miR-7靶向Sp3對(duì)急性胰腺炎腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究

熊 凱, 陳 建, 傅慶洋

熊凱, 傅慶洋, 義烏市中心醫(yī)院急診科 浙江省義烏市 322000

陳建, 義烏市中心醫(yī)院胃腸外科 浙江省義烏市 322000

核心提要： miR-7在雨蛙素構(gòu)建的急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)模型細(xì)胞中高表達(dá), miR-7靶向負(fù)調(diào)控特異性蛋白3(specific protein 3, Sp3), 敲減miR-7表達(dá)可以通過上調(diào)Sp3抑制AP腺泡細(xì)胞凋亡.

0 引言

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是臨床上常見的一種急腹癥, 其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì), 死亡率也一直較高[1].AP的致病因素很多, 發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚, 有研究發(fā)現(xiàn)腺泡細(xì)胞凋亡和AP的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān), 可以通過促進(jìn)腺泡細(xì)胞的凋亡減輕AP的嚴(yán)重程度[2]. 抑制GRP78可以促進(jìn)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡, 減輕雨蛙素誘導(dǎo)的胰腺炎癥的嚴(yán)重程度[3]. miR-7是miRNA家族的成員之一, 不僅參與多種組織器官的發(fā)育, 且與臨床相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]. miR-7在胃炎組織中miR-7低表達(dá), 下調(diào)其表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞增殖, 引起炎癥促使癌癥發(fā)生[5]. 上調(diào)miR-7的表達(dá)能抑制人胰腺癌AsPC-1和BxPC-3細(xì)胞增殖和侵襲能力, 促進(jìn)細(xì)胞凋亡[6]. miR-7在小鼠急性肺損傷模型中上調(diào)表達(dá), 通過調(diào)控KLF4可以改善急性肺損傷[7]. miR-7在腎癌組織中高表達(dá), 可作為腎癌早期診斷、治療乃至預(yù)后判斷的新的生物標(biāo)記物[8]. mmiR-7在口腔鱗狀細(xì)胞癌中低表達(dá), 與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程高度相關(guān)[9]. 此外miRNA也與AP的診斷和預(yù)后相關(guān)[10]. 研究發(fā)現(xiàn)miR-494在AP條件下表達(dá)升高, 可以抑制胰腺腺泡細(xì)胞凋亡[11]. miR-216a在AP中高表達(dá), 可作為生物標(biāo)記物用來早期診斷[12]. 而miR-7在AP中的研究較少, 基于此,本實(shí)驗(yàn)旨在研究miR-7對(duì)AP腺泡細(xì)胞增殖和凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制, 為AP的早期診斷、治療和預(yù)后提供新靶點(diǎn)和臨床依據(jù).

1 材料和方法

1.1 材料 大鼠胰腺腺泡AR42J購自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫. 雨蛙素購自美國(guó)Sigma公司; 胎牛血清、RPMI 1640培養(yǎng)基均購自美國(guó)Gibco公司; RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和qPCR試劑盒購自日本Takara公司; 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑盒購自上海聯(lián)科生物技術(shù)有限公司; Western Blot試劑盒購自上海信裕生物技術(shù)有限公司; BCA試劑盒、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)和碘化丙錠(PI)試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所; LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒購自美國(guó)Invitrogen公司; 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒購自美國(guó)Promega公司; 細(xì)胞板、流式細(xì)胞儀購自賽默飛公司; 載體質(zhì)粒均由金瑞斯生物科技公司構(gòu)建.

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及AP建模: 大鼠胰腺腺泡AR42J細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基, 置于37 ℃,含5%CO2恒溫箱培養(yǎng). 每2-3 d傳代一次. 造模前一天取AR42J細(xì)胞接種于6孔板上, 培養(yǎng)24 h后加入15 nmol/L的雨蛙素, 震蕩混勻后繼續(xù)培養(yǎng), 取0 h、4 h、8 h、12 h、24 h時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞, 收集備用.

