手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用

楊徑閑

（吉林省松原市中心醫(yī)院，吉林 松原 138000）

0 引言

人體遺傳性狀之一就是血型，血型是指血液中紅細胞、白細胞、血小板表面的抗原類型。血型通常是指紅細胞膜上特異性抗原類型，臨床運用最多的包括ABO、Rh兩大血型系統(tǒng)。ABO血型分型是根據(jù)紅細胞膜上是否存在抗原A與抗原B而進行鑒別的，A型僅有抗原A，B型只有抗原B，AB型則同時存在A和B抗原，O型則無這兩種抗原。血型不同血清中抗體不同，但不含有對抗自身紅細胞抗原的抗體。人的紅細胞上具有與恒河猴同樣的抗原稱為Rh陽性血型，不含有此種抗原則稱為Rh陰性血型。在我國Rh陰性率僅為1%左右。最復(fù)雜的紅細胞血型就是Rh系統(tǒng)，已發(fā)現(xiàn)40余種Rh抗原，其中D抗原抗原性最強，所以也將含有D抗原的紅細胞血液稱為Rh陽性，而缺乏D抗原的紅細胞血液稱為Rh陰性[1]。血型系統(tǒng)是在獨立遺傳基因控制下經(jīng)若干相互關(guān)聯(lián)抗原抗體組成的[2]。鑒定ABO血型主要是檢測紅細胞中A、B抗原及抗A和抗B抗體。血液中除ABO血型以外還存在特殊血型，如Rh型，因此在血型鑒定中要高度注意[3]。現(xiàn)就我院采用手工微柱凝膠免疫檢驗法鑒定ABO、RhD血型抗原的臨床效果進行歸納，詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至12月來我院體檢的1200例體檢者為研究對象，其中男性610例，女性590例；年齡12～52歲，平均（34.8±0.2）歲。所有研究對象未應(yīng)用影響血型檢測結(jié)果的藥物、也不存在影響檢測結(jié)果的相關(guān)疾病，自愿參與本次研究，簽署知情同意書。排除哺乳期、妊娠期者以及精神病患者。

1.2 研究方法

①常規(guī)試管檢測：用一支試管滴入1滴抗D試劑，加入1滴2%～5%被檢紅細胞懸液，搖勻后1000 r/min條件離心1min，在試管凝集完全、液體清亮后以肉眼觀察試管底是否存在紅細胞凝塊、管底細胞是否出現(xiàn)花邊狀，再用手指輕輕彈一下試管后，觀察凝塊分散情況，不凝的液面清亮，試管底部血紅細胞均勻沉積，邊緣整齊，輕彈試管后紅細胞上升而呈均勻懸液。輕微凝集試管則將液體轉(zhuǎn)至載玻片實施鏡檢，得出結(jié)果。若凝集結(jié)果顯示存在D抗原則為RhD陽性，否則為RhD陰性。鑒定ABO血型判斷依據(jù)為IgM類特異性血型抗體和紅細胞膜上特異性抗原結(jié)合的凝集反應(yīng)。②手工微柱凝膠免疫檢驗法：采集血液標本5mL，分成3份，分離血清及紅細胞，制備紅細胞懸液（1%），取50μL標本加入抗A、抗B、抗O微柱凝膠檢測試管，離心，觀察紅細胞凝集于微柱表面的血液樣本為陽性，沉在底部的是陰性。

2 結(jié)果

手工微柱凝膠免疫檢驗法與常規(guī)試管法鑒別ABO、RhD血型抗原的結(jié)果完全一致，1200例體檢者ABO陽性率96.58%、RhD陽性率0.25%，檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異性（P＞0.05），見表1。

表1 兩種檢測方法的判斷結(jié)果[n(%)]

