天樞穴位埋線(xiàn)對(duì)肥胖大鼠胰島素抵抗的影響*

孟祥然,朱雪松,楊彩云,井 傲,譚奇紋,2,于慧娟,2△

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,山東 濟(jì)南 250014)

肥胖作為全球性疾病[1]，其病因除與不良生活方式和先天因素有關(guān)外，胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)是導(dǎo)致其最主要的因素[2]。有研究表明，肥胖與IR一般相繼發(fā)生，大多數(shù)IR患者為肥胖型，而幾乎所有肥胖者都伴有IR[3]、血脂紊亂以及血清脂聯(lián)素(Adiponectin,APN)、視黃醇結(jié)合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)水平的異常。

《素問(wèn)·六微旨大論曰》：“天樞之上，天氣主之；天樞之下，地氣主之”。張景岳注：“樞，樞機(jī)也。居陰陽(yáng)升降之中，是為天樞”。天樞穴位于人體上下之氣交合處，為升清降濁之樞紐，具有健脾胃、調(diào)胃腸的功效。穴位埋線(xiàn)能夠糾正脂肪組織的分泌紊亂、緩解代謝性炎性反應(yīng)狀態(tài)[4]。天樞穴位埋線(xiàn)可以整體調(diào)節(jié)機(jī)體脂代謝，改善大鼠肥胖指標(biāo)，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步闡釋。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建肥胖大鼠模型，從天樞穴位埋線(xiàn)影響肥胖大鼠體重、腹圍、Lee's 指數(shù)、血清甘油三脂(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total Cholesterol,TC)、APN、RBP4、空腹血漿中胰島素(Fasting plasma insulin,Fins)及IR的角度，闡明其在減肥中的作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性Wistar大鼠60只，約230 g,在山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行飼養(yǎng)及觀(guān)察[許可證號(hào):SCXK(魯)2013 0009]。

1.2 造模

將實(shí)驗(yàn)大鼠分籠，每籠裝3～4只。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前先用普通飼料及飲用水喂養(yǎng)7天。7天后將大鼠隨機(jī)分為兩組:①普通組(10只)：給予普通飼料喂養(yǎng)；②高脂飲食組(50只)：給予高脂飼料(普通飼料60%、蔗糖15%、奶粉13%、豬油12%)喂養(yǎng)。4周后，用電子天平(精確度0.5 g)稱(chēng)量體質(zhì)量 ，超過(guò)普通組大鼠體質(zhì)量20%時(shí)，造模成功。

1.3 天樞穴定位

依據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[5]中大鼠穴位定位方法及模仿人體骨度分寸法。天樞穴的定位:大鼠腹部臍兩側(cè)旁開(kāi)約5 mm[6]。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及處理

將造模成功的36只肥胖大鼠隨機(jī)分為模型組、藥物組和穴位埋線(xiàn)組。模型組不做治療。藥物組處理：奧利司他35 mg/kg(規(guī)格為0.12 g,重慶華森制藥有限公司)，配合使用生理鹽水2 mL灌胃，1天1次，連續(xù)治療并觀(guān)察4周。穴位埋線(xiàn)組處理：大鼠固定鼠臺(tái)，將約0.5 cm長(zhǎng)的羊腸線(xiàn)(山東博大醫(yī)療用品有限公司)插入穿刺針(鎮(zhèn)江高冠醫(yī)療器械有限公司)中，局部消毒后，刺入大鼠雙側(cè)天樞穴，順勢(shì)將羊腸線(xiàn)留于大鼠脂肪層。出針后，用低致敏型透氣膠貼貼于雙側(cè)天樞穴體表。埋線(xiàn)1周1次，持續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠自由攝食和飲水，普通組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余組均以高脂飼料喂養(yǎng)。

1.5 觀(guān)察指標(biāo)

