冰敷與熱敷分別聯(lián)合推拿對(duì)家兔急性骨骼肌損傷修復(fù)作用的比較

李應(yīng)志， 張吉， 邵長(zhǎng)麗， 邰先桃， 王春林， 艾健

（1.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南昆明 650500；2.云南中醫(yī)藥大學(xué)附屬云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南昆明 650500）

在運(yùn)動(dòng)損傷中，35%～55%是軟組織損傷[1]。一般認(rèn)為，急性損傷后的24 h內(nèi)不可以熱敷，只能冰敷[2]，冰敷可以消腫止痛[3]，熱敷會(huì)加重腫脹[4]。也有研究認(rèn)為，冰敷雖然會(huì)減少炎癥反應(yīng)[5，6]，但同時(shí)也會(huì)減慢損傷組織的修復(fù)速度[7]。中醫(yī)傳統(tǒng)外治療法中沒有冰敷的概念，多強(qiáng)調(diào)熱敷療法。但是不論是冰敷還是熱敷，關(guān)于兩者的作用原理都缺少可靠的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，為此本課題組設(shè)計(jì)了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，以探究冰敷、熱敷在急性骨骼肌損傷后的應(yīng)用效應(yīng)及機(jī)理，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 30只6月齡雄性新西蘭家兔，體質(zhì)量（2.66±0.21）kg，由昆明楚商科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）K2018-0001。家兔常規(guī)分籠飼養(yǎng)，每籠2只，均以標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物飼料喂養(yǎng)，自由飲水。室溫保持在20～25℃，相對(duì)濕度50%～55%，光照及黑暗的環(huán)境各12 h。

1.2 試劑與儀器 總RNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司）；TaKaRa PrimeScript RT Master Mix（TaKaRa公司，批號(hào)：DRR036A）；TaKaRa SYBR Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）（TaKaRa公司，批號(hào)：DRR820A）。Thermo NanoDrop超微量核酸蛋白檢測(cè)儀（美國(guó)Thermo Scientific公司）；Veriti型ABI PCR儀（美國(guó)Applied Biosystems公司）；MX3000P型安捷倫核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀（美國(guó)安捷倫公司）；RM2245半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）。

1.3 動(dòng)物分組與造模 將30只新西蘭家兔隨機(jī)分為空白組、損傷對(duì)照組、冰敷+推拿組、熱敷+推拿組、推拿組等5組，每組6只。除空白組外，其他各組家兔均造成急性骨骼肌損傷模型。參照胡軍等[8]的家兔骨骼肌鈍挫傷模型方法，本研究進(jìn)行了改良。具體操作方法：將家兔右下肢腓腸肌的肌腹處用8%硫化鈉脫毛劑脫毛后，固定在兔盒內(nèi)，再將右下肢固定在造模打擊臺(tái)上，在家兔腓腸肌最高點(diǎn)處用記號(hào)筆標(biāo)記“+”號(hào)，用重力錘對(duì)準(zhǔn)標(biāo)記從高處自由落體造成打擊傷。打擊物質(zhì)量為500 g，下落高度為50 cm，連續(xù)打擊3次。為減少誤差，所有造模均由同一人完成。

1.4 干預(yù)方法 為盡量保證手法的統(tǒng)一性，參與手法干預(yù)的人員為1名有10年工作經(jīng)驗(yàn)的推拿醫(yī)生，采取分批造模和取材。

1.4.1 冰敷+推拿組 傷后立刻行冰敷治療：將碎冰塊包在密封塑料袋內(nèi)，置于受傷的軟組織局部，5 min后拿去，共敷3 d。第3天冰敷后開始推拿治療：先用按揉法作用于家兔委中穴1 min，而后在損傷的部位按揉法操作10 min。自第4天起，該組家兔只進(jìn)行推拿干預(yù)，不再使用冰敷療法。推拿治療為每天1次，推拿至第13天。

1.4.2 熱敷+推拿組 傷后立刻行熱敷治療：將毛巾放在智能調(diào)溫煮水器中，溫度調(diào)到50℃，煮2 min，用鑷子拿出后擰干水分，將其置于家兔受傷部位，持續(xù)敷100 s，拿去該熱敷巾，立刻換上新的熱敷巾，以同樣方法重復(fù)操作3次，共計(jì)5 min。熱敷共3 d。第3天熱敷后緊接著開始做推拿干預(yù)治療，推拿干預(yù)手法同冰敷+推拿組，推拿至第13天。