3 討論

血型檢驗具有非常重要的臨床意義，只有準確的血型配型才能保證不會發(fā)生輸血凝集現(xiàn)象[4]。血型檢驗在產(chǎn)前檢查中也非常重要，二者ABO血型不和或Rh血型不和都會誘發(fā)胎兒及新生兒溶血，繼而出現(xiàn)死產(chǎn)、死胎等嚴重性不良結(jié)局[5]。對所有需要輸血搶救的患者在輸血之前都要完善血型鑒別。ABO血型是器官移植、輸血等過程中必須使用的一種血型系統(tǒng)，只有完善血型鑒別之后才能確保臨床輸血治療的安全[6]。受血者、供血者中任何一方ABO血型鑒定錯誤都可能導(dǎo)致輸注異型血，溶血性輸血反應(yīng)風(fēng)險明顯增加，患者則有生命危險。在ABO正反定型不符時，準確及時找出原因、正確鑒定血型對臨床意義重大[7]。常規(guī)試管法測定血型在初次血型鑒定中應(yīng)用廣泛，所需的儀器要求不高。操作過程中試管清潔度要求較高是為了避免假凝集，先加血清、后加紅細胞懸液是為了核實血清是否漏加，離心時間、速度都必須控制得當，在光線背景重組下觀察凝集程度，快速記錄結(jié)果[8-10]。常規(guī)試管法是臨床輸血檢驗中的傳統(tǒng)手段，是輸血檢驗的金標準，但該檢驗需要耗時較多，還需對紅細胞進行洗滌3次、恒溫培養(yǎng)1 h后才能獲得檢測結(jié)果，這對于急危重癥患者則會延誤最佳治療時機而加重病情[11]。臨床上實際檢測過程中經(jīng)常發(fā)生試劑不標準或污染、失效等情況，實際添加錯誤或離心控制不佳、細胞和血清比例不適合、結(jié)果判斷誤差等都會造成最終鑒定效果偏差。還有部分血型抗原減弱類疾病患者的血型抗原含量降低而難以被檢出，部分抗體效價低者也不容易被檢出[9]。近些年大家推崇使用手工微柱凝膠免疫檢驗法，在血型鑒定中具有極其重要的地位[12]。手工微柱凝膠免疫法的原理：以凝膠為填充物，充分結(jié)合離心技術(shù)、凝膠分子篩過濾技術(shù)以及血型血清學(xué)抗原體反應(yīng)特異性技術(shù)等，在反應(yīng)后紅細胞凝集，離心不能通過凝膠間隙，滯留在凝膠上層和分散凝膠中，此時為陽性，反之則為陰性[13]。目前，微柱凝膠法在國內(nèi)外輸血領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，主要用于交叉配血、血型鑒定、抗體篩檢、以及IgG抗A、IgG抗B滴度檢測等在分子排阻層析原理下經(jīng)過微小凝膠顆粒構(gòu)成的濾網(wǎng)在離心下實現(xiàn)與抗體反應(yīng)的紅細胞懸浮在膠中或膠表面、與抗體不反應(yīng)的紅細胞沉到微柱凝膠尖底部，最后通過自動化儀器或肉眼來判讀結(jié)果[14]。國內(nèi)外越來越多的醫(yī)療機構(gòu)采用微柱凝膠法鑒定ABO、RhD血型抗原，且分為自動化、手工兩種，手工微柱凝膠免疫檢測ABO、RhD血型抗原專用鑒定卡是ABO、RhD血型抗原常規(guī)鑒定所用，具有與試管法一致的靈敏性和準確性，但其反應(yīng)強度更高[15]，特別是進行抗D鑒定時的反應(yīng)強度明顯增高，所以更適合抗D鑒定。微柱凝膠法檢測血型抗原快速、簡單、省時省力，能得到穩(wěn)定的檢測結(jié)果圖譜，便于事后追查。但微柱凝膠法鑒定陳舊血液標本時假陽性率偏高，因此采用此法鑒定血型抗原時要注意使用新鮮血液標本。另外，血清中纖維蛋白也會引起微柱凝膠法鑒定結(jié)果假陽性，所有紅細胞懸液制定時要避免帶有纖維蛋白細胞凝塊[16]。本組選擇1200例體檢對象先后分別運用常規(guī)試管法、手工微柱凝膠免疫檢驗法鑒別ABO、RhD血型抗原，結(jié)果表明兩種檢測方法的血型抗原鑒定結(jié)果一致。所以說，手工微柱凝膠免疫檢驗法鑒別ABO、RhD血型抗原的臨床效果與常規(guī)試管法的檢測效果相當，且操作簡單、結(jié)果判斷準確、靈敏性高，臨床應(yīng)用前景廣闊，值得推廣使用。