種公豬精液攜帶6種繁殖障礙性病原狀況調(diào)查

楊永能

（云南省楚雄州動物疫病預(yù)防控制中心，云南楚雄 675000）

豬繁殖障礙性疾病的存在給各地養(yǎng)豬業(yè)帶來了潛在的威脅和巨大的經(jīng)濟損失。隨著養(yǎng)豬業(yè)的進一步發(fā)展，多病因的混合感染讓豬繁殖障礙病因越來越復(fù)雜，防治越來越困難。當前，導(dǎo)致豬群發(fā)生繁殖障礙性疾病的病毒性疫病主要有：豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）、豬瘟（CSF）、偽狂犬?。≒R）、豬細小病毒?。≒P）、豬乙型腦炎（JE）等。公豬精液中存在這些疫病的病毒會給養(yǎng)豬業(yè)造成潛在的威脅。

云南省楚雄彝族自治州位于滇中腹地，東靠昆明市、西接大理白族自治州、南臨普洱市和玉溪市、北連四川省，土地面積2.84萬平方千米。楚雄州下轄10縣（市），分別為祿豐縣、南華縣、雙柏縣、姚安縣、元謀縣、武定縣、永仁縣、牟定縣、大姚縣和楚雄市，全州103個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，2017年底全州常住人口達273.3萬人。2017年楚雄州生豬存欄277.3萬頭，出欄377萬頭，畜禽肉類總產(chǎn)量43.99萬噸；全州畜牧業(yè)總產(chǎn)值達114.91億元，占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的37.15%。

楚雄州動物疫病預(yù)防控制中心2017年對豬群中的豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬乙型腦炎病毒、豬細小病毒、豬圓環(huán)病毒抗體抽樣檢測，陽性率結(jié)果為：未檢出豬瘟病毒，豬偽狂犬病毒32.51%、豬乙型腦炎病毒64.77%、豬細小病毒26.97%、豬圓環(huán)病毒64.38%。采集180份豬脾、肺組織樣品進行豬瘟病毒、高致病性豬藍耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病毒核酸進行監(jiān)測，檢出豬瘟病毒陽性樣品2份、高致病性豬藍耳病病毒陽性樣品1份、豬圓環(huán)病毒2型陽性樣品33份，未檢出豬偽狂犬病毒，陽性率分別為1.11%、0.56%、18.33%和0。

楚雄州轄區(qū)內(nèi)目前有164個豬的人工授精改良站、1 242個本交改良站，2017年完成33.61萬胎豬的人工授精、15.62萬胎豬的本交。對當?shù)? 500戶母豬養(yǎng)殖戶的2 120頭能繁母豬調(diào)查，發(fā)現(xiàn)受胎率為93.75%、平均窩產(chǎn)仔數(shù)為10.64頭、產(chǎn)仔成活率為94.49%。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源

2017年8月至2018年2月對楚雄州10個縣（市）分別選取5個對外豬精液供應(yīng)站點，共50個種豬精液供應(yīng)點，合計采集212份精液樣品進行檢測，分別是楚雄市56份、元謀縣10份、大姚縣20份、姚安縣10份、武定縣16份、南華縣14份、永仁縣16份、牟定縣16份、祿豐縣28份、雙柏縣26份。

1.1.2 試驗儀器

試驗過程中采用的儀器均由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物傳染病實驗室提供。

1.1.3 試驗試劑

RNA提取試劑盒，6×Loading Buffer購自大連寶生物；Bioteke細胞/組織基因組DNA和RNA提取試劑盒購自百泰克生物技術(shù)有限公司；Easy First-Strand cDNA Super Mix、2×TransTaq HiFi PCR Super Mix，TransTaq DNA Polymerase High Fidelity購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；異丙醇、75%乙醇、瓊脂粉、TAE緩沖液、雙蒸水、氯仿等由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)中心預(yù)防獸醫(yī)學(xué)實驗室提供。試驗中所需的陽性對照選取了 PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、JEV、PPV疫苗，均由楚雄州動物疫病預(yù)防控制中心和云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)傳染病實驗室提供。

1.1.4 PCR引物合成

PCR檢測引物序列參照云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物傳染病實驗室檢測所使用的引物序列，由昆明碩擎生物科技有限公司合成。

1.2 試驗方法

按照RNA和DNA提取試劑盒說明書提取精液中的RNA和DNA。采用RT-PCR和PCR法分別對提取的RNA和DNA進行目的基因片段擴增。取10 μL PCR擴增產(chǎn)物配制成體系后加樣到1.5%瓊脂糖凝膠（含0.2%EB）孔中，并在100 V電壓下電泳40 min，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果，并拍照。

