高危型HPV感染患者Th1/Th2平衡與中醫(yī)體質(zhì)相關(guān)性研究

寧波市中醫(yī)院 寧 波 315010

高危型人乳頭瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）和宮頸癌的主要病因[1]，嚴重威脅著女性健康。感染HR-HPV的女性往往無明顯臨床癥狀，一旦出現(xiàn)性交出血等臨床癥狀時，可能已經(jīng)出現(xiàn)嚴重病變。隨著生活水平的提高，人們對疾病的預(yù)防越來越重視，目前人們可以通過接種HPV疫苗等方式預(yù)防幾種常見的HPV感染，但HPV種類繁多，接種疫苗并不能預(yù)防所有類型的HRHPV。中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說認為，體質(zhì)決定著是否發(fā)病，并決定著疾病的傾向、臨床證候以及傳變[2]。有研究表明，陰道局部Th1/Th2比例失衡，導(dǎo)致抗感染以及抗腫瘤的細胞免疫水平降低，促進宮頸病變的發(fā)生[3]。了解HPV感染者陰道局部Th1/Th2平衡情況與中醫(yī)體質(zhì)的相關(guān)性，有助于依據(jù)中醫(yī)“體質(zhì)學(xué)說”理論對易感染HPV的高危人群進行體質(zhì)調(diào)節(jié)，從而達到“治未病”的目的。本研究通過檢測宮頸HR-HPV感染患者陰道局部白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）、γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、白細胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、白細胞介素-10（（interleukin-10，IL-10）水平，并依據(jù)“體質(zhì)學(xué)說”理論對其進行體質(zhì)辨識，旨在探討宮頸HR-HPV感染患者陰道局部Th1/Th2失衡情況，以及與中醫(yī)體質(zhì)的相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇2016年11月至2017年10月于寧波市中醫(yī)院婦科就診的患者，將符合納入標準的60例宮頸HR-HPV感染患者設(shè)為感染組，并選取同一時間宮頸HR-HPV陰性的健康女性60例，設(shè)為對照組。經(jīng)正態(tài)性檢驗，兩組年齡均為非正態(tài)分布，故用中位數(shù)和四分位數(shù)間距M（Q）表示，感染組年齡23～56歲，M（Q）：37（14）歲；對照組年齡 21～64 歲，M（Q）：32（8）歲。經(jīng)秩和檢驗，兩組年齡分布無統(tǒng)計學(xué)差異（Z=-1.947，P=0.052）。本研究經(jīng)本院倫理委員會審查并批準。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準 （1）年齡20～65歲，有性行為；（2）HPV分型檢測提示HR-HPV及疑似HR-HPV陽性；（3）就診前2周內(nèi)未行經(jīng)陰道給藥治療；（4）就診前3d內(nèi)未同房；（5）同意配合完整填寫調(diào)查問卷。

1.2.2排除標準 （1）不符合HR-HPV感染檢測標準者；（2）先天性無陰道等各種生殖器畸形或無性生活者；（3）年齡＞65歲或因病行全子宮切除術(shù)后者；（4）妊娠期或哺乳期女性；（5）患有各種免疫性疾病、艾滋病、惡性腫瘤或使用免疫抑制劑等導(dǎo)致免疫功能低下者；（6）合并其他心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病者；（7）合并精神、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者，以及拒絕或無法配合檢查者。

1.3檢測方法

1.3.1HR-HPV DNA檢測 檢查于非月經(jīng)期進行，使用專用細胞采集刷于宮頸移行帶區(qū)按相同時針方向旋轉(zhuǎn)3～5圈，放入裝有固定液的專用保存管中，密封后當天送檢本院檢驗科。采用PCR-反向點雜交法檢測，由專業(yè)檢驗醫(yī)師出具報告。

1.3.2陰道灌洗液細胞因子 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10檢測 在非月經(jīng)期進行陰道灌洗液細胞因子檢測。以無菌0.9%氯化鈉注射液5mL充分沖洗陰道壁上1/3及宮頸陰道部，于后穹窿吸取灌洗液4mL，室溫下2 000r/min離心5min，取上清液分裝后-80℃保存?zhèn)溆茫灰悦嘎?lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測上清液中 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平，操作嚴格按照試劑盒說明書進行，所有試劑盒均購于南京建成生物科技有限公司（批號：H003、H025、H005、H009）。