1.5.1 各組動(dòng)物體質(zhì)量變化 實(shí)驗(yàn)第28天用電子天平(精確度0.5 g)稱(chēng)量體質(zhì)量。

1.5.2 各組動(dòng)物的腹圍及Lee's指數(shù) 實(shí)驗(yàn)第28天用卷尺準(zhǔn)確測(cè)定腹圍：大鼠取仰臥位時(shí)，測(cè)量劍突和后肢間垂直距離中點(diǎn)1周的長(zhǎng)度；麻醉后測(cè)體長(zhǎng)(鼻到肛門(mén)的距離)并得出Lee's指數(shù)：Lee's指數(shù)=[體質(zhì)量1/3(g)×1 000]/ 體長(zhǎng)(cm),反映了體脂含量的多少。

1.5.3 TG、TC檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)第28天，收集各組大鼠5 mL左右的血液，靜置2～3 h，離心取血清，放于-80℃冰箱，留存檢測(cè)。試劑盒測(cè)定TG和TC的濃度(試劑盒由美國(guó)Phoenix公司提供)。

1.5.4 APN、RBP4檢測(cè) 采用放射免疫法測(cè)定(試劑盒由美國(guó)Phoenix公司提供)。

1.5.5 胰島素敏感指數(shù)(ISI)、胰島素抵抗指數(shù)檢測(cè)(IRI) 檢測(cè)空腹血漿中葡萄糖(Fasting blood glucose,FBG)、Fins，分別計(jì)算IRI,IRI=FBG×Fins/22.5；計(jì)算ISI,ISI=-ln(FBG×Fins)，即ISI定義為FBG含量與Fins含量乘積的倒數(shù)，取其自然對(duì)數(shù)。采用放射免疫法測(cè)定Fins。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組肥胖指數(shù)比較

藥物組和穴位埋線(xiàn)組體質(zhì)量、腹圍及Lee's指數(shù)均低于模型組(P<0.05)。穴位埋線(xiàn)組體質(zhì)量、Lee's指數(shù)低于藥物組(P<0.05)，兩組間腹圍差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠肥胖指數(shù)比較

注：與普通組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05;與藥物組比較,○P<0.05。

2.2 各組血脂成分比較

藥物組和穴位埋線(xiàn)組TC、TG均低于模型組(P<0.05)，兩組間上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血脂比較

注：與普通組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

2.3 各組APN、RBP4比較

與模型組比較，藥物組和穴位埋線(xiàn)組APN增高、RBP4降低(P<0.05)；與藥物組比較，穴位埋線(xiàn)組APN增高于藥物組、RBP4低于藥物組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠APN、RBP4比較

注：與普通組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與藥物組比較，&P<0.05。

2.4 各組胰島素抵抗相關(guān)指標(biāo)比較

藥物組和穴位埋線(xiàn)組FBG、Fins、ISI和IRI均低于模型組(P<0.05)，穴位埋線(xiàn)組上述指標(biāo)均低于藥物組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

組別nFBG(mmol/L)Fins(mIU/L)ISIIRI普通組107.9±1.75.0±1.00.66±0.121.8±0.6模型組1212.4±1.3?13.3±0.8?1.08±0.17?7.3±0.5?藥物組1210.1±0.9?#8.7±0.9?#0.87±0.12?#3.9±0.5?#穴位埋線(xiàn)組129.4±1.3?#&6.4±1.1?#&0.79±0.11?#&2.7±0.8?#&

注：與普通組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與藥物組比較，&P<0.05。

3 討論

3.1 IR與脂代謝

IR是指機(jī)體對(duì)胰島素的反應(yīng)減弱，產(chǎn)生過(guò)量胰島素的病理狀態(tài)[7]。肥胖是導(dǎo)致IR最主要的原因。在肥胖機(jī)體中，脂代謝增強(qiáng)，TG分解釋放游離脂肪酸(Free fatty acids,FFA)增多，F(xiàn)FA含量上升，導(dǎo)致IR[8]。