1.2.2 細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染: 取常規(guī)培養(yǎng)的大鼠胰腺腺泡AR42J細(xì)胞消化后接種于96孔板中, 待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn), 分為NC組、Cerulein組(添加15 nmol/L雨蛙素)、miR-con組(轉(zhuǎn)染miR-con)、miR-7組(轉(zhuǎn)染miR-7 mimics)、anti-miR-con組(轉(zhuǎn)染anti-miR-con組)、anti-miR-7組(轉(zhuǎn)染anti-miR-7).

取造模成功的AR42J細(xì)胞消化后接種于96孔板中,待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合, 更換為無血清培養(yǎng)基同步化12 h, 隨后進(jìn)行轉(zhuǎn)染. 轉(zhuǎn)染分為轉(zhuǎn)染分為Cerulein+antimiR-con組(轉(zhuǎn)染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-7組(轉(zhuǎn)染anti-miR-7)、Cerulein+pcDNA(轉(zhuǎn)染pcDNA)、Cerulein+pcDNA-特異性蛋白3(specific protein 3, Sp3)組(轉(zhuǎn)染pcDNA-Sp3 mimics)、anti-miR-7+si-con組(共轉(zhuǎn)染anti-miR-7和si-con)、anti-miR-7+si-Sp3(共轉(zhuǎn)染antimiR-7和si-Sp3)組, 轉(zhuǎn)染按照LipofectamineTM2000試劑盒進(jìn)行操作.

1.2.3 ELISA法檢測(cè)淀粉酶(amylase, AMY)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的表達(dá): 取雨蛙素處理后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞, 離心取上清, 按ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè).

1.2.4 qRT-PCR分析miR-7和Sp3 mRNA表達(dá)水平: 按照Trizol說明書提取總RNA, 用反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA, 按照AceQ qPCR SYBR?Green Mix說明書進(jìn)行qRT-PCR方法擴(kuò)增. 循環(huán)條件為95 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s;72 ℃ 30 s, 共40個(gè)循環(huán); 60 ℃延長(zhǎng)5 min. 相對(duì)表達(dá)量采用2-△△Ct法計(jì)算.

1.2.5 Western Blot檢測(cè)Sp3蛋白表達(dá): 提取各組細(xì)胞蛋白, 用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量. 各組蛋白上樣量60 μg, SDS-PAGE后, 經(jīng)電轉(zhuǎn)將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上. 用5%脫脂牛奶室溫封閉90 min, 分別加入相應(yīng)的一抗, 4 ℃孵育過夜, PBS洗滌3次, 每次5 min; 再加入相對(duì)應(yīng)的二抗室溫孵育2 h, PBS洗滌3次, 每次10 min, 后在暗室中曝光顯影, 再浸入定影, 最后洗去殘液晾干, 將膠片用Quantity One凝膠分析軟件處理, 測(cè)定各組蛋白條帶的吸光度, 以目的條帶和β-actin條帶的比值作為蛋白表達(dá)水平.

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡: 用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞, 離心收集各組細(xì)胞, PBS漂洗2次, 加結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞. 依據(jù)試劑盒說明書, 先后加入Annexin V-FITC和PI避光孵育. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)488 nm和發(fā)射波長(zhǎng)530 nm處的熒光強(qiáng)度. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

1.2.7 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-7對(duì)Sp3的靶向調(diào)控: TargetScan數(shù)據(jù)庫顯示Sp3 3′UTR區(qū)域有miR-7結(jié)合位點(diǎn). 構(gòu)建野生型和突變型基因靶點(diǎn)Sp3的3′UTR-熒光素酶表達(dá)載體(WT-Sp3和MUT-Sp3), 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期大鼠胰腺腺泡AR42J細(xì)胞接種于24孔板(5×104個(gè)/孔),待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí), 用LipofectamineTM2000將WT-Sp3和MUT-Sp3組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-con和miR-7.依據(jù)說明書要求, 使用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)儀進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)測(cè)定. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以熒光素酶活性和Renilla活性的比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 20.00進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析. 計(jì)量資料以mean±SD表示, 兩組比較行t檢驗(yàn), 多組間比較采用單因素方差分析, 以P＜0.01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)雨蛙素處理AMY, TNF-α和IL-6的表達(dá) 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)結(jié)果(圖1)顯示, 與0 h相比, 雨蛙素處理4 h、8 h、12 h、24 h后AMY、TNF-α、IL-6的表達(dá)均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì), 且均在8 h時(shí)達(dá)到最大.

