蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法變更的驗(yàn)證方法探析

高強(qiáng) 孫榕 薛耀武

摘要? ? 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變更時(shí)，檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)做好新方法的驗(yàn)證工作。本文以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)變更為例，詳述了如何開(kāi)展方法驗(yàn)證，以期為化學(xué)分析方法發(fā)生變更時(shí)更好地開(kāi)展驗(yàn)證工作提供參考。

關(guān)鍵詞? ? 農(nóng)藥殘留;檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn);方法變更;方法驗(yàn)證

中圖分類號(hào)? ? TS207.3;O652.1? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ? A? ? ? ? 文章編號(hào)? ?1007-5739（2019）12-0084-01

Abstract? ? The inspection and testing organization should do a good job of verifying the new method when the test standard changed.In this paper，the change of avermectin residue in fruits and vegetables was taken as an example，the process of method validation was detailed，in order to provide reference for better verification of chemical analysis methods.

Key words? ? pesticide residue;test standard;method change;method validation

蔬菜在生產(chǎn)周期內(nèi)，由于易發(fā)生病蟲(chóng)害，農(nóng)藥使用的頻次較高，農(nóng)藥殘留問(wèn)題一直受到消費(fèi)者重點(diǎn)關(guān)注。做好監(jiān)管，合理使用農(nóng)藥是農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要保障。近年來(lái)，為了進(jìn)一步提升食品安全水平，國(guó)家對(duì)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和食品安全相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了專項(xiàng)清理整合工作。因此，有大量農(nóng)藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)被作廢或代替，還有許多全新標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施。由于新版《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定管理辦法》（163號(hào)令）的實(shí)施，資質(zhì)認(rèn)定證書(shū)有效期增加到6年，依據(jù)資質(zhì)認(rèn)定準(zhǔn)則4.5.14的規(guī)定[1]，檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)跟蹤方法的變化，并重新進(jìn)行證實(shí)或確認(rèn)，當(dāng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變更代替時(shí)，要做好變更后檢測(cè)方法的驗(yàn)證工作，質(zhì)量監(jiān)督局安排考核組專家現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行能力確認(rèn)。綜上所述，有必要對(duì)檢測(cè)方法變更驗(yàn)證試驗(yàn)進(jìn)行探析，這對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)人員在應(yīng)對(duì)方法變更時(shí)有很好的指導(dǎo)意義。本文在論述過(guò)程中以水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測(cè)定GB 23200.19—2016代替SN/T 2114—2008為實(shí)例。

1? ? 標(biāo)準(zhǔn)變化內(nèi)容

通過(guò)對(duì)新舊標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容對(duì)比，可找出新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)以下幾個(gè)方面進(jìn)行了修訂，標(biāo)準(zhǔn)的本質(zhì)內(nèi)容未發(fā)生改變。

（1）此標(biāo)準(zhǔn)由出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)變更為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

（2）應(yīng)用范圍。由其他水果和蔬菜可以參考本標(biāo)準(zhǔn)改變?yōu)槠渌称房蓞⒄請(qǐng)?zhí)行，增加了檢測(cè)應(yīng)用范圍。

（3）增加了規(guī)范性引用文件內(nèi)容。

（4）修訂了試樣制備與保存，與現(xiàn)行強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)GB 2763附錄A對(duì)接。

（5）試劑和材料。丙酮的試劑等級(jí)變更為色譜純。

（6）儀器和設(shè)備。增加了對(duì)于分析天平的規(guī)格。

（7）結(jié)果計(jì)算與表述。增加了計(jì)算結(jié)果保留有效數(shù)字的位數(shù)。

（8）增加了對(duì)精密度的要求描述。

（9）將測(cè)定底限準(zhǔn)確變更表述為檢測(cè)定量限。

2? ? 實(shí)驗(yàn)室是否滿足新標(biāo)準(zhǔn)要求

2.1? ? 人員

儀器設(shè)備的操作人員未發(fā)生改變，所有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員都通過(guò)考核，持證上崗，明確人員授權(quán)能力范圍;人員年度能力確認(rèn)，使檢測(cè)人員能夠持續(xù)滿足檢測(cè)工作要求。

