飼料添加劑對(duì)蝦類免疫力提升及抗WSSV的影響研究進(jìn)展

郝晨光 王冬梅 李軍濤 張秀霞 冼健安

摘?要：整理了前人研究結(jié)果，重點(diǎn)介紹中草藥、糖類，以及其它物質(zhì)作為飼料添加劑，對(duì)養(yǎng)殖蝦類免疫機(jī)能的提升以及抗WSSV的影響效果，并加以分析。

關(guān)鍵詞：克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）;飼料添加劑;抗病力;WSSV

我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)業(yè)規(guī)模巨大，其中蝦類養(yǎng)殖方興未艾，主要養(yǎng)殖種類有克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）、南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）、中國(guó)對(duì)蝦（Penaeus chinensis）等，蝦類味道鮮美，且營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受廣大群眾喜愛。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，蝦類養(yǎng)殖業(yè)頻受WSSV的影響而大幅減產(chǎn)，WSSV作為一種病毒病目前尚無(wú)良好的治療方法，只能通過(guò)預(yù)防來(lái)加以控制。蝦類作為甲殼類動(dòng)物，沒有特異性免疫，那么使用飼料添加劑來(lái)提高蝦類的非特異性免疫，進(jìn)而提升其抗病力是防病的重要途徑。

1?中草藥

中草藥種類豐富，材料易得，大多取自天然生長(zhǎng)的植物，不易形成抗藥性，藥殘少，毒副作用極小，藥性溫和，且在人體以及其他動(dòng)物體中有著較為成熟的經(jīng)驗(yàn)，在水產(chǎn)行業(yè)當(dāng)中作為飼料添加劑有著廣闊的前景。

張磊在飼料中添加了加拿大一枝黃花、苦參、黃柏水提物，添加比例為2%，發(fā)現(xiàn)以上三種物質(zhì)均能提高克氏原螯蝦非特異性免疫[1]。丁建英等在飼料中添加含有金銀花、黃芪的復(fù)方中草藥，添加比例為1%，發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的非特異性免疫得到了顯著提高[2]。郝忱等在飼料中添加了中草藥復(fù)合添加劑（0.3%大黃+0.3%淫羊藿+0.2%黃芪+0.2%板藍(lán)根），發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的非特異性免疫得到提高，用WSSV攻毒后，成活率比對(duì)照組提高了18.75%[3]。洪徐鵬等建議在飼料中添加0.40% ～0.80%的黃芪多糖，能夠顯著促進(jìn)克氏原螯蝦的非特異性免疫以及生長(zhǎng)[4]。此外，在南美白對(duì)蝦的研究中，湯菊芬等認(rèn)為，含有金銀花、板藍(lán)根、杜仲、五味子、黃芪、山楂、生姜、金銀花、連翹、柴胡、甘草等中草藥的復(fù)合益生菌制劑，可以提高南美白對(duì)蝦的多種非特異性免疫指標(biāo)[5]。江湧等認(rèn)為，添加1.5 g/kg的中草藥添加劑（主要含有黃芪、甘草、白術(shù)等補(bǔ)益類藥物），能夠提高南美白對(duì)蝦的免疫力[6]。陳輝輝等在飼料中添加了含有葛根、黃連、金銀花、板藍(lán)根、黃芪、甘草、柴胡、當(dāng)歸等物質(zhì)的復(fù)方中草藥，發(fā)現(xiàn)能提高對(duì)蝦免疫和抗WSSV的能力，且添加比例以1.2%和0.8%效果最佳[7]。景亞運(yùn)[8]用含有HD-3中草藥的基礎(chǔ)飼料投喂南美白對(duì)蝦10 d，發(fā)現(xiàn)其顯著提升了南美白對(duì)蝦免疫因子活性。進(jìn)行WSSV攻毒后，服用一段時(shí)間中草藥之后，對(duì)蝦各項(xiàng)免疫因子的活力更加持久。此研究結(jié)果在高溫時(shí)更顯著。黃永春等研究了茯苓、黃芪、板藍(lán)根、柴胡和甘草，發(fā)現(xiàn)以上中草藥都能促進(jìn)南美白對(duì)蝦的生長(zhǎng)與抗病力，其中柴胡的抗WSSV效果最好;在體外，番石榴葉水提取物對(duì)WSSV具有殺滅作用[9]。