1.4中醫(yī)體質(zhì)辨識方法 根據(jù)2009年4月9日起實施的《中醫(yī)體質(zhì)分類與判定》[4]中的中醫(yī)體質(zhì)分型標準及其診斷表述依據(jù)，將體質(zhì)分為平和質(zhì)和偏頗體質(zhì)，其中偏頗體質(zhì)包括氣虛質(zhì)、陽虛質(zhì)、陰虛質(zhì)、痰濕質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)、氣郁質(zhì)、特稟質(zhì)。應(yīng)用KY3H中醫(yī)體質(zhì)辨識軟件對研究對象進行分析，通過《KY3H中醫(yī)體質(zhì)辨識表》總結(jié)出相關(guān)體質(zhì)傾向。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 采用 SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；非正態(tài)分布計量資料采用中位數(shù)和四分位數(shù)間距M（Q）表示，組間比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料以頻數(shù)、構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組研究對象中醫(yī)體質(zhì)類型分布比較 在體質(zhì)類型中，感染組中偏頗體質(zhì)患者更多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=17.877，P＜0.05）。見表 1。

2.2兩組研究對象陰道灌洗液細胞因子水平比較兩組間比較，感染組 Th1細胞因子（IL-2、IFN-γ）水平明顯低于對照組，Th2細胞因子（IL-4、IL-10）水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表1 兩組研究對象中醫(yī)體質(zhì)類型分布比較[例（%）]

表2 兩組研究對象陰道灌洗液細胞因子水平比較（±s，pg·mL-1）

表2 兩組研究對象陰道灌洗液細胞因子水平比較（±s，pg·mL-1）

組別 例數(shù) Th1細胞因子 Th2細胞因子IL-2 IFN-γ IL-4 IL-10感染組對照組t值P值60 60 24.65±8.96 29.89±10.37-2.961 0.004 14.65±5.85 23.25±7.10-7.246＜0.01 33.61±1 1.96 26.00±9.37 3.880＜0.01 21.1 4±7.61 13 .28±5.85 6.344＜0.01

2.3兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群陰道灌洗液細胞因子水平比較 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群比較，感染組IL-2、IFN-γ水平低于對照組，其中IL-2水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），IFN-γ水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），IL-4、IL-10 水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。見表 3。

表3 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群陰道灌洗液細胞因子水平比較（±s，pg·mL-1）

表3 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群陰道灌洗液細胞因子水平比較（±s，pg·mL-1）

組別 例數(shù) Th1細胞因子 Th2細胞因子IL-2 IFN-γ IL-4 IL-10感染組對照組t值P值38 15 25.02±9.28 2 8.64±11.1 9-1.2 06 0.234 14.41±5 .86 24.29±7.65-5.057＜0.01 32.74±12.3 3 24.71±7.70 2.3 43 0.023 20.66±7.51 12 .88±5.43 3.644 0.001

2.4兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群Th1/Th2細胞因子比值比較 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群Th1/Th2細胞因子比值比較，感染組IL-2/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10 比值均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群Th1/Th2細胞因子比值比較（±s）

表4 兩組研究對象中偏頗體質(zhì)人群Th1/Th2細胞因子比值比較（±s）

組別 例數(shù) IL-2/IL-4 IL-2/IL-10 IFN-γ/IL-4 IFN-γ/IL-10感染組對照組t值P值38 15 0.91±0.56 1.3 4±0.82-2.1 60 0.036 1.49±1.10 2 .85±2.40-2.848 0.006 0.59±0.59 1.03±0.35-2.732 0.009 0.92±0.85 2.3 4±1.60-4.232 ＜0.01

3 討論

HR-HPV感染是CIN及宮頸癌發(fā)生的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，在年輕女性中HR-HPV的感染率可高達40%[5]，然而并不是所有感染HR-HPV的女性都最終發(fā)展成為CIN或?qū)m頸癌，相反在感染者中存在一定的HPV自然清除率，文獻顯示年輕女性中HPV自然清除率可高達77.42%[6]。由此可見，女性接觸HRHPV后是否發(fā)生感染以及感染后病情是否進一步進展，可能與其機體本身相關(guān)?！鹅`樞·五變》曰：“肉不堅，腠理疏，則善病風(fēng)……五臟皆柔弱者，善病消癉……粗理而肉不堅者，善病痹?！惫湃嗣鞔_提出了中醫(yī)體質(zhì)的偏頗決定了機體對不同疾病的易感性[7]。王琦教授[8]提出了中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說，將人的體質(zhì)分為九種，并且認為不同體質(zhì)影響疾病的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。本研究結(jié)果顯示，在中醫(yī)體質(zhì)分布中，感染組中偏頗體質(zhì)占主導(dǎo)，且比例明顯高于對照組，由此推測偏頗體質(zhì)女性可能更容易感染HR-HPV。