2.2 雨蛙素處理AR42J后miR-7和Sp3的表達(dá) qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果(圖2A和B)顯示, 雨蛙素處理AR42J后miR-7的表達(dá)水平顯著升高, Sp3 mRNA的表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01). Western Blot檢測(cè)結(jié)果(圖2C和D)顯示, 與對(duì)照組相比, 雨蛙素處理后Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01). 可見, 雨蛙素處理AR42J促進(jìn)miR-7的表達(dá), 抑制Sp3的表達(dá).

2.3 敲減miR-7對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡的影響qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果(圖3A)顯示, 雨蛙素處理AR42J后miR-7的表達(dá)水平顯著升高, 相較于Cerulein+anti-miR-con組, Cerulein+anti-miR-7組miR-7的表達(dá)水平顯著下降(P＜0.05). 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果(圖3B)顯示, 雨蛙素處理AR42J后細(xì)胞凋亡率顯著升高, Cerulein+anti-miR-7組于Cerulein+anti-miR-con組, AR42J細(xì)胞的凋亡率顯著降低(P＜0.01). 可見, 敲減miR-7可以抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡.

2.4 miR-7靶向Sp3 通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)到Sp3與miR-7存在結(jié)合位點(diǎn)(圖4A). 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖4B)顯示, 轉(zhuǎn)染野生型Sp3基因表達(dá)載體WTSp3后, 相較于miR-con組, miR-7組AR42J細(xì)胞的熒光素酶活性顯著降低(P＜0.01); 而轉(zhuǎn)染突變型Sp3基因表達(dá)載體MUT-Sp3后, 相較于miR-con組, miR-7組AR42J細(xì)胞的熒光素酶活性差異不顯著. Western Blot檢測(cè)結(jié)果(圖4C)顯示, 相較于miR-con組, miR-7組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著降低; 而相較于anti-miR-con組,anti-miR-7組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01). 可見, miR-7可以靶向調(diào)控Sp3.

2.5 過表達(dá)Sp3抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡 Western Blot檢測(cè)結(jié)果(圖5A)顯示, 相較于NC組, Cerulein組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著降低; 相較于Cerulein+pcDNA組, Cerulein+pcDNA-Sp3組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P ＜0.01). 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果(圖5B)顯示, 相較于NC組, Cerulein組AR42J細(xì)胞凋亡率顯著升高; 相較于Cerulein+pcDNA組, Cerulein+pcDNA-Sp3組AR42J細(xì)胞凋亡率顯著降低(P＜0.01). 可見, 過表達(dá)Sp3抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡.

2.6 抑制Sp3表達(dá)逆轉(zhuǎn)敲減miR-7對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡的影響 Western Blot檢測(cè)結(jié)果(圖6A)顯示, 雨蛙素處理AR42J細(xì)胞后, 相較于anti-miR-con組, anti-miR-7組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著升高; 相較于antimiR-7+si-con組, anti-miR-7+si-Sp3組AR42J細(xì)胞中Sp3蛋白的表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01). 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果(圖6B)顯示, 相較于anti-miR-con組, anti-miR-7組AR42J細(xì)胞凋亡率顯著降低; 相較于anti-miR-7+si-con組, antimiR-7+si-Sp3組AR42J細(xì)胞凋亡率顯著升高(P＜0.01).可見, 抑制Sp3表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)敲減miR-7對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞的抑制凋亡作用.

3 討論

AP是胰腺的急性炎癥性病變, 可分為輕癥、中度重癥和重癥三類, 越嚴(yán)重預(yù)后效果越差, 死亡率越高, 嚴(yán)重影響人類身體和生命健康[13]. 重癥AP常伴有休克、腹膜炎、敗血癥、腸道功能障礙、凝血功能異常、全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能衰竭, 還會(huì)并發(fā)糖尿病等[14]. 近年來研究發(fā)現(xiàn)miRNA在AP中扮演著重要的角色, 參與AP的發(fā)生發(fā)展[15]. 如miR-9在AP中高表達(dá)[16]; 在急性水腫性胰腺炎中上調(diào)miR-92b表達(dá), 胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡率增加[17]; 下調(diào)miR-383的表達(dá)可以提高AP時(shí)細(xì)胞自噬水平[18]; miR-21在AP腺泡細(xì)胞中低表達(dá), 抑制其表達(dá)可抑制雨蛙素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡, 進(jìn)而加重胰腺炎的發(fā)展[19]. 而miR-7在AP病人中高表達(dá), 可作為AP病變的診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物[20]. 本研究結(jié)果顯示, 在雨蛙素處理后的AR42J細(xì)胞中miR-7的表達(dá)水平顯著升高, 而敲減miR-7抑制雨蛙素處理的AR42J細(xì)胞凋亡.

