載脂蛋白E基因多態(tài)性與初發(fā)急性缺血性腦卒中的相關(guān)性及其對近期預(yù)后的影響

楊春梅，劉圓圓

腦卒中具有高發(fā)病率、高致殘率、高致死率和高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)，給世界各國，尤其是發(fā)展中國家?guī)砗苤氐慕?jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。75%以上的腦卒中為缺血性腦卒中(acute ischemic stroke, AIS)[1-2]，AIS的發(fā)生受高血壓、吸煙、飲酒、基因多態(tài)性等多種危險(xiǎn)因素的影響[3]。載脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)在富含三酰甘油的脂蛋白代謝過程中發(fā)揮重要的作用。ApoE基因多態(tài)性是由其編碼基因19q13.2第4號外顯子的堿基替換引起的，ApoE E3等位基因在人群中的頻率為79%，稱為“野生型”[4]。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，ApoE基因多態(tài)性與腦血管疾病的發(fā)病率及預(yù)后密切相關(guān)[5]：與ApoE E3等位基因相比，E2等位基因增高機(jī)體三酰甘油和膽固醇水平；E4等位基因使血清中膽固醇、低密度脂蛋白(LDL)和載脂蛋白B(ApoB)水平升高，導(dǎo)致動脈粥樣硬化、高脂血癥及其他心血管疾病[6，7]。血漿中ApoE水平升高可增加腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)，然而關(guān)于ApoE等位基因多態(tài)性與AIS關(guān)系及其近期預(yù)后預(yù)測價(jià)值仍存在爭議。本研究旨在闡明ApoE基因型多態(tài)性在預(yù)測中國AIS近期預(yù)后的作用。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2016-01至2018-01在我院住院治療的急性AIS患者445例，作為初發(fā)AIS組。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國急性缺血性腦卒中診療指南 (2014)，通過CT或MRI確診。排除既往腦卒中病史、原發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血病史，以及癡呆病史的患者。同時(shí)選取健康體檢者363名作為對照組，排除標(biāo)準(zhǔn)同上。

1.2 方法 急性AIS患者在入院時(shí)(24 h內(nèi))由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師使用改良Rankin量表(modified Rankin scale, mRS)進(jìn)行評估。在患者出院6個(gè)月后對其進(jìn)行電話隨訪，記錄mRS評分。兩組均進(jìn)行以下操作：

從全血樣品中提取基因組DNA(QIAGEN)，采用熒光定量PCR的方法檢測ApoE基因分型。引物序列如下：上游引物5′-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC；下游引物5′-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA。

采用羅氏5800全自動生化分析儀，檢測血清中的總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)及空腹血糖水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組ApoE基因型分布及一般臨床資料比較 兩組在年齡、性別、高血壓病史、糖尿病史、冠心病史、吸煙比例、血脂，以及空腹血糖等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2.2 兩組ApoE基因型分布 ApoE基因經(jīng)熒光定量PCR擴(kuò)增后，可分為3種常見基因型：E2(E2/E2、E2/E3)，E3(E3/E3、E2/E4)，E4(E3/E4、E4/E4)，本研究僅在初發(fā)AIS組出現(xiàn)1例E2/E4患者，在基因型統(tǒng)計(jì)處理中，將其歸于E3基因型。初發(fā)AIS組 ApoE基因型分布與對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=13.31，P<0.01，表2)。

表1 初發(fā)AIS組與對照組的一般情況比較 (n;%)

表2 初發(fā)AIS組與對照組ApoE基因型的分布 (n;%)

注：兩組ApoE基因型比較，χ2=13.31，P<0.01

2.3 初發(fā)AIS患者24 h內(nèi)mRS評分與ApoE等位基因分布 初發(fā)AIS組患者入院后24 h內(nèi)進(jìn)行mRS評分，根據(jù)mRS評分將受試者分為兩組，mRS≤2(n=248)組和mRS>2組(n=197)。兩組均以E2型最少，E3基因型占優(yōu)勢。但mRS>2組患者ApoE基因型分布與mRS≤2組顯著不同(χ2=7.70，P<0.01，表3)。

表3 入院24 h內(nèi)初發(fā)AIS患者mRS評分與ApoE等位基因的分布 (n;%)

注：兩組ApoE基因型比較，χ2=7.70，P<0.01

2.4 初發(fā)AIS患者6個(gè)月后mRS評分與ApoE基因型的分布 患者出院后6個(gè)月電話回訪，并進(jìn)行mRS評分，mRS≤2組患者由入院時(shí)的248例增加至367例，mRS>2組的患者由入院時(shí)的248例減少至78例。出院6個(gè)月后，mRS>2組患者ApoE基因分型與mRS≤2組顯著不同(χ2=11.31，P<0.01，表4)。

表4 出院6個(gè)月后初發(fā)AIS患者mRS評分與ApoE基因型的分布 (n;%)

注：兩組ApoE基因型比較，χ2=11.31，P<0.01

3 討 論

ApoE是調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇和三酰甘油代謝中重要的載脂蛋白[8]。攜帶不同ApoE等位基因的人群，其LDL-C水平也不相同，通常攜帶E2等位基因的人群LDL-C水平最低, 攜帶E4等位基因的人群LDL-C水平最高，而攜帶E3等位基因者其LDL-C水平介于兩者之間[9]。但是，在本研究中并未發(fā)現(xiàn)ApoE不同等位基因與血脂的上述相關(guān)性，主要與大多數(shù)高脂血癥患者已經(jīng)服用降脂藥物治療有關(guān)。

研究發(fā)現(xiàn)，攜帶ApoE E4等位基因是動脈粥樣硬化的預(yù)測因素，并與AIS和出血性腦卒中的發(fā)生密切相關(guān)[10]。McCarron等[11]發(fā)現(xiàn)，ApoE E4等位基因增加腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)。Alberts等[12]證實(shí)，腦出血患者中攜帶ApoE E4 等位基因的存活率低于非ApoE E4 等位基因攜帶者。然而，一部分研究并未發(fā)現(xiàn)ApoE基因多態(tài)性與缺血性腦卒中發(fā)生的相關(guān)性，并且認(rèn)為其對AIS后的功能恢復(fù)沒有重大影響[13]。因此，ApoE等位基因多態(tài)性是否能夠作為AIS的風(fēng)險(xiǎn)因素及能否有助于預(yù)后判斷仍然存在爭議，導(dǎo)致爭議的原因可能包括：(1)研究對象的種族差異；(2)不同檢測方法得出的ApoE等位基因分型結(jié)果不完全一致；(3)樣本量過小，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)偏倚等。

本研究發(fā)現(xiàn)，初發(fā)AIS患者與對照組相比，ApoE基因型分布顯著不同。在初發(fā)AIS患者，ApoE基因型的不同分布不僅與入院時(shí)mRS評分密切相關(guān)，而且與出院后6個(gè)月mRS評分相關(guān)。提示ApoE基因多態(tài)性不僅與AIS初次發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)，而且與AIS的嚴(yán)重程度及短期預(yù)后有關(guān)。

總之，我們觀察到在初發(fā)AIS患者中ApoE多態(tài)性與AIS初次發(fā)生及預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)。但是，由于樣本量較小及種族的限制，本研究的結(jié)論需進(jìn)一步大樣本及多種族的研究結(jié)果來驗(yàn)證。