℃。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 基本培養(yǎng)基和植物生長調(diào)節(jié)劑對莖段腋芽萌發(fā)誘導(dǎo)的綜合影響

將材料切成帶腋芽的長1.0 cm的莖段消毒后接種到不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，10 d后即可萌發(fā)，30 d后統(tǒng)計萌發(fā)率。MS成活率最高，平均成活率為45.9%，MS培養(yǎng)基上生長的芽粗壯;在WPM和LP上的萌發(fā)效果基本相同，平均成活率分別為35.6%和35.1%，生長后期小葉有黃化脫落現(xiàn)象。從表1可以看出，在MS培養(yǎng)基添加0.15 mg/L NAA和1.2 mg/L 6-BA腋芽的成活率最高，為58.5%，且差異顯著。

2.2? ? 不同濃度TDZ對增殖的影響

將誘導(dǎo)的腋芽新梢切下，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上。試驗結(jié)果（表2）表明，無菌苗隨著TDZ濃度的增加，增殖系數(shù)呈上升趨勢，并生成了叢生芽;但當(dāng)TDZ濃度達到0.8 mg/L時，增殖系數(shù)為4.8，出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象;當(dāng)TDZ濃度達1.0 mg/L，基部愈合組織多，不定芽生長緩慢。因此，增殖培養(yǎng)基中添加0.4 mg /L為TDZ最佳濃度。

2.3? ? 不同濃度 NAA 對無菌苗生根的影響

試驗結(jié)果（表3）表明，在NAA質(zhì)量濃度為0.25～1.00 mg/L范圍內(nèi)，隨著濃度升高，生根率上升;在0.75 mg/L時，誘導(dǎo)根系粗壯，平均根數(shù)為3.6條，差異顯著。當(dāng)NAA為1.0 mg/L時，生根率較高，但基部形成大量愈合組織，生根倍數(shù)有所下降，不利于后期生長。

3? ? 結(jié)論與討論

銀雀花組培快繁過程中，選擇合適的基本培養(yǎng)基是組培快繁成功的關(guān)鍵之一[6]。本試驗結(jié)果表明，初代培養(yǎng)以MS+1.2 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA培養(yǎng)基為宜，可以獲得較高的成活率。在增殖培養(yǎng)過程中，在一定范圍內(nèi)，TDZ隨著濃度的增加，有利于增殖，并較好誘出叢生芽;在0.4 mg/L的條件下TDZ增殖效果最好，增殖系數(shù)可達4.5;但濃度過高反而抑制芽的再生，導(dǎo)致芽苗玻璃化等現(xiàn)象。生根以1/2 MS基本培養(yǎng)基中添加0.75 mg/L NAA生根效果最好。

4? ? 參考文獻

[1] 張謙，劉延剛，彭金海，等.臨沂市金雀花的植物學(xué)特性及盆景制作技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)科技通訊，2013（5）：263-256.

[2] 李洪文.多功能野生物種：金雀花繁苗用豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].耕作與栽培，2003（4）：27-28.

[3] 樊建，趙天瑞，李永生，等.野生金雀花營養(yǎng)成分研究[J].昆明理工大學(xué)報（理工版），2006，31（2）： 97-99.

[4] 陳家龍，朱建軍，吳秀水，等.金雀花組織培養(yǎng)與快繁[J].浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報，2013，30（4）：611-614.

[5] 馬青，唐民科.線葉金雀花的研究進展[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2018，20（6）：998-1003.

[6] 陳家龍，朱建軍，陳功楷，等.金雀花花期促成栽培研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，30（4）：57-61.