重慶地區(qū)高脂血癥人群ApoE/SLCO1B1基因多態(tài)性與他汀類藥物的相關(guān)性研究

陳 敏，段泰豪，李勤琴，鄧少麗，陳 鳴,唱 凱

(陸軍軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科，重慶 400042)

高脂血癥是指由于機(jī)體脂質(zhì)代謝或運轉(zhuǎn)異常導(dǎo)致血漿內(nèi)一種或多種脂質(zhì)高于正常值的一類疾病，常見的有高三酰甘油血癥和高膽固醇血癥，主要危害為誘發(fā)和加重動脈粥樣硬化及并發(fā)各類動脈栓塞性疾病，包括冠心病、心肌梗死、腦栓塞、腎動脈栓賽等。冠狀動脈粥樣硬化性心血管病是一種具有高患病率、高致殘率和高病死率特性的疾病，是嚴(yán)重威脅人類健康的主要殺手之一[1-2]。他汀類藥物是目前最能有效降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的降脂藥物，成為了世界上臨床使用最廣泛的降脂藥。但使用他汀類藥物同樣可能出現(xiàn)不良反應(yīng)，常見的有肝功能異常、肌病及橫紋肌溶解、消化道反應(yīng)等，最嚴(yán)重的不良反應(yīng)當(dāng)屬橫紋肌溶解。大量應(yīng)用他汀類藥物后人們發(fā)現(xiàn)不同個體間在降脂效果及不良反應(yīng)方面有相當(dāng)大的差異，研究表明載脂蛋白E(ApoE)和SLCO1B1基因是影響他汀類藥物藥效動力學(xué)和藥代動力學(xué)的兩個重要因素[3-4]。本研究通過測定重慶地區(qū)高脂血癥人群ApoE和SLCO1B1基因型及分析兩種基因的分布和相互關(guān)系來解析本地區(qū)高脂血癥患者使用他汀類藥物的合理性，為重慶地區(qū)臨床使用他汀類藥物進(jìn)行調(diào)脂療法的個體化治療方案提供一定的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年7-12月來中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院血脂異常患者497例，包括空腹血清總膽固醇(TC)>5.2 mmol/L；三酰甘油(TG)>1.7 mmol/L； LDL-C>3.4 mmol/L；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)<1.0 mmol/L，男252例，女245例，平均年齡(66±11)歲。

1.2 儀器與試劑 人血基因組DNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司、人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒購自武漢友芝友醫(yī)療科技有限公司及BIO-RAD CFX-96實時熒光定量PCR儀。

1.3 方法 提取DNA及位點檢測，按照說明書提取外周靜脈血基因組DNA，采用PCR-熒光探針法測定ApoE基因ApoE2(526C>T)、ApoE4(388T>C)位點和SLCO1B1基因SLCO1B1*1b(388A>G)、SLCO1B1*5(521T>C)位點多態(tài)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 ApoE和SLCO1B1基因型和等位基因頻率均應(yīng)用頻率計數(shù)法計算。按ApoE基因型分為療效良好組(E2/E2,E2/E3)、療效正常組(E2/E4,E3/E3)、療效不良組(E3/E4,E4/E4)，并計算3組基因型頻率；再將SLCO1B1按橫紋肌溶解癥和肌病風(fēng)險分為正常風(fēng)險組(*1a/*1a，*1a/*1b,*1b/*1b)、中度風(fēng)險組(*1a/*5，*1a/*15，*1b/*15)、高度風(fēng)險組(*5/*5，*5/*15，*15/*15)，計算出3個療效組間SLCO1B1基因型頻率和等位基因頻率并進(jìn)行比較及分析。

2 結(jié) 果

2.1 ApoE和SLCO1B1基因型檢測結(jié)果 使用激發(fā)波長450～490 nm(FAM)和激發(fā)波長515～535 nm(VIC)通道采集多態(tài)性ApoE和SLCO1B1基因擴(kuò)增熒光信號，使用激發(fā)波長560～590 nm(ROX)通道采集內(nèi)標(biāo)基因擴(kuò)增的熒光信號，ApoE和SLCO1B1的各種基因型判讀見表1、2。

表1 ApoE基因型結(jié)果判讀

2.2 ApoE和SLCO1B1基因型和等位基因頻率 ApoE基因型和等位基因頻率：E2/E2型1.00%，E2/E3型12.47%，E3/E3型66.80%，E3/E4型16.50%，E2/E4型2.01%，E4/E4型1.21%；APOE等位基因頻率：E2型8.25%，E3型 81.29%,E4 型10.46%。見表3。

SLCO1B1基因型頻率：*1a/*1a型6.24%，*1a/*1b型30.18%，*1b/*1b型42.66%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型3.02%，*1b/*15型16.10%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*15型1.81%；SLCO1B1等位基因頻率：*1b型65.79%，*1a型22.84%，*5型0.00%，*15型11.37%。見表4。

表2 SLCO1B1基因型結(jié)果判讀

表3 ApoE中526C>T與388T>C頻率分布

表4 SLCO1B1中388A>G與521T>C頻率分布

2.3 療效良好組、療效正常組和療效不良組中SLCO1B1基因型的分布情況 根據(jù)ApoE基因型的他汀類藥物療效不同將其分為3個組，分別為療效良好組(E2/E2、E2/E3)：*1a/*1a型10.45%，*1a/*1b型29.85%，*1b/*1b型41.79%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型2.99%，*1b/*15型14.93%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*150.00%；療效正常組(E2/E4、E3/E3)：*1a/*1a型5.85%，*1a/*1b型29.24%，*1b/*1b型43.86%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型3.22%，*1b/*15型15.50%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*152.34%；療效不良組(E3/E4、E4/E4)：*1a/*1a型4.55%，*1a/*1b型34.09%，*1b/*1b型36.36%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型4.55%，*1b/*15型19.32%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*15 1.14%。見表5。