通過(guò)以上研究不難發(fā)現(xiàn)，相當(dāng)多的中草藥對(duì)于提高水生動(dòng)物的免疫力、抗病力有著顯著作用。其中出現(xiàn)最多的中草藥就是黃芪、板藍(lán)根、金銀花，中醫(yī)認(rèn)為板藍(lán)根和金銀花都有清熱解毒的功效，黃芪具有清熱燥濕的功效，三者都屬于補(bǔ)益類中藥，在臨床中，能提高人的免疫力。有關(guān)藥理作用的深入研究目前還有待開展，今后再進(jìn)行相類似的實(shí)驗(yàn)，綜合考慮成本因素，可選取其它補(bǔ)益類中藥，如玄參、夏枯草、地骨皮、決明子等。除此之外，西藥中抗病毒的藥物也應(yīng)該嘗試，比如病毒唑、鹽酸金剛乙胺、病毒靈等。

2?糖類

糖類在飼料中作為能源物質(zhì)，相對(duì)廉價(jià)，蝦類對(duì)于糖類的利用效率也較低，但是在配合飼料中合理的使用糖類能夠有效降低生產(chǎn)成本，尤其是幾種特殊的糖類作為飼料添加劑運(yùn)用到蝦類養(yǎng)殖中，對(duì)于提高蝦類的抗病力，有著很好的效果。

朱斐在飼料中分別添加殼聚糖、甲殼素、葡聚糖，發(fā)現(xiàn)三者對(duì)克氏原螯蝦的酶活力的提高均有效果，其中葡萄糖效果最好，殼聚糖次之，甲殼素再次[10]。樊冰心在飼料中添加0.75%的低分子量殼聚糖，發(fā)現(xiàn)相比對(duì)照組，克氏原螯蝦的諸多免疫指標(biāo)得以提升，機(jī)體的抗氧化能力提高了[11]。丁德明認(rèn)為，肽聚糖、黃芪多糖、酵母多糖、北蟲草多糖、殼聚糖、海藻多糖等，均具有明顯激活補(bǔ)體系統(tǒng)的作用。但是，投喂免疫多糖時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成克氏原螯蝦的“免疫疲勞”，反而降低其免疫力[12]。楊維維在飼料中添加果寡糖后，克氏原螯蝦的生長(zhǎng)性能、免疫功能、肝臟抗氧化能力和腸道消化能力得到了顯著提升，添加比例為0.5%[13]。洪徐鵬等，先對(duì)克氏原螯蝦進(jìn)行WSSV人工攻毒，然后在飼料中添加0.8%的黃芪多糖，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組比只投喂基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組存活率高26.67%[14]。陽(yáng)會(huì)軍等在飼料中添加含有18%β-1，3-葡聚糖的“特免王”，發(fā)現(xiàn)能夠提高斑節(jié)對(duì)蝦的抗WSSV感染能力，添加比例為2.8 g/kg[15]。劉群芳等研究發(fā)現(xiàn)，β-1，3-葡聚糖與硒聯(lián)合或者β-1，3-葡聚糖、硒、維生素E聯(lián)合添加進(jìn)飼料均能顯著提高南美白對(duì)蝦的非特異性免疫，抗氧化能力和抗病力[16]。李凱年對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦投喂含有β-1，3-葡聚糖2 g/kg的飼料，對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦進(jìn)行WSSV人工攻毒后，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的死亡率比未投喂葡聚糖的對(duì)照組得到了顯著下降[17]。王秀華等與陳國(guó)福等，都在南美白對(duì)蝦的飼料中添加1%的肽聚糖，結(jié)果表明其抗WSSV感染的能力得到了顯著的提升[18-19]。汪小鋒認(rèn)為，β—葡聚糖和脂多糖都能提高酚氧化酶的產(chǎn)量，從而提高對(duì)蝦自身免疫力，顯著抑制WSSV[20]。