2 試驗結(jié)果

2.1 種公豬精液中6種繁殖障礙性病毒病原檢測結(jié)果

對來自云南楚雄州10縣（市）的212份精液樣品分別進行豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）、偽狂犬病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）和豬乙型腦炎病毒（JEV）檢測。結(jié)果顯示，檢測出PRRSV陽性樣品16份，陽性率7.55%（16/212）；檢測出CSFV陽性樣品2份，陽性率0.94%（2/212）；檢測出PCV-2陽性樣品38份，陽性率17.92%（38/212）；檢測出PRV陽性樣品2份，陽性率0.94%（2/212）；未檢測出PPV和JEV陽性樣品（見表1）。

表1 6種繁殖障礙性病毒性病原檢測統(tǒng)計結(jié)果

2.2 不同地區(qū)檢測結(jié)果統(tǒng)計

由表2可知，大姚縣采集的20份樣品中檢測出14份攜帶PCV-2，檢出率為70%，檢出率最高；元謀縣的10份樣品中檢測出6份精液攜帶病毒（4份攜帶PCV-2、2份攜帶PRV），病毒檢出率為60%，且是唯一檢出PRV病毒的縣；祿豐縣的28份樣品中檢出16份攜帶PRRSV，病毒檢出率為57.14%，為唯一檢測出PRRSV的縣；雙柏縣的26份樣品中檢測出4份攜帶病毒（2份攜帶CSFV、2份攜帶PCV-2），病毒檢出率為15.38%，為唯一檢測出CSFV的縣；南華縣的14份樣品中檢出8份攜帶PCV-2，病毒檢出率為57.14%；武定縣的16份樣品中檢出4份攜帶PCV-2，病毒檢出率為25%；姚安縣的10份樣品中檢出2份攜帶PCV-2，病毒檢出率為20%；永仁縣的16份樣品中檢出4份攜帶PCV-2，病毒檢出率為25%；楚雄市的56份樣品中均未檢出攜帶病原；牟定縣的16份樣品中均未檢出攜帶病原。在此次采集的所有樣品中均未檢出JEV和PPV（見表2）。

3 討論與分析

3.1 PRRSV感染情況分析

從采集的212份樣品中檢測出PRRSV陽性樣品16份，樣品陽性率為7.55%。姜佳佳等[1]在2016年對廣西地區(qū)15個中小規(guī)模種豬場公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為48.39%。吳永剛[2]2013年對四川省6個地區(qū)豬場的126份公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為11.9%。趙謙等[3]2016年對云南部分地區(qū)規(guī)?；i場的212份種公豬精液進行PRRSV檢測，陽性率為7.08%。對比可知，此次調(diào)查結(jié)果顯示PRRSV陽性率屬適中水平。但從地區(qū)分布來看，16份PRRSV陽性樣品均來自祿豐縣的精液樣品中，占該地區(qū)樣品數(shù)的57.14%；其他地區(qū)均未檢出PRRSV。從地理位置可知，祿豐縣是楚雄州連接云南昆明和四川的重要交通樞紐，生豬流通量較大，疫情情況較復(fù)雜。因此，需要加強祿豐縣的疫情監(jiān)測工作，加強種豬精液質(zhì)量安全檢測，及時淘汰攜帶PRRSV的種公豬，及時切斷傳染源是控制PRRS疫病傳播和流行的重要措施。

表2 不同地區(qū)檢測結(jié)果統(tǒng)計表

3.2 PCV-2感染情況分析

在212份豬精液樣品中檢測出PCV-2陽性樣品38份，占所有樣品數(shù)的17.92%，為所檢測的6種病毒中陽性率最高的1種。姜佳佳等[1]對廣西地區(qū)15個中小規(guī)模種豬場公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為3.23%。吳永剛[2]對四川省6個地區(qū)豬場的126份公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為2.38%。趙謙等[3]對云南部分地區(qū)規(guī)模化豬場的212份種公豬精液進行PCV-2檢測，陽性率為6.6%，此次調(diào)查結(jié)果顯示PCV-2陽性率（17.92%）處于較高水平。從區(qū)域分布來看，38份陽性樣品分別來自元謀縣、大姚縣、姚安縣、武定縣、南華縣、永仁縣、雙柏縣等7個縣，占楚雄州的70%。其中，大姚縣和南華縣PCV-2陽性率較高，分別為70%和57.14%。PCV-2在楚雄州陽性率較高且分布廣泛。主要是PCV-2在我國大多數(shù)豬場廣泛存在，致病率高，僅少部分豬表現(xiàn)臨床癥狀，目前尚未引起政府和生產(chǎn)企業(yè)的高度重視，且PCV-2未被列入楚雄州重大動物疫病防治和監(jiān)測范圍。PCV-2可使豬群產(chǎn)生嚴重的免疫抑制，容易使感染豬并發(fā)或繼發(fā)其他病毒性疾??；此外PCV-2可通過精液垂直傳播，且斷奶仔豬對PCV-2最易感。因此，加強對PCV-2的監(jiān)測及防治，及時淘汰帶毒種豬，切斷傳染源，開展PCV-2疫病凈化，對進一步提高養(yǎng)殖企業(yè)生產(chǎn)效率尤為重要。