表5 療效良好組、療效正常組和療效不良組患者中

3 討 論

他汀類藥物是一線調(diào)脂用藥，如今得到廣泛應(yīng)用，其降脂療效及其他效果顯著降低了心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險。他汀類藥物能有效抑制各類膽固醇的合成，特別對降低LDL-C水平有良好的效果，還具有改善血管內(nèi)皮功能、抗血小板聚集、穩(wěn)定粥樣硬化斑塊、抑制血栓形成和抑制平滑肌細(xì)胞增殖及遷移等其他多效性[2,5]。研究發(fā)現(xiàn)，ApoE基因多態(tài)性與他汀類藥物療效具有相關(guān)性[6-7]，ApoE4攜帶者患冠心病風(fēng)險較高[8]，且他汀類藥物對此類患者往往療效不佳或無療效，而ApoE3攜帶者療效正常，對ApoE2攜帶者的降脂作用最強[9-12]；故本研究中按照ApoE基因型分為療效良好組(E2/E2,E2/E3)、療效正常組(E2/E4,E3/E3)、療效不良組(E3/E4,E4/E4)，3組的比例分別為療效良好組13.47%、療效正常組68.82%、療效不良組17.71%，ApoE等位基因頻率為E2 8.25%，E3 81.29%，E4 10.46%。ApoE4等位基因頻率為10.46%，療效不良組比例為17.71%，ApoE4等位基因頻率和療效不良組比例都比較低；ApoE2和ApoE3等位基因頻率共89.54%，療效良好組和療效正常組的人數(shù)占比82.29%，這說明重慶地區(qū)的高脂血癥人群適合使用他汀類藥物進(jìn)行降脂治療。

近年來，隨著他汀類藥物的廣泛使用，其不良反應(yīng)也引起了人們的關(guān)注[13]，患者服用他汀類藥物后部分會出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)、肝功能異常、肌損害等不良反應(yīng)，肌損害常見表現(xiàn)為無力、肌痛、肌炎，更嚴(yán)重的是出現(xiàn)橫紋肌溶解征，這也是他汀類藥物的最嚴(yán)重的不良反應(yīng)[14-15]。SLCO1C1基因具有遺傳多態(tài)性，其中388A>G，521T>C是兩種常見的單核苷酸多態(tài)性，可以形成四種多態(tài)性SLCO1B1*1a(388A-521T)、*1b(388G-521T)、*5(388A-521T)、*15(388G-521C)。

SLCO1B1基因的突變會導(dǎo)致其編碼的OATP1B1轉(zhuǎn)運蛋白活性減弱[16]，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險，尤其521T>C和橫紋肌溶解和肌病不良反應(yīng)密切相關(guān)[17-21]。*1a/*1a型、*1a/*1b型、*1b/*1b型3種基因型為正常風(fēng)險，比例為79.08%；*1a/*5型、*1a/*15型、*1b/*15型3種基因型為中等風(fēng)險，比例為19.12%；*5/*5型 、*5/*15型 、*15/*15 型三種基因型為高度風(fēng)險，比例為1.80%；SLCO1B1等位基因頻率：*1b 65.79%，*1a 22.84%，*50.00%，*1511.37%。正常風(fēng)險基因型占比很大且高度風(fēng)險基因型只有1.80%，SLCO1B1*5和*15等位基因頻率僅為11.37%，可看出重慶地區(qū)大多數(shù)高脂血癥人群使用他汀類藥物風(fēng)險正常，小部分會有中等風(fēng)險，高等風(fēng)險極少。

本研究結(jié)果表明療效良好組、正常組和不良組中SLCO1B1基因型分布整體均勻，沒有顯著差別。療效良好組中*1a/*1a型、*1a/*1b型、*1b/*1b型3種正常風(fēng)險基因型占82.09%，*1a/*5型、*1a/*15型、*1b/*15型3種中等風(fēng)險基因型占17.91%，*5/*5型 、*5/*15型 、*15/*15 型3種高度風(fēng)險基因型占0%；療效正常組中正常風(fēng)險基因型占78.95%，中等風(fēng)險基因型占18.72%，高等風(fēng)險基因型占2.33%；療效不良組中正常風(fēng)險基因型占75.00%，中等風(fēng)險基因型占23.87%，高等風(fēng)險基因型僅有一例并占1.13%。上述研究結(jié)果表明重慶地區(qū)高脂血癥人群使用他汀類藥物療效良好或正常且不良反應(yīng)正常風(fēng)險的比例很高，療效不良且中等風(fēng)險有21例，療效不良且高等風(fēng)險僅有1例。綜上所述，他汀類藥物依然是重慶地區(qū)高脂血癥大多數(shù)人群降脂治療的合理藥物，但應(yīng)綜合考慮患者的自身情況和個體化差異來調(diào)整用藥類型和劑量。

4 結(jié) 論

根據(jù)重慶地區(qū)高脂血癥人群中的APOE及SLCO1B1基因多態(tài)性的分布發(fā)現(xiàn)，該人群中對他汀類藥物代謝正常(E3攜帶者)且轉(zhuǎn)運正常(*1a 、*1b攜帶者)的人群占大部分比例；但是代謝慢(E4攜帶者)且轉(zhuǎn)運異常(*5、*15攜帶者)的人群也占了一定比例，表明重慶地區(qū)的高血脂人群適合使用他汀類藥物進(jìn)行治療，可通過基因型別調(diào)整藥物劑量，以降低不良反應(yīng)的發(fā)生，促進(jìn)其合理利用。