1.4.3 推拿組 傷后72 h，在損傷的部位用按揉法操作10 min，每天1次，推拿至第13天。

1.4.4 損傷對(duì)照組 傷后不做任何手法治療，每天測(cè)量家兔體質(zhì)量、腫脹度，到第14天取材。

1.4.5 空白組 不做任何干預(yù)，飼養(yǎng)14 d后取材。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 測(cè)量腫脹度 鈍挫傷后1～3 d，在做冰敷或熱敷之前（第1天即傷后30 min，第2、3天于相同時(shí)間），用細(xì)軟皮尺以“+”號(hào)為中心繞其一周測(cè)量，記錄周長(zhǎng)讀數(shù)。做完冰敷或熱敷后，再次測(cè)量同一部位周長(zhǎng)。腫脹度=冰敷或熱敷前下肢周長(zhǎng)-冰敷或熱敷后下肢周長(zhǎng)。為了盡量減少測(cè)量誤差，共測(cè)量3次取平均值。

1.5.2 體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比 取材前用電子稱稱取家兔體質(zhì)量。而后經(jīng)耳緣靜脈注入10 mL空氣致栓塞死亡后即刻取損傷側(cè)腓腸肌，在電子稱上稱取質(zhì)量并記錄。把腓腸肌受傷最明顯處作為最佳取材部位，取約黃豆大小2塊，一塊放入體積分?jǐn)?shù)10%中性福爾馬林溶液中固定，另一塊放入凍存管密封后放進(jìn)液氮罐。待所有家兔取材完成后統(tǒng)一對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)試。

1.5.3 腓腸肌組織病理 將腓腸肌組織修切成小塊放入體積分?jǐn)?shù)10%中性福爾馬林溶液中固定，然后進(jìn)行包埋、切片、蘇木素—伊紅（HE）染色，顯微鏡下觀察腓腸肌組織病理變化。

1.5.4 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）法檢測(cè)胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）和成肌調(diào)節(jié)因子（MyoD）mRNA表達(dá) 稱取適量腓腸肌組織，加入1 mL TRIZOL試劑冰上勻漿后，按照總RNA提取試劑盒說(shuō)明書方法進(jìn)行操作?？俁NA提取完后，于超微量核酸蛋白檢測(cè)儀測(cè)定所提取RNA的濃度、純度[顯示D（260 nm）/D（280 nm）在 1.8～2.0 之間]。取總 RNA 1 μg，按照TaKaRa公司RT-reagent逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)體系為PrimeScript RT Master Mix 2 μL，500 ng樣本對(duì)應(yīng)的總RNA體積，加ddH2O至10 μL，反應(yīng)條件：37℃ 15 min，85℃ 5 s。按TaKaRa公司SYBR Premix Ex Taq熒光定量試劑說(shuō)明書進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，以SYBR Green為熒光標(biāo)記物，β-actin為內(nèi)參對(duì)照。取2 μL cDNA加入20 μL反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系：SYBR Premix Ex TaqⅡ12.5 μL，Primer F 1 μL。Primer R 1 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 8.5 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 15 s；62℃20 s。共40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后關(guān)閉儀器，分析數(shù)據(jù)。MYOD1引物序列：上游，5’-CTCCGAGACGTGGACTTGA-3’；下游，5’-CAGA TCCGAGGAGTCGAAAC-3’。 擴(kuò) 增 長(zhǎng) 度 99 bp。IGF-1引物序列：上游，5’-ATTTCAACAAGCCC ACAGGA-3’；下游，5’-GCCTCCTCAGATCACAG CTC-3’。擴(kuò)增長(zhǎng)度99 bp。GAPDH引物序列：上游，5’-CTCCTGCGACTTCAACAGTG-3’；下游，5’-TGCTGTAGCCAAATTCGTTG-3’。擴(kuò)增長(zhǎng)度99 bp。擴(kuò)增反應(yīng)完成后，結(jié)果采用相對(duì)定量法2-ΔΔCt，計(jì)算各基因相對(duì)表達(dá)量（p）。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較采用單因素方差分析（one way ANOVA），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模結(jié)果 造模后的家兔下肢均腫脹明顯，皮下有明顯瘀青。第2天任取1只，經(jīng)耳緣靜脈注入空氣栓塞處死后即刻取材，經(jīng)HE染色處理后，結(jié)果顯示，和正常家兔腓腸肌組織比較，造模組家兔有明顯的肌纖維斷裂、腫脹，間質(zhì)中滲出大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞，部分肌絲破壞損傷，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。表明造模成功。結(jié)果見圖1。