HR-HPV感染在中醫(yī)學(xué)中無專門論述，患者多見陰道分泌物量多、色黃、性交接觸性出血，因此臨床上多將其歸入“帶下病”進行研究。帶下病其病機為任脈損傷、帶脈失約，而“濕”邪為其主要致病因素，濕邪既可外感亦可內(nèi)生。偏頗體質(zhì)患者更易出現(xiàn)臟腑功能失調(diào)，如陽虛質(zhì)、氣虛質(zhì)、濕熱質(zhì)、痰濕質(zhì)等患者?？梢姺?、脾、腎三臟運化疏布水液功能失調(diào)，進而出現(xiàn)或加劇內(nèi)濕的形成，日久導(dǎo)致正氣不足。中醫(yī)學(xué)認為“正氣存內(nèi)，邪不可干”“邪之所湊，其氣必虛”“陰平陽秘，精氣乃生”。所謂內(nèi)外相因，同氣相求，HR-HPV作為外感濕熱邪毒，更易乘虛侵襲偏頗體質(zhì)患者，因此偏頗體質(zhì)患者更易感染HR-HPV。

人體的免疫功能包括細胞免疫以及體液免疫兩方面，兩者共同作用以抵抗外界病原體的侵襲。陰道細胞可分泌多種細胞因子，而陰道局部免疫更與宮頸病變發(fā)生關(guān)系密切[3]。輔助性T細胞根據(jù)其分泌的細胞因子類型分為Th1和Th2兩種亞型[9]。Th1細胞主要表達IL-2、IFN-γ等，主要介導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答，在抗病毒、殺傷腫瘤過程中發(fā)揮重要作用[10]；Th2細胞主要表達IL-4、IL-10等，參與體液免疫應(yīng)答。正常狀態(tài)下，Th1/Th2處于動態(tài)平衡，是維持機體正常免疫功能的重要因素，在清除病毒，誘導(dǎo)免疫耐受等方面起著重要作用，并且影響到感染性疾病、腫瘤性疾病等的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后[11]。當Th1/Th2平衡被打破，向Th2發(fā)生漂移時，機體清除病毒及抗腫瘤能力下降[12]，且Th2型炎癥促進感染HPV的宮頸細胞向?qū)m頸癌逐漸發(fā)展[13]。本研究結(jié)果顯示，感染組IL-2、IFN-γ水平明顯低于對照組，IL-4、IL-10明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，說明以IL-4、IL-10為代表的Th2型細胞因子水平增高，機體對病毒的抵御能力下降。

進一步對兩組研究對象中的偏頗體質(zhì)人群進行研究，結(jié)果顯示感染組IL-2、IFN-γ水平低于對照組，其中IL-2差異無統(tǒng)計學(xué)意義，IFN-γ差異有統(tǒng)計學(xué)意義，IL-4、IL-10水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。偏頗體質(zhì)人群Th1/Th2細胞因子比值比較，感染組 IL-2/IL-4、IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。該結(jié)果提示偏頗體質(zhì)的HR-HPV感染患者中Th1/Th2平衡向Th2漂移，由此進一步說明了Th2漂移在宮頸HR-HPV感染的發(fā)展過程中起著重要作用。

綜上所述，本研究提示偏頗體質(zhì)女性更易感染HR-HPV，且在HPV感染患者中Th1/Th2平衡向Th2漂移?！端貑枴に臍庹{(diào)神大論》云：“圣人不治已病治未病。”[14]“治未病”理論的重要理念之一就是體質(zhì)調(diào)控[7]。依據(jù)研究結(jié)果，未來可以應(yīng)用中醫(yī)藥對偏頗體質(zhì)女性進行體質(zhì)調(diào)控，對陰道局部免疫Th1/Th2平衡進行調(diào)節(jié)，從而預(yù)防HPV感染，進而達到“治未病”的目的[2]。