目前研究[9]顯示,穴位埋線(xiàn)可以較好地調(diào)整機(jī)體脂代謝。本課題研究表明,天樞穴位埋線(xiàn)具有減輕體重、腹圍的趨勢(shì),因此在減肥中作用明顯。同時(shí),能更好地減少腹脂,使Lee's 指數(shù)、TC及TG 水平下降，改善脂代謝紊亂，F(xiàn)ins亦顯著降低，從而有效改善IR[10]，表明穴位埋線(xiàn)對(duì)肥胖機(jī)體具有減肥、良性調(diào)節(jié)血脂的作用。

3.2 IR與APN、RBP4

有研究發(fā)現(xiàn)，IR與體內(nèi)APN含量呈負(fù)相關(guān)，與RBP4含量呈正相關(guān)[11]。APN作為內(nèi)源活性多肽，是機(jī)體抗IR過(guò)程中最關(guān)鍵的因素。在肥胖引起的IR中，APN表達(dá)下調(diào)[12]。RBP4作為一種新的脂肪因子,廣泛存在于血液、腦脊液中。有研究闡述RBP4在IR過(guò)程中的主要機(jī)制為:①RBP4可通過(guò)對(duì)IRS1-Ras-MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路進(jìn)行干預(yù)，導(dǎo)致IR[13];②RBP4可增加肝糖輸出，產(chǎn)生IR。本實(shí)驗(yàn)顯示,APN降低及RBP4升高后，機(jī)體對(duì)胰島素敏感性降低，導(dǎo)致嚴(yán)重的IR；當(dāng)APN恢復(fù)正常以及RBP4含量降低時(shí)，IR可改善。埋線(xiàn)法和奧利司他可以有效調(diào)控APN、RBP4表達(dá)，并且埋線(xiàn)法效果較好。

3.3 天樞穴位埋線(xiàn)的作用機(jī)制

姜氏[14]課題研究顯示穴位埋線(xiàn)明顯降低肥胖機(jī)體體重、Lee’s指數(shù)(P<0.01),效果優(yōu)于西藥，其機(jī)制是通過(guò)中樞和外周路線(xiàn)改善機(jī)體的IR。在改善肥胖機(jī)體和抑制IR方面，穴位埋線(xiàn)法優(yōu)于西藥，并且可以避免西藥的不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)選用的天樞穴是大腸募穴，可調(diào)暢一身氣機(jī)。天樞穴位埋線(xiàn)既有針刺基本治療功效,又有“靜以留之”的持久刺激。其大致機(jī)理為線(xiàn)體在體內(nèi)分解的過(guò)程,對(duì)穴位產(chǎn)生的生理和生化刺激至少兩周，有別于針刺時(shí)不銹鋼針暫時(shí)的單一物理作用[15]。此種治療方法將多種刺激結(jié)合，在相應(yīng)中樞節(jié)段控制下，良性調(diào)整臟腑功能[16]。故本研究推測(cè)天樞穴位埋線(xiàn)改善IR的作用機(jī)制可能是通過(guò)神經(jīng)-內(nèi)分泌-體液-免疫等途徑，增強(qiáng)各種代謝物質(zhì)的活性，促進(jìn)機(jī)體對(duì)葡萄糖和脂肪的吸收、轉(zhuǎn)化等，提高胰島素敏感性，從而改善肥胖機(jī)體IR。

綜上，天樞穴位埋線(xiàn)可以有效減輕肥胖機(jī)體的體質(zhì)量與體脂,良性調(diào)整脂代謝以及合理調(diào)控機(jī)體APN和RBP4表達(dá)，增強(qiáng)胰島素的生理效應(yīng)，改善肥胖機(jī)體IR，具有顯著的降血脂、減體脂作用,對(duì)于防治肥胖及其并發(fā)癥有較好的臨床效果。當(dāng)然，其具體作用機(jī)制有待于后期在相關(guān)研究中進(jìn)一步探索和完善。