2種國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)嬰幼兒奶粉中葉酸和泛酸含量比較

王 晶 蘆 云 師 佳 安麗艷 李 玲

（中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院 北京 100123）

1 前言

葉酸（Folic）和泛酸（Pantothenic Acid）同屬于水溶性的維生素，都是人體維持正常生理功能所必需的微量物質(zhì), 尤其對(duì)孕婦和新生兒有著特殊的重要性[1,2]。葉酸和泛酸在嬰幼兒配方食品和特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品等國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定為必須成分，并對(duì)添加量做了明確限定。

嬰幼兒配方奶粉葉酸和泛酸的主要檢測(cè)方法是微生物法。2018年8月，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)勘誤，其中GB 5009.211—2014 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中葉酸的測(cè)定》[3]和 GB 5009.210—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中泛酸的測(cè)定》[4]在勘誤中將當(dāng)時(shí)現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.16—2010 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測(cè)定》[5]和GB 5413.17—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測(cè)定》[6]替代。這2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)突然作廢，無(wú)論是對(duì)檢測(cè)機(jī)構(gòu)還是乳品企業(yè)來(lái)說(shuō)都有一定的影響。本文對(duì)葉酸和泛酸新舊國(guó)標(biāo)方法的精密度和檢測(cè)結(jié)果的差異性進(jìn)行比較，希望能給檢測(cè)機(jī)構(gòu)和乳品企業(yè)在檢測(cè)和生產(chǎn)中提供一些數(shù)據(jù)支持。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

市售各品牌嬰幼兒配方奶粉。

標(biāo)準(zhǔn)菌株:植物乳桿菌（ATCC 8014）、鼠李糖乳桿菌（ATCC 7469），購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心（CICC）；培養(yǎng)基:乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基、乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基，購(gòu)自北京陸橋生物技術(shù)有限公司；葉酸測(cè)定培養(yǎng)基、泛酸測(cè)定培養(yǎng)基，美國(guó)BD 公司；葉酸標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%）、泛酸標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%）:DR。

2.2 主要儀器設(shè)備

pH 計(jì)（S220，瑞士 METTLER 公司）；培養(yǎng)箱（MIR-254-PC，日本 Panasonic 公司）；酶標(biāo)儀（multiskan go，美國(guó) Thermo 公司）。

2.3 檢測(cè)方法

葉酸參照 GB 5009.211—2014、GB 5413.16—2010方法檢測(cè)；泛酸參照GB 5009.210—2016（第一法）、GB 5413.17—2010（第一法）方法檢測(cè)，并分別測(cè)出了它們的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

3 結(jié)果與討論

3.1 精密度

選擇嬰兒配方奶粉3 個(gè)、較大嬰兒奶粉2 個(gè)、幼兒奶粉1 個(gè)，總共6 個(gè)樣品，每個(gè)樣品做6 個(gè)平行。2種方法檢測(cè)結(jié)果的精密度詳見(jiàn)表1～表4。

表1 GB 5413.16—2010 葉酸檢測(cè)結(jié)果

表2 GB 5009.211—2014 葉酸檢測(cè)結(jié)果

表3 GB 5413.17—2010（第一法）泛酸檢測(cè)結(jié)果

表4 GB 5009.210—2016（第一法）泛酸檢測(cè)結(jié)果

由表1、表2可知，GB 5413.16—2010 檢測(cè) 6 種奶粉葉酸，6 個(gè)平行的 RSD 為 2.78%～4.59%，GB 5009.211—2014 檢測(cè) 6 種奶粉葉酸，6 個(gè)平行的 RSD為 3.05%～4.23%；由表3、表4可知，GB 5413.17—2010（第一法）檢測(cè)6 種奶粉泛酸，6 個(gè)平行的RSD為 1.10%～4.05%，GB 5009.210—2016（第一法）檢測(cè)6 種奶粉泛酸，6 個(gè)平行的 RSD 為 1.75%～4.99%。每種方法的精密度比較接近。

3.2 2種方法的差異分析

葉酸 2 種方法的檢測(cè)結(jié)果經(jīng) F 檢驗(yàn)，P＞0.05，可進(jìn)一步采用雙樣本等方差t 檢驗(yàn)對(duì)2 種方法的結(jié)果進(jìn)行分析:在95%的置信區(qū)間下，自由度df=10，t 檢驗(yàn)值=0.066，t 臨界值=2.228，P=0.949＞0.05，2 種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；泛酸2 種方法的檢測(cè)結(jié)果經(jīng)F 檢驗(yàn)，P＞0.05，可進(jìn)一步采用雙樣本等方差t檢驗(yàn)對(duì)2 種方法的結(jié)果進(jìn)行分析:在95%的置信區(qū)間下，自由度 df=10，t 檢驗(yàn)值=-0.102，t 臨界值=2.228，P=0.920＞0.05，2 種方法的檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 討論

葉酸和泛酸新舊國(guó)標(biāo)的主要差異在于樣品前處理。葉酸舊標(biāo)準(zhǔn)中嬰幼兒配方奶粉的前處理方法是100℃水浴加熱，泛酸舊標(biāo)準(zhǔn)中嬰幼兒配方奶粉的前處理方法是121℃水解。在新國(guó)標(biāo)中，2 個(gè)項(xiàng)目的前處理方法都變成了超聲直接提取法，并省去了調(diào)整pH 值的步驟，與舊方法對(duì)比，前處理步驟工作量有所減少。值得一提的是，對(duì)于泛酸項(xiàng)目，由于省去了試樣調(diào)整pH4.5 后過(guò)濾取上清液的步驟，試樣會(huì)渾濁，使得測(cè)試結(jié)果平行性差，故建議先將試樣用0.22 μm 的過(guò)濾器過(guò)濾除去背景顏色再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4 結(jié)語(yǔ)

本文對(duì)葉酸、泛酸新舊國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)嬰幼兒配方奶粉結(jié)果的精密度和差異性進(jìn)行了比較。葉酸新、舊方法的結(jié)果精密度分別為3.05%～4.23%和2.78%～4.59%；泛酸新、舊方法的結(jié)果精密度分別為1.75%～4.99%和1.10%～4.05%。2 個(gè)項(xiàng)目新舊方法的結(jié)果精密度接近，分別測(cè)得的葉酸、泛酸結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。通過(guò)本文的比對(duì)數(shù)據(jù)，希望能在加速實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)或者產(chǎn)品配方配比方面為檢測(cè)機(jī)構(gòu)和乳品企業(yè)提供一些數(shù)據(jù)支持。