2.2 冰敷、熱敷家兔第1～3天下肢腫脹度比較 造模后的1～3 d，結(jié)果顯示：冰敷家兔第1天下肢腫脹度較熱敷組、損傷對(duì)照組增加（P＜0.05），第2、3天下肢腫脹度與其他2組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。熱敷家兔第1天下肢腫脹度無(wú)變化，第2、3天腫脹度稍增加，但與其他2組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。表明冰敷在損傷早期的確有消腫的作用，熱敷則沒有加重?fù)p傷早期骨骼肌的腫脹度。

圖1 傷后第2天家兔腓腸肌組織病理變化（HE染色，×20）Figure 1 The changes of the pathological features of rabbit gastrocnemius tissues on the second day after injury（by HE staining，×20）

表1 冰敷、熱敷第1～3天家兔下肢腫脹度比較Table 1 Comparison of the swelling degrees of rabbit lower limbs during 1-3 day（s）of ice compress and hot compress （±s，l/mm）

表1 冰敷、熱敷第1～3天家兔下肢腫脹度比較Table 1 Comparison of the swelling degrees of rabbit lower limbs during 1-3 day（s）of ice compress and hot compress （±s，l/mm）

①P＜0.05，與損傷對(duì)照組比較；②P＜0.05，與熱敷+推拿組比較

第3天0.0±0.0 0.2±0.1 0.1±0.0組別損傷對(duì)照組冰敷+推拿組熱敷+推拿組N666第1天0.0±0.0 0.8± 0.0①②0.0±0.0第2天0.0±0.0 0.0±0.0 0.1±0.1

2.3 各組家兔體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比 該比值可反映腓腸肌后期恢復(fù)情況，比值越小說(shuō)明腓腸肌恢復(fù)得越好。表2結(jié)果顯示：與推拿組比較，熱敷+推拿組體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與空白組比較，損傷對(duì)照組、推拿組、冰敷+推拿組、熱敷+推拿組體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示單純的推拿、冰敷+推拿療法在恢復(fù)肌質(zhì)量方面無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)，熱敷聯(lián)合推拿對(duì)腓腸肌質(zhì)量較其他組更有一定的積極作用。

表2 各組家兔第14天體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比的比較Table 2 Comparison of the ratio of body mass to wet mass of gastrocnemius muscles in various groups on the fourteenth day （±s）

表2 各組家兔第14天體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比的比較Table 2 Comparison of the ratio of body mass to wet mass of gastrocnemius muscles in various groups on the fourteenth day （±s）

①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與推拿組比較

體質(zhì)量與腓腸肌濕質(zhì)量比136.547±3.608 169.225±10.521①184.542±6.510①181.490±28.648①165.805± 11.573①②組別空白組損傷對(duì)照組推拿組冰敷+推拿組熱敷+推拿組N66666

2.4 各組家兔腓腸肌病理變化比較 治療后第14天取各組家兔腓腸肌組織，經(jīng)HE染色，結(jié)果顯示：損傷對(duì)照組可見肌纖維明顯萎縮、壞死，肌纖維間隙變寬，炎癥反應(yīng)強(qiáng)烈；冰敷+推拿組亦可見肌纖維明顯萎縮、壞死，肌纖維間隙變寬及強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)，但可見明顯的新生血管生成。熱敷+推拿組肌纖維明顯恢復(fù)，肌纖維排列緊密整齊；推拿組肌纖維間可見明顯的結(jié)締組織填充。見圖2。表明熱敷聯(lián)合推拿的方法較冷敷聯(lián)合推拿及單純的推拿更有利于家兔腓腸肌鈍挫傷的恢復(fù)。

圖2 各組家兔腓腸肌病理變化比較（HE染色，×20）Figure 2 Comparison of the pathological features of rabbit gastrocnemius tissues in various groups（by HE staining，×20）

2.5 各組家兔第14天IGF-1、MyoD mRNA表達(dá)量比較 表3結(jié)果顯示：熱敷+推拿組IGF-1 mRNA表達(dá)水平較其他各組明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。熱敷+推拿組MyoD mRNA表達(dá)水平高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；熱敷+推拿組MyoD mRNA表達(dá)水平高于推拿組和冰敷+推拿組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明熱敷聯(lián)合推拿法在促傷后骨骼肌修復(fù)過(guò)程中IGF-1 mRNA、MyoD mRNA表達(dá)上有一定的優(yōu)勢(shì)，提示這種方法促進(jìn)鈍挫傷骨骼肌的修復(fù)可能優(yōu)于冰敷+推拿組、單純推拿組。