2.2? ? 儀器設(shè)備

做好儀器設(shè)備的檢定、期間核查工作，使儀器性能確保符合檢測(cè)要求以及量值溯源;檢測(cè)所用儀器及檢測(cè)器未發(fā)生變化，均滿足檢測(cè)需求。

2.3? ? 試劑耗材

每年做好供應(yīng)商評(píng)價(jià)工作、耗材驗(yàn)收工作，以及指定購(gòu)買特定廠家的服務(wù)。

2.4? ? 體系文件

每年做好管理評(píng)審工作，根據(jù)體系文件的適應(yīng)性以及資質(zhì)認(rèn)定準(zhǔn)則和機(jī)構(gòu)考核細(xì)則的變化，及時(shí)完成體系文件的再版、修訂工作，使體系文件運(yùn)行持續(xù)有效，檢測(cè)工作受到嚴(yán)格控制。

2.5? ? 環(huán)境條件

做好實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制工作，對(duì)于可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的實(shí)驗(yàn)室溫濕度進(jìn)行控制，并及時(shí)記錄環(huán)境條件，液相色譜儀所在檢測(cè)室符合儀器運(yùn)行的規(guī)定。

3? ? 方法驗(yàn)證參數(shù)

3.1? ? 線性范圍

農(nóng)藥殘留檢測(cè)濃度范圍通常覆蓋關(guān)注濃度50%～150%，應(yīng)至少包含方法定量限濃度點(diǎn);元素檢測(cè)應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度0～150%，要充分考慮試劑對(duì)響應(yīng)值的影響[2]。濃度為0.20、0.40、0.80、1.00、2.00、4.00 μg/mL時(shí)，對(duì)應(yīng)的峰面積分別為7.629 01、15.464 94、32.122 50、40.704 24、79.919 59、163.440 83，線性擬合方程為y=40.865 58x-0.569 963，R=0.999 94。其中0.20 μg/mL是定量限濃度值。

3.2? ? 檢出限和定量限

通常只有當(dāng)目標(biāo)物的含量接近于0時(shí)確定檢出限（LOD）或定量限（LOQ）。對(duì)于濃度接近痕量和超痕量檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)報(bào)告為“未檢出”時(shí)，或者接近超標(biāo)限量時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需要利用檢出限和定量限進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估或者法規(guī)決策。對(duì)于現(xiàn)代儀器分析方法來(lái)講，檢出限可分為儀器檢出限和方法檢出限2個(gè)部分，定量限也可分為儀器定量限和方法定量限。農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)主要應(yīng)用色譜法和質(zhì)譜法，均可采用信噪比法評(píng)估檢出限和定量限;較低濃度的分析物濃度的確定可根據(jù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限或超標(biāo)限量確定;典型可接受的信噪比是3∶1為檢測(cè)限，10∶1為定量限[3-4]。由于農(nóng)產(chǎn)品的基質(zhì)較復(fù)雜，不同的基質(zhì)可能需要分別評(píng)估檢出限和定量限。

3.2.1? ? 儀器檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評(píng)估：根據(jù)阿維菌素標(biāo)品濃度0.20 μg/mL檢測(cè)譜圖信噪比（s/n）約為10∶1;阿維菌素標(biāo)品濃度0.40 μg/mL檢測(cè)譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出儀器檢出限為0.003 3 mg/kg，儀器定量限為0.010 mg/kg。

3.2.2? ? 方法檢出限和儀器定量限。儀器信噪比法評(píng)估：按照下述加標(biāo)實(shí)驗(yàn)方案，加標(biāo)濃度0.20 mg/kg，檢測(cè)譜圖信噪比（s/n）約為20∶1。按照信噪比（s/n）3∶1為檢出限，10∶1為定量限，可以推算出方法檢出限為0.003 3 mg/kg，方法定量限為0.010 mg/kg。