圖1 雨蛙素處理AR42J后AMY、TNF-α和IL-6表達(dá)的影響.

圖2 雨蛙素處理AR42J細(xì)胞后miR-7和Sp3的表達(dá).

圖3 敲減miR-7抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡.

圖4 miR-7靶向調(diào)控Sp3的表達(dá).

Sp3是Sp蛋白家族中的一員, 多數(shù)情況下是轉(zhuǎn)錄抑制因子[21]. 研究發(fā)現(xiàn)Sp3通過調(diào)控其下游增殖相關(guān)的基因的表達(dá)調(diào)控腫瘤的增殖和凋亡[22]. 轉(zhuǎn)錄因子Sp3在肝癌[23]、胰腺癌[24]中高表達(dá), 與腫瘤惡性程度和患者術(shù)后復(fù)發(fā)率相關(guān). Sp3可以增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移及侵襲能力[25]. Sp3在乳腺癌中高表達(dá), 參與其發(fā)生發(fā)展及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程[26]. Sp3可以抑制白血病細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡及增強(qiáng)化療藥物的耐藥性[27]. miR-223通過靶向調(diào)控Sp3可促進(jìn)ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)胞膽固醇流出[28]. 而Sp3關(guān)于在胰腺炎中的作用極其機(jī)制的研究較少, 付強(qiáng)等[29]發(fā)現(xiàn)Sp3通過被miR-135a抑制其表達(dá)而促進(jìn)大鼠AP中AR42J細(xì)胞的凋亡. 本研究的結(jié)果顯示, 雨蛙素處理AR42J后Sp3的表達(dá)水平顯著下降, 過表達(dá)Sp3可以抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡.miR-7靶向負(fù)調(diào)控Sp3, 抑制Sp3表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)敲減miR-7對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞的抑制凋亡作用.

總之, miR-7可通過靶向調(diào)控SP3影響AP腺泡細(xì)胞的凋亡. 研究miR-7在AP發(fā)病機(jī)制中的作用及臨床價(jià)值,為診斷和治療AP提供新靶點(diǎn)和新思路.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)病因較多且機(jī)制較為復(fù)雜, 并發(fā)癥較多, 根據(jù)其嚴(yán)重程度主要分為輕型AP和重癥AP. 輕型經(jīng)治療后恢復(fù)較好, 但重癥AP早期癥狀不典型, 且發(fā)展迅速, 后期惡化嚴(yán)重可導(dǎo)致多器官功能衰竭, 致死率高. 早診斷重癥AP, 及時(shí)治療, 提高治愈率是現(xiàn)階段臨床工作的重點(diǎn). 我國(guó)目前AP主要病因膽道疾病, 高脂血癥, 過度酒精, 暴飲暴食等. 治療方式有內(nèi)科治療和手術(shù)治療. 而要準(zhǔn)確、恰當(dāng)、及時(shí)的治療需要對(duì)其機(jī)制更為了解, 腺泡細(xì)胞死亡方式是AP的研究的一個(gè)重點(diǎn), 主要包括凋亡、壞死、程序性凋亡、自噬和焦亡等, 部分研究證明腺泡細(xì)胞死亡方式影響AP病情轉(zhuǎn)歸, 凋亡能減輕炎癥反應(yīng), 而壞死加重炎癥反應(yīng). 而本文主要是從miRNA方面研究其對(duì)AP凋亡的影響及其可能的作用機(jī)制. 從一個(gè)更小的分子層面進(jìn)行研究以期為以后的臨床治療提供理論基礎(chǔ)和依據(jù).