表3 各組家兔第14天IGF-1、MyoD mRNA表達(dá)量比較Table 3 Comparison of the mRNA expression levels of IGF-1 and MyoD in various groups on the fourteenth day （±s）

①P＜0.05，與空白組比較；②P＜0.05，與損傷對(duì)照組比較；③P＜0.05，與推拿組比較；④P＜0.05，與冰敷+推拿組比較

MyoD mRNA 0.485±0.303 0.831±0.390 1.083±0.858 1.183±0.493 2.579±0.959①組別空白組損傷對(duì)照組推拿組冰敷+推拿組熱敷+推拿組N66666 IGF-1 mRNA 0.208±0.0471 0.823±0.468 1.571±1.111 2.373±1.876 4.846 ± 2.373①②③④

3 討論

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：急性期損傷后30 min，冰敷可以起到消腫作用，但是經(jīng)冰敷后的家兔在后期恢復(fù)過(guò)程中無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)。急性骨骼肌損傷后熱敷治療沒有加重家兔下肢的腫脹程度，在后期恢復(fù)中似乎更利于軟組織的修復(fù)。另外，本課題組在干預(yù)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)冰敷后的家兔腓腸肌內(nèi)硬塊較多，取材時(shí)發(fā)現(xiàn)多為變性的軟組織。

冰敷療法在軟組織損傷方面被廣泛應(yīng)用。一般認(rèn)為，冰敷可以消腫止痛[9]，可以降低皮膚溫度[10]，減少組織損傷后帶來(lái)的炎癥反應(yīng)[11]；但是對(duì)于該療法缺少?gòu)?qiáng)有力的證據(jù)[12]。Fullam等[13]對(duì)29位踝扭傷患者進(jìn)行冰敷療法治療前后進(jìn)行星形探足平衡測(cè)試，結(jié)果顯示冰敷后踝關(guān)節(jié)穩(wěn)定性變差。Sloan等[14]觀察接受冰敷和非冰敷療法的2組急性踝扭傷患者，在腫脹消除方面沒有明顯的區(qū)別。Laba等[15]也得到了同樣的結(jié)論。Coté等[16]則認(rèn)為冰敷在改善腫脹方面比熱敷有優(yōu)勢(shì)。Basur等[17]觀察到冰敷聯(lián)合加壓包扎對(duì)踝關(guān)節(jié)扭傷的消腫作用優(yōu)于單純加壓包扎。Hocutt等[18]分別用冰敷和熱敷用于36 h內(nèi)踝扭傷的患者，發(fā)現(xiàn)冰敷組恢復(fù)功能的時(shí)間約為13.2 d，而熱敷組平均約為33.3 d。Takagi等[7]研究發(fā)現(xiàn)冰敷會(huì)延緩骨骼肌修復(fù)，會(huì)造成膠原蛋白合成增多。但Vieira Ramos等[19]通過(guò)對(duì)大鼠脛骨前肌造成類似打擊傷，發(fā)現(xiàn)冰敷療法可以消除腫脹。在本實(shí)驗(yàn)中，家兔在損傷后30 min開始出現(xiàn)明顯的腫脹，此時(shí)分別用熱敷和冰敷療法，證明在傷后30 min冰敷有利于傷后下肢的消腫，但24 h后冰敷和熱敷對(duì)改善軟組織的腫脹度沒有差別；而從第14天各組HE染色病理結(jié)果可見，冰敷+推拿組促進(jìn)骨骼肌修復(fù)作用弱于熱敷+推拿組。有研究指出，冰敷的作用機(jī)制是通過(guò)降低皮膚溫度，減少組織液滲出等來(lái)達(dá)到消腫作用[20]。但從干預(yù)過(guò)程中觀察發(fā)現(xiàn)，冰敷后家兔傷肢肌肉內(nèi)硬結(jié)明顯多于其他各組，在后期取材中發(fā)現(xiàn)這些組織變性為結(jié)締組織，這說(shuō)明冰敷療法對(duì)促進(jìn)組織的炎性物質(zhì)代謝吸收可能不利。Takagi等[7]研究亦發(fā)現(xiàn)，冰敷后的損傷肌肉內(nèi)，膠原蛋白沉積多于非冰敷組，肌纖維的直徑也較非冰敷組細(xì)，生長(zhǎng)因子TGF-β1和IGF-I的表達(dá)也滯后于非冰敷組1～2 d，提示冰敷會(huì)減慢軟組織的恢復(fù)速度。