3.3? ? 正確度和精密度

測(cè)量結(jié)果的正確度用于表述多次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的平均值與參考值之間的接近程度，表示的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差可通過(guò)加標(biāo)回收試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估，方法回收率的偏差范圍可參考相關(guān)規(guī)定進(jìn)行評(píng)價(jià)（可參考GB/T 27404附錄F.1）[5-6]。精密度通過(guò)測(cè)量結(jié)果重復(fù)性和再現(xiàn)性進(jìn)行評(píng)估。重復(fù)性（rep-eatability）是指在正常和正確操作情況下，由同一操作人員，在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，使用同一儀器，并在短期內(nèi)對(duì)相同試樣所做多個(gè)單次測(cè)試結(jié)的分散性，用測(cè)試結(jié)果變異系數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)（可參考GB/T 27404附錄F.3）。再現(xiàn)性（reproducibility）是指在正常和正確操作情況下，用相同的方法、同一試驗(yàn)材料，在不同的條件下獲得的單個(gè)結(jié)果之間的一致程度[7-9]。不同的條件指不同操作者、不同實(shí)驗(yàn)室、不同或相同的時(shí)間，對(duì)不同試樣所做多個(gè)單次測(cè)試結(jié)果，在95%置信概率水平獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的最大差值[10-12]。在實(shí)例中選擇了用加標(biāo)回收率評(píng)定正確度，加標(biāo)回收檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性評(píng)定精密度。

阿維菌素加標(biāo)試驗(yàn)方案：樣品為菠菜;稱樣量20 g;標(biāo)液濃度4.0 μg/mL，加入100 μL（0.40 μg）;加標(biāo)量0.020 mg/kg;7組平行樣。

7組平行樣的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。平均值x為0.018 1;標(biāo)準(zhǔn)偏差S為0.001 09;變異系數(shù)（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）CV為6.0%。

4? ? 結(jié)論

以阿維菌素農(nóng)藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)變更為實(shí)例，對(duì)比了標(biāo)準(zhǔn)變化內(nèi)容，從“人、機(jī)、物、法、環(huán)”5個(gè)方面分析實(shí)驗(yàn)室是否滿足新標(biāo)準(zhǔn)要求，設(shè)計(jì)了線性范圍、檢出限、定量限、正確度、精密度等方法驗(yàn)證參數(shù)的試驗(yàn)方案，通過(guò)對(duì)施工檢驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)符合相關(guān)要求，可以證明實(shí)驗(yàn)室具備此標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)能力，以期為大家開(kāi)展化學(xué)分析方法發(fā)生變更時(shí)的驗(yàn)證工作提供參考。此外，試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)可從再現(xiàn)性、基質(zhì)效應(yīng)、測(cè)量不確定度評(píng)定等方面做繼續(xù)探析。

5? ? 參考文獻(xiàn)

[1] 馮秀梅，陳君.化學(xué)分析方法驗(yàn)證和確認(rèn)的應(yīng)用研究[J].中國(guó)無(wú)機(jī)分析化學(xué)，2018，8（5）：61-66.

[2] 許明哲，黃寶斌，楊青云，等.分析方法確認(rèn)內(nèi)容介紹[J].藥物分析雜志，2015，35（1）：183-189.

[3] 郟征偉，苗水，毛秀紅，等.食品分析水平測(cè)試計(jì)劃農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證中分析方法的選擇及其結(jié)果評(píng)價(jià)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（3）：293-298.

[4] 李淑敏，李靜，應(yīng)波.離子色譜法同時(shí)測(cè)定飲用水中三價(jià)鉻與六價(jià)鉻分析方法驗(yàn)證[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（10）：2403-2405.

[5] 侯雪，鄭衛(wèi)東，胡莉，等.淺析化學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2016，35（2）：255-258.

[6] 田強(qiáng)兵.分析化學(xué)中檢出限和測(cè)定下限的探討[J].化學(xué)分析計(jì)量，2007（3）：72-73.

[7] 高婷婷，杜鵬，徐澤瓊，等.污水中常見(jiàn)違禁藥物分析方法優(yōu)化及驗(yàn)證[J].環(huán)境科學(xué)，2017，38（1）：201-211.

[8] 王思寰，吳越，王玉，等.藥品分析方法驗(yàn)證要點(diǎn)的討論[J].藥物分析雜志，2018，38（9）：1646-1651.

[9] 魯靜，付凌燕，王旭.質(zhì)量分析方法驗(yàn)證中檢出限和定量限測(cè)定方法探討[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2012，13（1）：33-35.

[10] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南：GB/T 27417-2017[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[11] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)：GB/T 27404-2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[12] 逄瑜，于新蘭，李海芳，等.農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果不確定度評(píng)定方法指南介紹[J].中國(guó)新藥雜志，2018，27（1）：17-21.