糖類在飼料中居于較為次要的位置，但諸多研究者發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)添加糖類，能夠促進(jìn)水生生物的生長(zhǎng)。在作為飼料添加劑時(shí)，絕大多數(shù)糖類能夠增強(qiáng)水生生物的免疫力，具體作用機(jī)理有待深入研究。根據(jù)前人研究推測(cè)，糖類是通過(guò)作用于蝦類消化道，進(jìn)而提升其免疫力。大部分糖類能夠改善消化道菌落狀態(tài)，提升免疫因子活性。李文婷推測(cè)，WSSV最先侵染的器官便是消化器官[21]，丁正峰認(rèn)為WSSV對(duì)克氏原螯蝦消化系統(tǒng)的胃、中腸、和肝胰腺等具有很強(qiáng)的組織嗜性[22]。糖類能夠保護(hù)消化器官，這極有可能就是在飼料中添加糖類后，感染W(wǎng)SSV的蝦類死亡率降低的原因。此外，如朱衛(wèi)衛(wèi)等對(duì)南美白對(duì)蝦注射溶藻弧菌肽聚糖，注射濃度為0.15 mg/ml，進(jìn)行WSSV人工攻毒后與對(duì)照組相比，保護(hù)率可達(dá)56.67%[23]。李夢(mèng)竹在對(duì)日本囊對(duì)蝦WSSV攻毒前注射50 μg/g的CK-70B3（九州蟲草子實(shí)體多糖）后，也得到了類似結(jié)論[24]。此外，劉樹青通過(guò)給中國(guó)對(duì)蝦注射海藻多糖和北蟲草多糖，發(fā)現(xiàn)二者均能顯著提高中國(guó)對(duì)蝦的血細(xì)胞吞噬能力等免疫功能[25]。

此外還有把南美白對(duì)蝦幼體通過(guò)在糖類水溶液中浸浴，來(lái)提高抗WSSV侵染的報(bào)道[26]。由此可見，糖類在蝦類抗WSSV中，無(wú)論是投喂、注射、浸泡，都能起到提高免疫力，預(yù)防WSSV的作用。