3.3 CSFV感染狀況分析

212份精液中檢測出CSFV陽性樣品2份，占所有樣品數(shù)的0.94%。姜佳佳等[1]對廣西地區(qū)15個中小規(guī)模種豬場公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為16.94%。吳永剛[2]對四川省6個地區(qū)豬場的126份公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為3.17%。趙謙等[3]對云南部分地區(qū)規(guī)?；i場的212份種公豬精液進行CSFV檢測，陽性率為3.77%。從總體看，此次調(diào)查結(jié)果顯示CSFV陽性率（0.94%）處于較低水平。從地區(qū)分布來看，2份CSFV陽性樣品來自雙柏縣，占地區(qū)樣品數(shù)的7.7%。其他地區(qū)均未檢出CSFV。CSFV作為養(yǎng)豬業(yè)危害較大的動物傳染病，政府將其作為重大動物疫病來監(jiān)測和防治，但該病毒在養(yǎng)殖生產(chǎn)中依然零星存在，尤其在種公豬體內(nèi)，且種公豬不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，CSFV可通過精液傳播，給該病的防治和根除增加了困難。加強CSFV的監(jiān)測，加強供精站點精液質(zhì)量安全監(jiān)管，及時消除傳染源，積極開展動物免疫，是根除該病的重要手段。

3.4 PRV感染狀況分析

212份精液中檢測出PRV陽性樣品2份，占所有樣品數(shù)的0.94%。姜佳佳等[1]對廣西地區(qū)15個中小規(guī)模種豬場公豬精液進行PRV檢測，陽性率為5.24%。吳永剛[2]對四川省6個地區(qū)豬場的126份公豬精液進行PRV檢測，陽性率為3.17%。趙謙等[3]對云南部分地區(qū)規(guī)?；i場的212份種公豬精液進行豬PRV檢測，陽性率為3.3%。從總體看，此次調(diào)查結(jié)果顯示PRV陽性率處于較低水平。從地區(qū)分布來看，2份PRV陽性樣品來自元謀縣，占地區(qū)樣品數(shù)的20%。其他地區(qū)均未檢出PRV。雖然PRV陽性率較低，但在種豬精液中依然存在，該病通過精液傳播的風(fēng)險較大，因此定期對豬群進行PRV疫苗免疫，全面開展PRV監(jiān)測，及時淘汰陽性豬，能夠有效地控制和根除該病。

3.5 不同地區(qū)感染狀況分析

由調(diào)查結(jié)果可知，楚雄州種公豬精液病原檢出率最高的地區(qū)為大姚縣（20份樣品中14份攜帶PCV-2），其次為元謀縣（10份樣品中6份攜帶病毒）。種公豬精液病原檢出率最低的地區(qū)為楚雄市和牟定縣，病原檢出率均為0。通過實地調(diào)查及查閱各地畜牧科技推廣相關(guān)資料可知，大姚縣和元謀縣的豬人工授精站點數(shù)量分布較少，且供精站點大多以小規(guī)模個體養(yǎng)殖戶為主。楚雄市和牟定縣均為楚雄州生豬存欄數(shù)量較大的縣市，2地區(qū)豬人工授精站點分布較多，且供精站點多以中大規(guī)模生產(chǎn)企業(yè)為主，企業(yè)相互之間存在較強的市場競爭，精液品質(zhì)直接影響企業(yè)效益。綜上所述，生產(chǎn)企業(yè)的規(guī)模與種豬精液品質(zhì)安全有一定關(guān)系，中大規(guī)模生產(chǎn)企業(yè)更注重種豬精液的品質(zhì)安全，小規(guī)模個體戶受制于生產(chǎn)技術(shù)和管理水平，種豬精液品質(zhì)難以保障。一定區(qū)域內(nèi)企業(yè)之間的市場競爭，有利于種豬精液品質(zhì)的提高。