魚油中21種脂肪酸的檢測(cè)

聶法慧

青島菲優(yōu)特檢測(cè)有限公司 山東青島 266000

深海魚油富含不飽和脂肪酸，主要有效成分為歐米伽3不飽和脂肪酸。歐米伽3不飽和脂肪酸的主要成分為EPA（二十碳五稀酸）、DHA（二十二碳六稀酸）具有增強(qiáng)記憶、改善動(dòng)脈硬化[1]、促進(jìn)嬰幼兒大腦發(fā)育等重要功效。因此，對(duì)其有效組分進(jìn)行測(cè)定具有重要意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器與分析條件。島津GC2010plus氣相色譜儀。

色譜柱：SP-2560，100m×0.25mm×0.20μm；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。

載氣：高純氮?dú)?9.999%；色譜柱流量：1.67mL/min；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：260℃；溫度程序：初始溫度140℃保留5min，140-152℃升溫速度2℃/min；152-175℃升溫速度3℃/min；175-205℃，升溫速度4℃/min；205-230℃,升溫速度10℃/min，保留20min；230-240℃，升溫速度5℃/min，保留5min；進(jìn)樣量：1μL；分流比：40：1。

1.2 試劑和溶液

實(shí)驗(yàn)用水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)用水。

（1）氫氧化鈉：優(yōu)級(jí)純。

（2）甲醇：色譜純。

（3）無水硫酸鈉：分析純。

（4）氯化鈉：分析純。

（5）三氟化硼-甲醇溶液：14%。

（6）異辛烷：色譜純。

（7）0.5M氫氧化鈉–甲醇溶液：2g氫氧化鈉溶于100mL甲醇中。該溶液放置較長(zhǎng)時(shí)間，可能會(huì)產(chǎn)生少量白色碳酸鈉沉淀，不影響甲酯的制備。

（8）飽和氯化鈉溶液：36g氯化鈉溶于100mL水。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將32種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品（上海安譜GLC-461）配成標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度分別為3，10，50，100，150μg/mL，以30μg/mL二十三烷酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，以脂肪酸甲酯與內(nèi)標(biāo)物濃度比為橫坐標(biāo)，響應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線[2]。

1.4 樣品制備

樣品前處理。準(zhǔn)確稱取樣品0.02g于已準(zhǔn)確加入0.9mg二十三烷酸甲酯的50mL玻璃離心管中，加入1.5mL氫氧化鈉-甲醇溶液，蓋緊蓋子，渦旋混合，沸水浴5min，通風(fēng)櫥冷卻，加2mL三氟化硼-甲醇溶液，蓋緊蓋子，渦旋混合，沸水浴30min，冷卻，加5mL異辛烷，充氮?dú)?0s，蓋緊蓋子，渦旋混合。加5mL飽和氯化鈉溶液，充氮?dú)?0s，蓋緊蓋子，渦旋混合，離心機(jī)2500r/min離心10min。取上清液加入盛有0.5g無水硫酸鈉的帶蓋試管中，混勻，上清液稀釋6倍過有機(jī)過濾器（0.22μm），氣相色譜儀檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性與定量

（1）定性。由于脂肪酸屬于同系物，出峰順序與碳鏈長(zhǎng)度有一定的關(guān)系，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)圖譜，判斷21種脂肪酸甲酯的出峰順序，見圖。

（2）定量。以二十三烷酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，以脂肪酸甲酯與內(nèi)標(biāo)物濃度比為橫坐標(biāo)，響應(yīng)峰面積比為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。將處理好的待測(cè)液注入氣相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以目標(biāo)峰與內(nèi)標(biāo)峰面積比與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較確定待測(cè)液中脂肪酸甲酯的濃度[3]。

樣品中脂肪酸含量（%）計(jì)算如下式：

式中：

X——樣品中脂肪酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；

C——待測(cè)液中脂肪酸甲酯濃度，單位：μg/mL；

V——定容體積，單位：mL；

f——稀釋倍數(shù)；

m——樣品質(zhì)量，單位：g；

FFAMEi-FAi——脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在實(shí)驗(yàn)條件下，21種脂肪酸甲酯響應(yīng)具有良好的線性關(guān)系，R2大于0.999。

2.3 方法的精密度和準(zhǔn)確性

（1）方法精密度。選取兩個(gè)魚油作為樣品，每個(gè)樣品測(cè)定10次，分別計(jì)算21種脂肪酸含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.8%-4.8%之間，符合檢測(cè)要求。

（2）方法準(zhǔn)確度。在魚油樣品種做脂肪酸甲酯的添加回收，平行測(cè)定10次，平均回收率在97-105%之間。購買有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（FapasT14152）進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果都在允許誤差范圍內(nèi)。該方法準(zhǔn)確度符合檢測(cè)要求[4]。

3 結(jié)語

通過測(cè)定結(jié)果可以看出，本方法能夠?qū)︳~油中的脂肪酸進(jìn)行較好的分離定性和定量檢測(cè)，具有較好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。能夠較為準(zhǔn)確的檢測(cè)魚油中脂肪酸的含量。