3?其它

朱斐研究發(fā)現(xiàn)[10]，經(jīng)過(guò)BIW（WSSV制劑）投喂后，克氏原螯蝦類產(chǎn)生了類似于特異性免疫的反應(yīng)，在進(jìn)行WSSV攻毒后，存活率顯著提升。朱凜等在克氏原螯蝦幼蝦的飼料里分別添加4%烏賊膏和1%大蒜素后，發(fā)現(xiàn)其在WSSV攻毒實(shí)驗(yàn)中的存活率顯著高于投喂基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組[27]。何金星等在飼料中添加4%的螺旋藻，發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的免疫指標(biāo)得到了顯著提升。楊維維在飼料中分別添加50～75 mg/kg大黃素和1%～2%的海帶粉后發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦的免疫功能和肝臟抗氧化以及腸道消化能力得到了顯著提升[28]。李旭鵬發(fā)現(xiàn)，與配合飼料和鮮蛤肉相比，喂食活鹵蟲更能增強(qiáng)中國(guó)明對(duì)蝦抗WSSV的能力[29]，這與胡賢德在斑節(jié)對(duì)蝦研究中的結(jié)論類似[30]。肖廣俠對(duì)中國(guó)對(duì)蝦分別投喂單胞藻、配合飼料、輪蟲和鹵蟲幼體，在進(jìn)行WSSV人工攻毒后，死亡率都在90%以上，差異不顯著;此外，輪蟲和鹵蟲都會(huì)攜帶有WSSV病毒，可能是造成對(duì)蝦白斑病暴發(fā)的傳染源[31]，這與李旭鵬和胡賢德關(guān)于鹵蟲作為餌料投喂后的結(jié)論完全相反，究竟是品種差異還是實(shí)驗(yàn)操作問(wèn)題，還需要進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。耿小雪等在飼料中添加重組Fortilin蛋白投喂南美白對(duì)蝦后，發(fā)現(xiàn)南美白對(duì)蝦的免疫力和抗WSSV感染的能力顯著增強(qiáng)，其產(chǎn)生的反應(yīng)與朱斐對(duì)克氏原螯蝦實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果相類似[32]。孫艷等對(duì)南美白對(duì)蝦分別投喂芽孢桿菌、滅活溶藻弧菌、溶藻弧菌及芽孢桿菌后，南美白對(duì)蝦抵抗WSSV感染的能力都得到了顯著提升， 相對(duì)保護(hù)率分別為33.7%、31.46%、41.6%，堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌活菌與溶藻弧菌配合使用也能達(dá)到類似效果[33-34]。劉文亮等在飼料中添加芽孢桿菌后對(duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行投喂，認(rèn)為其并不能顯著提高南美白對(duì)蝦WSSV攻毒的實(shí)驗(yàn)組的成活率[35-36]，這與孫艷的研究結(jié)果又有很大差異，那么說(shuō)明芽孢桿菌作為飼料添加劑是否能幫助南美白對(duì)蝦有效抵抗WSSV的侵染，有待研究?？赡芏咴趯?duì)南美白對(duì)蝦進(jìn)行攻毒時(shí)，WSSV的含量有差別，這會(huì)影響到最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。孫振對(duì)南美白對(duì)蝦投喂含有河流弧菌、產(chǎn)氣弧菌、泰安郡鹽單胞菌、脫氮胞曼氏菌等的生物絮團(tuán)發(fā)現(xiàn)南美白對(duì)蝦的免疫力得到了顯著提升[37]。張玲在飼料中添加益生菌B12（耐受過(guò)WSSV中國(guó)明對(duì)蝦腸道中的一種嗜鹽性單胞菌），能夠提高中國(guó)明對(duì)蝦對(duì)白斑病毒的抗病力[38]。蘭萍等、職通瑞都發(fā)現(xiàn)在飼料中添加美人魚發(fā)光桿菌之后，能顯著提高南美白對(duì)蝦的抗病毒感染能力，以0.1%的比例添加最為合適[39-40]。鄧康裕等研究認(rèn)為，在飼料中添加PHB（聚β—羥基丁酸酯），能提高南美白對(duì)蝦對(duì)于WSSV的抵抗力，延長(zhǎng)平均存活時(shí)間，最佳添加濃度為1%[41]。劉家舉研究表明，鮮活藍(lán)蛤、芽孢桿菌能一定程度上提高南美白對(duì)蝦的免疫水平，降低WSSV的增殖速率[42]。

在蝦類養(yǎng)殖中，有著諸多可以作為飼料添加劑的物質(zhì)，以上所舉例子當(dāng)中，有中藥提取物、水生動(dòng)物、水生植物、益生菌、蛋白質(zhì)等，可見能夠提高蝦類抗病力的飼料添加劑種類豐富，來(lái)源廣泛。王曉琳等、王春迪等分別在水體中添加溶藻弧菌、蠟樣芽胞桿菌以提高南美白對(duì)蝦免疫力來(lái)抗WSSV[43-44]。還有通過(guò)在水體里添加益生菌來(lái)提高養(yǎng)殖蝦類免疫力的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。這提醒我們，在選擇飼料添加劑時(shí)，思路要開闊，要勇于試驗(yàn)。

4?結(jié)束語(yǔ)

在蝦類WSSV的防治中，關(guān)于飼料添加劑的研究比較廣泛，但是缺乏較為深入的研究，一些實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性不高，對(duì)于同一種物質(zhì)作為飼料添加劑的結(jié)果不盡相同甚至完全相反。此外，尤其是在作用機(jī)理與分子層面對(duì)病毒增殖情況的分析方面可參考文獻(xiàn)還較少，大多數(shù)研究停留在對(duì)死亡率、免疫因子等表象的研究。

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