氣相色譜法同時(shí)測定磷酸特地唑胺原料藥中4種有機(jī)溶劑的殘留量

周慶凱

天津紅日藥業(yè)股份有限公司 天津 301700

磷酸泰地唑胺是美國Cubist制藥公司開發(fā)的一種惡唑烷酮類抗生素。用于治療金黃色葡萄球菌（包括耐甲氧西林菌株和甲氧西林敏感菌株）、各種鏈球菌及腸球菌等革蘭陽性細(xì)菌引起的成人急性細(xì)菌性皮膚和皮膚組織感染。

1 材料

1.1 儀器

Aglient7890A型全自動(dòng)氣相色譜儀、AglientG1888頂空全自動(dòng)進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測器，ChemStation在線色譜工作站；6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛細(xì)管色譜柱色譜柱，KQ-100B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；SartoriusBP211D型天平(賽多利斯公司)[1]。

1.2 藥品與試劑

磷酸特地唑胺原料藥(四川大學(xué)華西藥學(xué)院自制）；色譜純甲醇對照品、色譜純二氯甲烷對照品、色譜純乙酸乙酯對照品、色譜純N，N-二甲基甲酰胺均購自德國默克公司，分析純二氧六環(huán)對照品購自成都市科龍化工試劑廠，純度均≥99．8%。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛細(xì)管色譜柱為本方法色譜柱；檢測器：氫火焰離子化檢測器；進(jìn)樣口溫度設(shè)置為200℃；火焰氫離子化檢測器溫度設(shè)置為250℃；柱溫采取程序升溫方式：起始柱溫設(shè)置為50℃，保持5分鐘，然后以每分鐘15℃升溫至220℃后再保持5分鐘；載氣使用高純氮?dú)?，其柱流速為每分?．0mL；分流比設(shè)置為5：1；進(jìn)樣方式為頂空進(jìn)樣；頂空進(jìn)樣體積為1．0uL；頂空瓶裝樣量為10mL；頂空瓶溫度設(shè)定為100℃；頂空平衡時(shí)間設(shè)置為30分鐘。

2.2 溶液的配制

空白溶液：精密量取N，N二甲基甲酰胺1mL，置于10mL頂空瓶中密封保存?zhèn)溆?。混合對照品溶液：精密稱取甲醇150mg、二氯甲烷30mg、乙酸乙酯250mg、二氧六環(huán)對照品各19mg，分別用DMF稀釋至10mL，作為單個(gè)對照溶液，備用；分別精密量取2mL單個(gè)對照品溶液于50mL量瓶中，用N，N二甲基甲酰胺稀釋至刻度，再搖勻后作為混合對照品儲備液；精密量取2．5mL混合對照品儲備液于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀釋至10mL，再搖勻后作為混合對照品溶液。取1mL置于10mL頂空瓶中，加蓋密封保存?zhèn)溆?。供試品溶液：精密稱定本品適量，加N，N二甲基甲酰胺溶解并定容，超聲助溶5分鐘使之溶解，搖勻，制成每毫升50mg的供試品溶液，備用[2]。精密量取1mL供試品溶液于10mL頂空瓶中，加蓋密封即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別精密量取單一對照品溶液1．0mL，對各待測組分進(jìn)行定位檢測。另精密量取空白對照溶液、混合對照品溶液、供試品溶液，同法測定，記錄色譜圖樣報(bào)告，所得空白溶劑、混合對照品溶液及供試品溶液氣相圖譜在本實(shí)驗(yàn)的色譜條件下，各待測組分相互無干擾，均能達(dá)到良好的分離，峰形良好，分離度＞1．5，理論塔板數(shù)均大于50000；甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、N，N二甲基甲酰胺的保留時(shí)間分別為 2．975、3．885、4．544、5．715 和 7．224分鐘[3]。由此可見，該方法系統(tǒng)適用性符合要求。

2.4 精密度試驗(yàn)

秘密量取混合對照品溶液1mL于頂空瓶中，加蓋密封，采用本實(shí)驗(yàn)色譜條件同法進(jìn)行分析，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣測定6次，計(jì)算甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)峰面積的RSD分別為0．65%、1．12%、0．73%和1．36%（n=6）。殘留有機(jī)溶劑組分的 RSD均小于2%，說明本方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

制備供試品溶液6份，分別放置室溫下0、1、2、4、6和8h時(shí)后采用本實(shí)驗(yàn)色譜條件同法進(jìn)行檢測分析，記錄色譜峰面積。結(jié)果本品中二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)均未檢出，只檢出甲醇，其峰面積的RSD為1．15%（n=6），表明本溶液在8小時(shí)內(nèi)(室溫)穩(wěn)定。

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取混合對照品儲備液 0．1、0．5、1．0、2．5、5．0 和10mL，分別置于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀釋至10mL作為系列標(biāo)準(zhǔn)曲線混合對照測試溶液，依次取上述溶液1．0mL于頂空瓶中，加蓋密封，再采用本實(shí)驗(yàn)色譜條件(“2．1”項(xiàng)下)同法進(jìn)樣測定分析，分別記錄各個(gè)系列的色譜峰面積[4]。以各個(gè)對照品的質(zhì)量濃度ρ(μg/mL)為橫坐標(biāo)，以與之相對應(yīng)的峰面積(A)為縱坐標(biāo)在Excle辦公軟件中進(jìn)行線性回歸分析，分別得到甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程及線性范圍，結(jié)果見表1。

表1 4種殘留溶劑的線性方程和線性范圍

3 討論

頂空平衡溫度越高，頂空瓶內(nèi)的飽和蒸氣壓越高，揮發(fā)氣體的濃度越高，靈敏度就相應(yīng)越高。但是溫度過高可能會(huì)損壞頂空進(jìn)樣瓶導(dǎo)致瓶口漏氣，使得待測成分濃度不準(zhǔn)確，以及某些物質(zhì)可能會(huì)產(chǎn)生降解產(chǎn)物影響測定的結(jié)果[5]。當(dāng)平衡時(shí)間為30分鐘時(shí)，本課題組比較了頂空平衡溫度60、70、80、90、100、110和120℃下的待測溶劑的峰面積，發(fā)現(xiàn)色譜峰面積隨著平衡溫度的升高而升高，但在100℃以上的色譜峰面積增加不明顯，當(dāng)溫度升至110℃時(shí)，有少量未知降解雜質(zhì)出現(xiàn)，考慮到在100℃各待測有機(jī)溶劑都能檢出且有良好的響應(yīng)，故本實(shí)驗(yàn)的頂空平衡溫度設(shè)置為100℃。特地唑胺較第一代惡唑烷酮抗生素利奈唑胺相比，主要有兩個(gè)優(yōu)勢，一個(gè)是用法為每天一次共使用六天，比利奈唑胺的每天兩次共十天更方便；另外一個(gè)是劑型有注射劑和片劑，方便臨床切換，減少病人住院時(shí)間，從而降低了費(fèi)用[6]。

本研究首次通過頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定磷酸特地唑胺原料藥中的4種殘留有機(jī)溶劑，并對其進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的色譜條件下，各殘留溶劑之間分離效果好，靈敏度高，在濃度范圍內(nèi)線性良好，回收率符合規(guī)定[7]。該頂空氣相色譜研究方法快速、簡便、經(jīng)濟(jì)、靈敏，準(zhǔn)確、精密度和重現(xiàn)性良好，適合磷酸特地唑胺原料藥中甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑的殘留量的同時(shí)測定，可以為藥物分析工作者對磷酸特地唑胺原料藥中殘留溶劑的質(zhì)量控制提供一定的參考。