由于對(duì)文化建設(shè)的重要性認(rèn)識(shí)不到位和資金投入不足等原因，在經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展過程中文化建設(shè)往往都具有滯后性，而且主要是從場(chǎng)館設(shè)施、機(jī)構(gòu)設(shè)置、隊(duì)伍建設(shè)、演藝院線、活動(dòng)組織、文化下鄉(xiāng)等方面針對(duì)問題和不足而進(jìn)行的“補(bǔ)課”，表現(xiàn)出哪有問題就抓哪里、哪里有不足就補(bǔ)哪里。隨著黨對(duì)文化建設(shè)的不斷重視，特別是在黨的十八大召開之后為貫徹落實(shí)黨的十八大精神，廣州的文化建設(shè)又邁出了新的步伐，開始進(jìn)入由“文化補(bǔ)課”轉(zhuǎn)向“文化驅(qū)動(dòng)”的發(fā)展提升期。

圖6 敲減miR-7和抑制Sp3表達(dá)對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡的影響.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

本研究的主題是miRNA-7對(duì)AP增殖凋亡的影響, 擬解決的關(guān)鍵問題是了解miRNA-7是如何影響AP細(xì)胞的增殖和凋亡, 以及其和特異性蛋白3(specific protein 3, Sp3)之間的關(guān)系及他們對(duì)AP的影響, 拓展AP的發(fā)生發(fā)展機(jī)制, 為以后臨床上的診斷治療等提供新思路和依據(jù).

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

研究的主要目標(biāo)即miRNA-7, Sp3, AP之間的聯(lián)系, 研究得到miRNA-7和Sp3均在AP中異常表達(dá), 敲減miRNA-7和過表達(dá)Sp3均可抑制雨蛙素處理AR42J細(xì)胞凋亡, 且miR-7靶向負(fù)調(diào)控Sp3. 可以從調(diào)控AP凋亡的途徑來調(diào)控其進(jìn)展, 為其治療提供新思路.

實(shí)驗(yàn)方法

本研究首先是用雨蛙素處理大鼠胰腺腺泡來構(gòu)建AP的模型, 通過ELISA法檢測(cè)淀粉酶(amylase, AMY)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的水平變化檢驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建成功.轉(zhuǎn)染miRNA-7和Sp3的過表達(dá)和抑制表達(dá)載體質(zhì)粒, 通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡, Western blot檢測(cè)Sp3蛋白表達(dá), qRT-PCR檢測(cè)miRNA-7和Sp3 mRNA表達(dá)水平, 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-7與Sp3之間的靶向關(guān)系.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是在雨蛙素構(gòu)建的A P模型細(xì)胞中,miR-7的表達(dá)水平顯著升高; Sp3的表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01). 敲減miR-7、過表達(dá)Sp3腺泡細(xì)胞凋亡率降低.miR-7靶向負(fù)調(diào)控Sp3; 抑制Sp3表達(dá)逆轉(zhuǎn)了敲減miR-7對(duì)雨蛙素處理AR42J細(xì)胞的凋亡抑制作用. 達(dá)到了本實(shí)驗(yàn)的目的, 對(duì)該領(lǐng)域AP的發(fā)病進(jìn)展機(jī)制又多了一份理論依據(jù). 以后可以進(jìn)一步從臨床方面進(jìn)行應(yīng)用.

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

miR-7靶向負(fù)調(diào)控Sp3; 敲減miR-7、過表達(dá)Sp3抑制腺泡細(xì)胞凋亡. 可以通過調(diào)控miR-7影響AP的進(jìn)展. 從miRNA角度去研究其對(duì)AP的影響拓寬了研究的范圍,可更深層次多角度的去了解AP.

展望前景

本研究?jī)H是在實(shí)驗(yàn)的小鼠上進(jìn)行研究, 有一定的局限性, 僅限于理論層面, 對(duì)于到人的影響還有一定的距離.本研究未來研究的方向是進(jìn)一步深入的研究調(diào)控miR-7和Sp3對(duì)治療AP小鼠的影響及其可能會(huì)產(chǎn)生的現(xiàn)象等.最佳方法是尋找更接近于真實(shí)AP的小鼠或者與人AP更為相似的受體.