推拿對(duì)骨骼肌損傷修復(fù)和運(yùn)動(dòng)后肌肉疲勞的恢復(fù)都有很大幫助[21]，這也是本研究選擇手法作為后期干預(yù)的原因。相關(guān)研究表明，治療運(yùn)動(dòng)創(chuàng)傷的方法大概有65種，其中使用最多而且療效又好的為手法治療，占34%，居于首位，總有效率為76.5%[22]。在骨骼肌急性鈍挫傷后，超早期推拿可增加膜修復(fù)蛋白dysferlin的表達(dá)，促進(jìn)破裂的肌細(xì)胞膜及時(shí)修復(fù)，可能有利于損傷肌細(xì)胞的修復(fù)，從而幫助受損的骨骼肌修復(fù)[23]。推拿能影響人骨骼肌細(xì)胞中鈣離子的信號(hào)通路，從而激發(fā)損傷細(xì)胞修復(fù)的生物學(xué)效應(yīng)[24]。本研究中，單純的推拿也可以較好地改善家兔下肢腫脹，但推拿聯(lián)合熱敷或冷敷療法對(duì)家兔骨骼肌的修復(fù)作用較單純的手法更有優(yōu)勢(shì)。

MyoD是成肌調(diào)節(jié)因子家族中的成員之一，在胚胎發(fā)育過(guò)程中決定著干細(xì)胞向肌細(xì)胞方向定向分化。損傷后的骨骼肌再生與修復(fù)都受MyoD影響，而MyoD參與骨骼肌的激活和分化。MyoD現(xiàn)在被認(rèn)為是作為主要的肌生成控制器，在由KAP1磷酸化介導(dǎo)的開/關(guān)轉(zhuǎn)換關(guān)聯(lián)中起作用。有研究表明，冰敷療法與損傷對(duì)照組相比，并不能改變骨骼肌中MyoD的表達(dá)[19]。本研究中，熱敷+推拿組在促M(fèi)yoD生成方面優(yōu)于冰敷+推拿組，表明在組織修復(fù)方面，熱敷可能優(yōu)于冰敷，這提示冰敷在提高骨骼肌的MyoD mRNA表達(dá)方面沒有優(yōu)勢(shì)，而傳統(tǒng)的熱敷療法可能會(huì)增加MyoD基因表達(dá)。

IGF-1主要作為內(nèi)分泌激素以旁分泌/自分泌方式在靶組織中產(chǎn)生，IGF-1可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育，特別是在神經(jīng)細(xì)胞中，促進(jìn)細(xì)胞DNA合成[25]。IGF-1是單鏈多肽，由70個(gè)氨基酸組成，它在骨骼肌發(fā)育階段高水平表達(dá)，而在成熟骨骼肌中的表達(dá)水平卻很低，對(duì)細(xì)胞分化、增殖和個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育起著重要的促進(jìn)作用。IGF-1能增加骨骼肌的血液供應(yīng)，促進(jìn)骨骼肌蛋白合成，抑制肌動(dòng)蛋白分解。肌肉損傷可引起IGF-1 mRNA的表達(dá)水平應(yīng)激性增加，研究認(rèn)為，IGF-1通過(guò)激活衛(wèi)星細(xì)胞促進(jìn)肌肉再生，阻止肌肉功能損傷，并對(duì)骨骼肌損傷修復(fù)起加速作用[26]。Takagi等[7]研究發(fā)現(xiàn)，冰敷會(huì)造成骨骼肌當(dāng)中生長(zhǎng)因子（TGF）-1和IGF-I的表達(dá)滯后1～2 d。本研究中，冰敷+推拿組家兔的IGF-1的mRNA表達(dá)低于熱敷+推拿組，表明與傳統(tǒng)的熱敷相比，冰敷+推拿組在促進(jìn)IGF-1 mRNA的表達(dá)上沒有優(yōu)勢(shì)，其他各組的IGF-1 mRNA表達(dá)也低于熱敷組，這提示早期熱敷可能會(huì)對(duì)軟組織腫脹的遠(yuǎn)期恢復(fù)有益。

綜上所述，本研究結(jié)果提示在軟組織鈍挫傷的早期，冰敷減輕軟組織腫脹的療效是可靠的，在后期的組織恢復(fù)上并沒有明顯的優(yōu)勢(shì)。因此，在針對(duì)軟組織的急性鈍挫傷后，先冰敷后熱敷后結(jié)合推拿治療可能是比較好的治療方案，相關(guān)的作用機(jī)制還要結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究來(lái)深入探索。