喜鵲雌雄個體血清蛋白比較分析

張雋晟 李娜 金志民

摘要：采用聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳方法，對喜鵲（Pica pica）雌雄個體的血清蛋白進行分離分析。結(jié)果表明，喜鵲雌雄個體共分離出電泳遷移率0.852～0.031的20條譜帶，雌、雄性個體分離出的譜帶數(shù)分別是18條和17條，其中有15條譜帶為雌雄個體的共有譜帶。在遷移率0.316、0.063、0.054處的譜帶為雌性個體特有的譜帶，在遷移率0.406、0.391處的譜帶為雄性個體特有的譜帶。喜鵲雌雄個體血清蛋白的譜帶分布和活性強弱存在明顯差異。

關(guān)鍵詞：喜鵲（Pica pica）;血清蛋白;聚丙烯酰胺凝膠電泳;遷移率;譜帶

中圖分類號：Q959.7+39? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）11-0097-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.11.023? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務(wù)）標識碼（OSID）：

Comparative analysis of serum albumin between female and male magpie

ZHANG Jun-sheng1，LI Na2，JIN Zhi-min1

（1.College of Life Science and Technology，Mudanjiang Normal University，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China;

2.Mudanjiang Medical School，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China）

Abstract： The serum albumin of the male and female magpies （Pica pica） were isolated and analyzed by polyacrylamide gel vertical plate electrophoresis. The results showed that the male and female magpie individuals were isolated 20 bands withelectrophoretic mobility from 0.852～0.031， the females were isolated for 18 bands，and the males for 17 bands， among them 15 bands were communal for the females and the males. The bands with the electrophoresis mobility 0.316， 0.063， 0.054 were unique for the females， and the bands with the electrophoresis mobility 0.406， 0.391 were unique for the males. There were significant differences in the band distribution and activity of serum albumin between the male and female magpies individuals.

Key words： magpie（Pica pica）; serum albumin; polyacrylamide gel electrophoresis（PAGE）; electrophoretic mobility; band

喜鵲（Pica pica）屬鳥綱雀形目鴉科，為廣泛分布的世界性鳥類[1]，主要棲息在荒野、農(nóng)田、城郊，為本地居留型優(yōu)勢種群，在鳥類群落結(jié)構(gòu)中占有重要地位[2]。喜鵲食性雜食量大，在消滅農(nóng)林害蟲和維護生態(tài)平衡方面發(fā)揮著重要作用。

血清蛋白是血漿中含量最為豐富的蛋白質(zhì)，由于可以在不損害動物的情況下通過對其抽血來獲得血清蛋白，且血清中的多種蛋白在許多的動物中具有高度的多態(tài)性，因此得到廣泛的研究[3]。血清蛋白的電泳圖譜及其量的變化可以反映動物的親緣關(guān)系及健康、營養(yǎng)狀況，也可用于動物的疾病診斷[4]。關(guān)于動物血清蛋白和雌雄個體之間血清蛋白的研究已有諸多報道[5-12]，但鮮見關(guān)于喜鵲雌雄個體之間血清蛋白比較分析的研究報道。為此，本研究采用聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳的方法，對喜鵲雌雄個體的血清蛋白進行分離分析，以期為其血清蛋白圖譜的建立及野生動物的保護提供一定的依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 試驗動物? 長白山周邊林區(qū)捕獲的成年健康喜鵲的雌雄個體各2只。

1.1.2? 試驗藥品? Tris、HCl、四甲基乙二胺（TEMED）、過硫酸銨（AP）、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、甘油、溴酚藍、瓊脂糖、考馬斯亮藍R-250、丙三醇、冰乙酸等均為國產(chǎn)分析純或生化試劑。

1.1.3? 試驗儀器? 電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、高速冷凍離心機（美國，Beckman64R）、微量移液器（Eppendorf公司）、凝膠成像系統(tǒng)（AlphaImager Mini，美國Alpha公司）。

1.2? 方法

1.2.1? 血清的制備? 采用無傷害取血的方法從喜鵲腋下部血管取血，在室溫下靜置30 min以后，于高速冷凍離心機中4 ℃、4 000 r/min離心20 min，上清液為血清，置于超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2? 血清蛋白電泳方法? 采用聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳的方法[13]對喜鵲雌雄個體的血清蛋白進行分離分析。為保證電泳圖譜的準確性，分別在相鄰點樣孔連續(xù)點樣，用凝膠成像儀對凝膠板拍照并保存電泳圖譜，根據(jù)電泳圖譜計算電泳遷移率[14]。

凝膠板染色方法：將電泳后的膠板用0.05%考馬斯亮藍R-250的20%磺基水楊酸液配制成的染色液在37 ℃水浴中染色30 min左右，待血清蛋白條帶出現(xiàn)，用7%冰乙酸在50 ℃水浴中脫色，直到背景藍色退去、蛋白條帶清晰為止。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 喜鵲雌雄個體血清蛋白電泳結(jié)果

通過電泳得到喜鵲雌雄個體血清蛋白電泳圖譜（圖1），根據(jù)電泳圖譜計算譜帶電泳遷移率（Rm）并制譜帶分布表（表1）。

從表1可以看出，喜鵲雌雄個體血清蛋白共分離電泳遷移率0.852～0.031的20條譜帶。將電泳圖譜按照從陽極至陰極劃分成4個區(qū)，分別為Ⅰ區(qū)～IV區(qū)，Ⅰ區(qū)為清蛋白區(qū)，Ⅱ～IV區(qū)為球蛋白區(qū)。Ⅰ區(qū)分離出3條譜帶，a、b譜帶譜帶較寬并且顏色較淺，c譜帶譜帶寬且顏色深，且a、b、c譜帶雌雄活力相同;a、b、c譜帶為遷移率0.852、0.719、0.602處雌雄個體所共有的譜帶。Ⅱ區(qū)存在3條譜帶，d譜帶譜帶顏色較深，且雌性活力大于雄性，e、f譜帶譜帶顏色較淺;其中d譜帶為雌雄個體在遷移率0.453處所共有的譜帶，e、f譜帶為雄性個體在遷移率0.406、0.391處所特有的譜帶。Ⅲ區(qū)存在6條譜帶，g譜帶譜帶較窄但顏色較深，且為雌性個體所特有的譜帶;h、i、l譜帶譜帶較窄，雌性活力均大于雄性;j、k譜帶譜帶較窄并且顏色較淺，j、k譜帶雄性活力大于雌性;其中g(shù)譜帶為遷移率0.316處雌性個體所特有的譜帶。IV區(qū)存在8條譜帶，m、t譜帶譜帶窄并且顏色深，且雌雄活力相同;n、o、p、q譜帶譜帶窄，且n、o、p、q譜帶雄性活力略大于雌性;r、s譜帶窄且顏色淺，r、s譜帶為雌性個體所特有的譜帶;其中m、n、o、p、q、t譜帶在遷移率0.133、0.109、0.098、0.082、0.070、0.031處為雌雄個體所共有的譜帶，r、s譜帶為遷移率0.063、0.054處雌性個體所特有的譜帶。

2.2? 喜鵲雌雄個體血清蛋白電泳結(jié)果分析

喜鵲雌雄個體血清蛋白共分離出的20條譜帶中，雌性個體分離出18條譜帶，雄性個體分離出17條譜帶。在遷移率0.852、0.719、0.602、0.453、0.301、0.289、0.281、0.266、0.238、0.133、0.109、0.098、0.082、0.070、0.031處的15條譜帶為雌雄個體所共有的譜帶。遷移率0.316、0.063、0.054處的3條譜帶為雌性個體所特有的譜帶，遷移率0.406、0.391處的2條譜帶為雄性個體所特有的譜帶。在遷移率0.301、0.289處雌雄個體的蛋白譜帶活力不同，雌性個體的活力大于雄性個體;在遷移率0.281、0.266處的譜帶雌雄個體的活力不同，雄性個體的活力大于雌性個體。喜鵲雌雄個體的血清蛋白譜帶分布和活性均存在差異。

動物的血清中富含許多的不同種蛋白質(zhì)，各種蛋白質(zhì)都有其獨有的一級結(jié)構(gòu)和構(gòu)象，在同種緩沖液具有相同pH時，它們的等電點、帶電性質(zhì)和帶電量都各不相同，因此，可以將不同種類的蛋白質(zhì)通過電泳方法進行分離。動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的生物合成都是由其編碼的各類基因控制的，基因的實質(zhì)就是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，這些基因在生物進化過程中不斷出現(xiàn)突變，受其控制的遺傳性狀（表型）變異的信息必然被編入DNA遺傳密碼中去，再經(jīng)復(fù)制轉(zhuǎn)錄等系列程序，最終表現(xiàn)在蛋白質(zhì)中并通過電泳方法被分離檢出[15]。喜鵲雌雄個體血清蛋白的譜帶分布和活性強弱存在明顯差異，這可能與雌雄個體在形態(tài)、體貌和生理結(jié)構(gòu)及雌雄激素的分泌水平等有關(guān)。蛋白質(zhì)為生命的表現(xiàn)形式，它的表達受到基因的調(diào)節(jié)控制，可能與其決定性別的基因型相關(guān)，多數(shù)條帶的活性相同，這是基因一致性在電泳圖譜上的體現(xiàn)。喜鵲雌雄個體之間血清蛋白的譜帶分布和活性存在差異，也與雌雄個體生殖機能的不同有關(guān)，它們分配在生殖生長上的能量也不相同。關(guān)于影響脊椎動物雌雄生長差異的原因馬細蘭等[16]從不同的角度進行了分析，其中脊椎動物生長軸基因表達的雌雄差異主要體現(xiàn)在生長軸的激素水平、受體濃度、結(jié)合蛋白濃度、激素及其受體mRNA表達水平等幾個方面。

3? 小結(jié)

喜鵲雌雄個體血清蛋白共分離出20條譜帶，雌性個體血清蛋白分離出的譜帶數(shù)比雄性個體多出1條。雌雄個體血清蛋白分離出的譜帶數(shù)、譜帶分布和活性均有差異，既有共有譜帶各自又有特有譜帶。雌雄個體血清蛋白之間的這種差異與其決定性別的基因型相關(guān)，與生理結(jié)構(gòu)及雌雄激素的分泌水平密切相關(guān)。

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